细胞体外储存：维持细胞活性和功能的关键条件
细胞体外储存：维持细胞活性和功能的关键条件
储存温度
1. 液氮储存（-196°C）：最常用的储存方法，可长期保持细胞活力，适用于大多数细胞类型。
2. 超低温冰箱（-80°C）：可用于储存某些对温度敏感的细胞，如间充质干细胞。
3. 室温（20-25°C）：某些细胞，如外周血单核细胞，可在室温下短暂储存。
储存培养基
1. 无血清培养基：不含血清成分，可减少污染风险，适用于胚胎干细胞和诱导多能干细胞（iPSC）等细胞。
2. 血清补充培养基：含有血清成分，提供细胞生长所需的营养，适用于大多数细胞类型。
容器类型
1. 冷冻管：用于液氮储存，具有耐低温和快速冷冻解冻能力。
2. 冻存袋：也用于液氮储存，容量更大，适用于储存大量细胞。
3. 细胞培养瓶或孔板：用于超低温冰箱储存，提供细胞附着所需的表面。
冷冻保护剂
1. 二甲基亚砜（DMSO）：最常用的冷冻保护剂，可渗透细胞膜，降低冰晶形成。
2. 羟乙基淀粉：与DMSO协同作用，保护细胞膜免于冷冻损伤。
3. 血清蛋白：可与细胞膜结合，提供额外的保护。
冷冻程序
1. 缓慢冷冻：用于对温度敏感的细胞，以 -1°C/分钟的速率缓慢降低温度。
2. 快速冷冻：用于对温度不那么敏感的细胞，以 -80°C/分钟的速率快速降低温度。
3. 分级冷冻：结合缓慢冷冻和快速冷冻，以最佳地保护细胞活力。
解冻程序
1. 快速解冻：用于大多数细胞类型，在 37°C 水浴中快速解冻。
2. 缓慢解冻：用于对温度敏感的细胞，在逐渐升温的培养箱中缓慢解冻。
污染控制
1. 无菌操作：在无菌条件下执行所有程序，防止细菌和真菌污染。
2. 抗生素和抗真菌剂：添加至培养基中，抑制污染源的生长。
3. 定期监测：定期对储存细胞进行培养和观察，以检测污染迹象。
储存时间
细胞储存时间因细胞类型而异。以下是一些常见细胞类型的储存时间范围：
1. 胚胎干细胞：数年至数十年
2. iPSC：数年至数十年
3. 干细胞：数月至数年
4. 原始细胞：数月至一年
5. 免疫细胞：数小时至数天
维持储存条件
1. 定期监测：定期检查储存温度和培养基状况，确保 optimal conditions。
2. 设备维护：定期检查和维护储存设备，防止故障。
3. 应急计划：制定应急计划，以便在设备故障或其他紧急情况下保护储存细胞。
4. 标准化程序：建立标准化操作程序 (SOP)，确保一致的储存和处理实践。
5. 培训：对所有人员进行培训，以确保对储存条件和程序的了解和遵守。
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