免疫细胞低温储存的先进方法
免疫细胞低温储存的先进方法
1. 冻存前的细胞处理
分离纯化：从血液、骨髓或其他组织中分离出所需的免疫细胞，去除杂质和死细胞。
细胞计数和活力评估：精确计数细胞数量并评估其活力，确保细胞在冻存前处于最佳状态。
细胞浓缩（可选）：通过离心或超速离心将细胞浓缩到所需的体积，以减少冻存液的体积。
2. 冷冻剂的选择
二甲基亚砜（DMSO）：最常用的冷冻剂，具有良好的细胞渗透性和冰晶抑制作用。
聚乙二醇（PEG）：另一种常见的冷冻剂，比DMSO渗透性更低，可能对某些细胞类型更温和。
人血清白蛋白（HSA）：可以补充DMSO或PEG，提供额外的细胞保护。
3. 冻存程序
控制降温速率：将细胞悬液在含冷冻剂的溶液中以受控的速率逐步降温，通常为-1℃/min或-2℃/min。
冰晶形成控制：降温过程中，冷冻剂渗透到细胞内并抑制冰晶形成。
玻璃化转变：随着继续降温，细胞溶液达到低温玻璃化状态，没有形成冰晶。
4. 冻存介质的类型
血清：富含生长因子和营养物质，但含有血清蛋白，可能会干扰细胞功能。
无血清介质：不含血清蛋白，可减少细胞污染的风险。
低分子量溶液：包含低分子量化合物，如盐和缓冲液，可以帮助维持细胞渗透压。
5. 储存温度
液氮罐（-196℃）：最常见的储存方法，可以长期储存细胞而不显着丧失活力。
机械制冷冷冻机（-80℃）：可用于短期储存，但活性丧失率高于液氮罐。
超低温深冷冻机（-130℃至-150℃）：比-80℃更低的储存温度，可以进一步减少活性丧失。
6. 解冻程序
快速解冻：将细胞从液氮中取出并迅速在37℃水浴中解冻，避免细胞过度暴露于冰晶。
梯度解冻：将细胞从液氮中取出并逐步在37℃、25℃和4℃水浴中解冻，以减少渗透应激。
无菌条件：解冻过程应在无菌条件下进行，以防止细胞污染。
7. 解冻后的细胞处理
洗涤：用无血清介质洗涤细胞以去除冷冻剂和残留的冰晶。
计数和活力评估：解冻后计数细胞并评估其活力，以确保细胞健康状况良好。
培养：将解冻后的细胞转移到合适的培养基中进行培养和扩展。
结论
免疫细胞低温储存是一项重要的技术，用于保存和运输免疫细胞治疗和研究目的。通过仔细选择细胞处理方法、冷冻剂、冻存程序、储存温度和解冻程序，可以最大程度地减少活性丧失和维持细胞活力。这些先进的方法使我们能够安全有效地储存免疫细胞，为广泛的应用创造了可能性。
标签： 细胞储存的种类
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