细胞储存液的制作指南

细胞储存保鲜的应用领域 2024年04月08日 14:03 80 im

　　细胞储存液的制作指南

　　简介

　　细胞储存是生物学和医学领域的一项重要技术，它使我们能够在低温条件下长期储存活细胞，以便在需要时取回并用于研究或治疗目的。细胞储存液是细胞储存的关键组成部分，它负责保持细胞的活力并防止冷损伤。本文将详细介绍细胞储存液的制作方法，包括必需的材料、步骤和注意事项。

　　材料

　　无血清培养基

　　血清蛋白（例如牛血清白蛋白或人血清白蛋白）

　　二甲基亚砜（DMSO）

　　 HEPES缓冲液

　　灭菌水

　　步骤

　　1. 准备培养基：

　　 - 从无血清培养基中移除所有生长因子和添加剂。

　　2. 添加血清蛋白：

　　 - 根据细胞类型的不同，将2-5%（重量/体积）的血清蛋白添加到培养基中。血清蛋白有助于稳定细胞膜并防止冷损伤。

　　3. 添加二甲基亚砜：

　　 - 缓慢添加二甲基亚砜（DMSO），最终浓度为5-10%（体积/体积）。DMSO是一种冷保护剂，可防止细胞在低温下形成冰晶。

　　4. 调节pH值：

　　 - 使用HEPES缓冲液调节培养基的pH值至7.2-7.4。合适的pH值对于保持细胞的完整性至关重要。

　　5. 灭菌：

　　 - 将准备好的储存液通过0.22微米过滤器灭菌。灭菌可去除任何可能污染细胞的细菌或真菌。

　　6. 分装和冷冻：

　　 - 将储存液分装到无菌容器中（例如冷冻管）。避免过度填充，因为低温下体积会膨胀。

　　 - 将容器缓慢冷冻至-80°C。

　　 - 对于长期储存，建议进一步将容器置于液氮中。

　　注意事项

　　细胞类型：不同的细胞类型可能需要不同的储存液配方。在配制储存液之前，请参考特定的细胞培养说明。

　　 DMSO浓度：DMSO是一种毒性物质，因此浓度过高可能会损害细胞。遵循推荐浓度并在使用前稀释储存液。

　　冷冻速度：缓慢冷冻对于防止细胞损伤至关重要。避免将储存液快速冷冻至低温。

　　灭菌：严格灭菌以防止污染，并使用无菌技术处理储存液。

　　储存温度：储存液应储存在-80°C或更低的温度下。长期储存应考虑使用液氮。

　　复苏：在复苏过程中，缓慢解冻储存液并逐渐稀释DMSO浓度。遵循细胞复苏的具体说明。

　　结论

　　细胞储存液是细胞储存过程中的重要组成部分。通过遵循本指南中概述的步骤和注意事项，可以制备出高质量的储存液，以有效地保存细胞活力，同时最大程度地减少冷损伤。通过适当的储存和复苏技术，这些储存的细胞可用于广泛的研究和治疗应用。

细胞储存：利与弊

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