细胞储存蛋白质：从采集到保存的完整指南
细胞储存蛋白质：从采集到保存的完整指南
1. 细胞采集
- 选择合适的细胞来源，例如血液、骨髓或组织。
- 使用无菌技术收集细胞，以避免污染。
- 根据细胞类型，使用适当的采集方法，如针吸、离心或冲洗。
2. 细胞处理
- 分离细胞：去除不需要的细胞，如红血球或血小板。
- 洗涤细胞：使用培养基或盐溶液去除采集介质。
- 浓缩细胞：通过离心或过滤去除多余的液体，浓缩细胞悬液。
3. 储存介质制备
- 选择合适的储存介质，如液氮、二甲基亚砜 (DMSO) 或人白蛋白溶液。
- 配制储存介质，确保最佳细胞活力和保护。
- 根据细胞类型，调整储存介质的组成和浓度。
4. 细胞悬浮
- 将细胞沉淀物小心悬浮在储存介质中。
- 缓慢振荡或搅拌悬液，以确保均匀混合。
- 控制细胞浓度，避免细胞过密或稀释。
5. 分配和分装
- 将细胞悬液分配到合适的容器中，如冷冻管或安瓿瓶。
- 标记容器，注明细胞类型、采集日期、储存介质和其他相关信息。
- 分装时避免引入气泡，因为这会影响细胞活力。
6. 冷冻保存
- 采用受控速率冷冻 (CRF) 方法，缓慢冷却细胞至 -80°C 至 -196°C。
- 使用合适的冷冻设备，如机械冷冻器或液氮罐。
- 缓慢的冷却速率可防止细胞损伤和冰晶形成。
7. 液氮保存
- 将冷冻的细胞转移到液氮罐中，以长期储存。
- 液氮提供超低温环境 (-196°C)，可长期保持细胞活力。
- 确保液氮的定期补充，以维持超低温。
8. 复苏
- 复苏细胞时，使用受控速率复苏 (RT) 方法，缓慢升温细胞至室温。
- 使用合适的加热设备，如水浴或加热板。
- 缓慢的复苏速率可防止细胞损伤和冰晶形成。
9. 活力评估
- 复苏后，评估细胞活力。
- 使用荧光染料或其他测试方法，确定细胞存活率和功能。
- 良好的活力表明细胞储存过程的成功。
10. 细胞培养
- 复苏后，将活细胞接种到培养皿或培养瓶中。
- 提供合适的培养条件，如合适的培养基、温度和 CO2 浓度。
- 观察细胞生长和增殖，以评估细胞功能和健康状况。
结论
细胞储存蛋白质是一个复杂的过程，涉及多个步骤，从细胞采集到长期保存。每个步骤对于保持细胞活力和功能至关重要。通过遵循本指南，可以有效地储存细胞蛋白质，用于各种研究、治疗和商业应用。
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