流式细胞仪储存门的关键指南
流式细胞仪储存门的关键指南
引言
流式细胞仪储存门是区分细胞群体的基本技术，对于准确的免疫表型至关重要。正确设置储存门可以提高数据质量，确保可靠的分析。本指南将深入探讨流式细胞仪储存门的概念、步骤和最佳实践，以帮助您优化您的细胞分析工作流程。
1. 储存门的概念
储存门是逻辑门，用于根据特定参数，例如散射光或荧光强度，从细胞群中选择一个子集。这些门可以一层一层地创建，以逐个排除不感兴趣的细胞群，最终留下仅包含特定目标群体的子集。
2. 设置储存门的步骤
设置储存门的过程涉及以下步骤：
1. 选择合适的散射光参数：前向散射（FSC）和侧向散射（SSC）是用于区分基于大小和粒度的细胞群的主要散射光参数。
2. 绘制门区：使用散射光图，绘制一个门区以围绕感兴趣的细胞群。调整门的大小和位置以选择适当的子集。
3. 应用荧光标记：根据目标细胞群的免疫表型，应用荧光标记的抗体。标记的细胞将发出可检测的荧光信号。
4. 绘制荧光门：使用荧光图，绘制一个门区以围绕荧光标记的细胞群。调整门的大小和位置以最大限度地选择目标细胞群。
5. 逐个创建门：重复步骤 3 和 4，逐个应用额外的荧光标记和门，以进一步细化细胞群。
3. 创建逐级储存门的最佳实践
创建逐级储存门时，请遵循以下最佳实践：
最小化重叠：确保门之间尽可能少地重叠，以避免数据失真。
选择适当的统计参数：使用中位数、平均值或模式等适当的统计参数来设置门，以准确地表示细胞群。
验证门设置：使用阳性和阴性对照样本验证您的门设置的准确性。
使用补偿控件：应用补偿控件以校正不同荧光通道之间的溢出，确保准确的荧光标记。
记录门设置：记录门的位置和大小以及所用抗体的详细信息。这对于验证和重现结果至关重要。
4. 自动储存门
一些流式细胞仪软件提供自动储存门功能。这些算法利用预设的参数或机器学习来自动生成门区。虽然这可以节省时间，但可能不如手动放置的门准确。因此，始终建议仔细验证自动生成的门的准确性。
5. 储存门的应用
储存门在免疫表型和细胞生物学研究中有着广泛的应用，包括：
细胞表征：识别和表征不同的细胞群，例如淋巴细胞亚群、粒细胞和巨噬细胞。
细胞激活分析：测量细胞对刺激的激活水平，例如细胞因子或抗原。
细胞分选：分选出基于储存门的特定细胞群，用于进一步分析或应用。
临床诊断：检测疾病标记物和免疫缺陷。
6. 结论
流式细胞仪储存门是准确免疫表型和细胞分析的基础。遵循最佳实践并仔细验证门设置对于获得可靠和可重复的结果至关重要。通过有效利用储存门，研究人员可以深入了解细胞群的异质性和功能，从而推进科学研究和临床实践。
标签： 细胞储存管理
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