DH5感受态细胞储存条件指南

生物细胞储存的概述 2024年04月14日 16:25 68 im

　　DH5感受态细胞储存条件指南

　　1. 储存温度

　　储存DH5感受态细胞的最佳温度为-80°C。

　　在该温度下，细胞的代谢活动极低，能够保持稳定长达数年。

　　2. 储存介质

　　将感受态细胞悬浮在含有15%甘油和50 mM NaCl的LB培养基中。

　　甘油充当冷冻保护剂，有助于防止细胞在冷冻和解冻过程中受到伤害。

　　3. 分装

　　将细胞悬液分装成100 μl或200 μl的等分试剂管或微孔板。

　　分装量应足够用于一次转化实验。

　　4. 冷冻

　　使用液氮或超低温冰箱将细胞悬液快速冷冻至-80°C。

　　快速冷冻可以形成玻璃化，防止细胞内形成冰晶，从而减少对细胞的损伤。

　　5. 解冻

　　从-80°C取出细胞后，立即将其置于冰上。

　　在冰上孵育2-5 分钟，直至悬液完全解冻。

　　不要反复冻融细胞，因为这会严重损害其活力。

　　6. 转化效率

　　冷冻和解冻过程可能会影响细胞的转化效率。

　　为最大限度地提高转化效率，在转化前将解冻的感受态细胞恢复培养 30-60 分钟。

　　7. 存储期限

　　在-80°C下适当储存，DH5感受态细胞通常可以保持活性长达6-12 个月。

　　然而，为了获得最佳结果，建议在库存耗尽之前使用感受态细胞。

　　储存注意事项

　　避免多次冻融细胞。

　　确保冷冻和解冻过程迅速进行。

　　在进行转化前恢复培养感受态细胞。

　　储存细胞时使用适当的冷冻保护剂。

　　定期检查储存条件，以确保细胞保持活力。

　　遵循这些储存条件将有助于保持DH5感受态细胞的活力和转化效率。始终遵循良好的实验室规范，并定期监控储存条件，以确保细胞的最佳状态。

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