固定后细胞悬液储存：优化细胞保存的指南

细胞储存技术 2024年04月27日 13:28 353 im

　　固定后细胞悬液储存：优化细胞保存的指南

　　1. 引言

　　细胞储存对于生物医学研究、药物开发和临床应用至关重要。固定细胞悬液的储存可以保留细胞形态和蛋白表达，使其能够在不同时间点进行分析。本文提供了固定后细胞悬液储存的综合指南，涵盖从样本制备到长期储存的各个方面，以优化细胞保存并最大限度地利用。

　　2. 样本制备

　　细胞收获：使用适当的方法从培养物或组织中分离细胞，确保细胞完整性。

　　固定：利用 paraformaldehyde、戊二醛或乙醇等固定剂，在室温下固定细胞 15-60 分钟。

　　透性化：使用 Triton X-100 或其他去垢剂，透性化细胞膜，促进抗体的渗透。

　　3. 抗体标记

　　抗体选择：选择针对感兴趣蛋白的抗体，其特异性、亲和力和结合亲和力已得到验证。

　　抗体孵育：在室温或 4°C 下孵育细胞与抗体，孵育时间根据抗体浓度和细胞靶标而定。

　　洗涤：使用 PBS 或其他缓冲液洗涤细胞以去除未结合的抗体。

　　4. 储存培养基

　　选择：使用含有防腐剂（如NaN3）或抗氧化剂（如维生素 E）的缓冲液储存固定细胞。

　　浓度：缓冲液的浓度应与固定剂的浓度匹配，以防止细胞溶解或收缩。

　　 pH 值：缓冲液的 pH 值应在 7.2-7.6 之间，以保持细胞稳定性。

　　5. 储存容器

　　材料：选择不吸附蛋白质的储存容器，如聚丙烯或聚乙烯管。

　　大小：容器大小应与细胞数量相匹配，以最大限度地减少稀释和细胞沉淀。

　　密封：容器必须密封良好以防止污染和水分蒸发。

　　6. 储存条件

　　温度：理想的储存温度为 4°C，可防止细胞降解和抗体结合亲和力降低。

　　避光：细胞应避光储存，以防止光漂白和抗体褪色。

　　定期检查：定期检查细胞并更换储存培养基，以确保细胞完整性和保存质量。

　　7. 长期储存

　　冷冻保存：将细胞悬液在 -80°C 或液氮中冷冻保存，以实现长期储存。

　　保护剂：使用二甲基亚砜 (DMSO) 或其他保护剂，以防止细胞在冷冻保存过程中结冰损伤。

　　复苏：复苏前，通过逐步解冻和洗涤小心复苏冷冻的细胞悬液。

　　8. 质量控制

　　形态：显微镜检查细胞形态，以评估固定、标记和储存的有效性。

　　抗体结合：使用流式细胞术或其他方法，验证抗体的结合亲和力和特异性。

　　细胞计数：定期进行细胞计数，以监测细胞存活率和增殖。

　　9. 结论

　　固定后细胞悬液的储存对于细胞保存至关重要，可用于各种生物医学研究和临床应用。通过遵循最佳实践和实施严格的质量控制措施，可以优化细胞储存，以保留细胞形态、蛋白表达和抗体结合能力。这对于理解细胞生物学、开发新疗法和促进医疗进步至关重要。

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