免疫细胞分离实验报告（淋巴细胞的分离实验报告）

本文目录一览：

• 1、小鼠免疫器官的获取及淋巴细胞的分离实验的结果与分析怎么写，求模板
• 2、简述主要免疫细胞分离方法和分离原理？
• 3、外周血单个核细胞的分离实验是生理还是生化

小鼠免疫器官的获取及淋巴细胞的分离实验的结果与分析怎么写，求模板

“小鼠免疫器官摘取及淋巴细胞分离”实验过程

1. 培养皿加入纱布，在纱布上滴2ml淋巴细胞分离液。

2. 脱颈处死小鼠，在75%酒精中浸泡30s(示意消毒小鼠)。

3. 无菌条件下将腹部剪开，脱皮。(2min)

4. 选取小鼠腹部左侧，剪开腹膜，深红色细长组织即脾脏（淋巴细胞组织）

5. 用镊子从下方夹取脾脏，，剔除结缔组织和脂肪后，将组织置于滴有小鼠淋巴细胞分离液的纱布上。

6. 脾脏用弯头镊子在纱布上研磨至无血色组织后，纱布上加入1ml淋巴细胞分离液，再用移液器吸取研磨的液体，移至1.5ml离心管内。(3min)

7. 离心（1500rpm,3min）留上清，移入新的15ml 离心管中，去除红细胞，此时可以取胸腺。(可以做到这里停止，示意淋巴细胞和免疫器官胸腺)

8. 在装有上清的离心管中加入3ml 1640培养基，离心1500rpm，3min，取沉淀，弃上清，重复清洗2次。（6min）

9. 在显微镜下将细胞浓度调为5×106个/ml备用。

简述主要免疫细胞分离方法和分离原理？

免疫磁珠法分离细胞原理：

免疫磁珠法分离细胞是基于细胞表面抗原能与连接有磁珠的特异性单抗相结合，在外加磁场中，通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中，无该种表面抗原的细胞由于不能与连接着磁珠的特异性单抗结合而没有磁性，不在磁场中停留，从而使细胞得以分离。

免疫磁珠法分为阳性分离法和阴性分离法：

阳性分离法－磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞

阴性分离法－磁珠结合不需要的细胞，游离于磁场的细胞为所需细胞

一般而言，阴性分离法的磁珠用量比阳性分离法的大，阳性分离法用行更多。

BD™ Imag 磁珠：

· 大小在0.1－0.45mm

· 包被了BD Pharmingen生产的高质量单抗

· 磁珠已为白细胞亚群的阳性和阴性分离法所优化

· 用于BD™ IMagnet direct magnet

将包被了特异性单抗的BD IMag磁珠加入细胞悬液，磁珠特异性地与有相应抗原的细胞亚群结合，通过BD™ IMagnet direct magnet分离得到的连有BD IMag磁珠的细胞可直接用于功能试验和用流式细胞仪检测。

缺点：

• 对细胞造成机械压力，影响其生物学活性，不利于分离后培养

• 纯度低

• 容易阻塞FCM的喷嘴

BD IMag吸收大磁珠和小磁珠分离系统的优点，开发出直径约200nm中等大小磁珠。

• 技术简单，分离在普通的试管中完成

• 易于增大细胞用量

• 对细胞温和，不影响细胞功能及其分离后培养，可直接上流式

• 纯度高，回收率高

• 成本低

此外，Mouse lineage panel中biotin标记的抗体还可用于FCM分析细胞表面抗原，以及进行细胞/组织免疫荧光实验。

BD提供2种免疫磁珠：

· 包被了针对白细胞亚群的单抗的磁珠

· 包被了链霉亲和素（streptavidin）的磁珠：此种情况下，在实验系统中加入生物素标记的单抗，磁珠通过streptavidin与生物素标记的单抗结合，单抗与细胞表面相应抗原特异性结合而使细胞被磁珠间接捕获，从而达到分离。这种磁珠使研究者可根据自己需要选择生物素标记的各种单抗去分离目的细胞，应用范围更广泛，使用更灵活。

不同物种磁珠分离试剂

人： CD3, CD4, CD8, CD14, CD19；

小鼠： CD4, CD8a, CD14, CD45R/B220, CD90.2 (Thy1.2), CD11b, Ly-6G.

ë 利用Streptavidin连接的磁珠，只需选配biotin标记的所需单抗,就能分离更多种类细胞

新货聚焦：

现在，BD PMG又推出用于分离小鼠造血干细胞/祖细胞的新试剂mouse lineage panel。

其中包括5种biotin标记单抗，这些单抗能结合小鼠造血细胞的主要分化系细胞: T、B淋巴细胞，单核/巨噬细胞，粒细胞和红细胞。将这组试剂与Streptavidin Plus BD™ IMag Particles (557812) 联合使用，就能通过免疫磁性分离法去除小鼠骨髓造血细胞的主要分化系细胞，从而富集到造血干细胞和祖细胞（阴性片断）。

Mouse Lineage Panel（559971）：（5×2ml/vial） 可分离109 Mouse骨髓细胞

1) Biotin-anti-mouse CD3e (CD3 e chain)；

2) Biotin-anti-mouse CD11b；

3) Biotin-anti-mouse CD45R/B220；

4) Biotin-anti-mouse Ly-6G and Ly-6C (Gr-1)；

5) Biotin-anti-mouse TER-119/Erythroid Cells (Ly-76)

磁分离细胞的重要指标是：

纯度和得率，这取决于磁珠所连接单抗的特异性和磁珠大小（磁性），然而太大的磁珠会影响细胞活性，也无法直接上流式。

目前市场上有2种磁性细胞分离系统：

* Small particles (≈50 nm) － MACS

* Large particles (1200~4500 nm) －others（如Dynal）

小磁珠 优点：

• 对细胞温和，不影响分离细胞的后续培养

• 可直接上流式检测，不影响散射光

缺点：

• 需要很强的磁场来分离细胞

• 分离速度很慢，得率不高

• 需要一次性的分离柱，不能在普通试管进行

• 成本昂贵

大磁珠

• 技术简单，分离可在试管中完成

• 易于增减细胞用量

• 速度快，得率高

• 成本低

外周血单个核细胞的分离实验是生理还是生化

是生化实验。

实验方法原理

体外测定免疫细胞的数量和功能常需将某种免疫细胞首先分离出来。本实验是采用密度梯度离心法分离单个核细胞(mononuclearcell)。单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞(monocyte)。血液中各种细胞的大小和比重不同，因此，可用不同比重(密度)的分离液使不同比重的细胞在离心沉降过程中按相应密度梯度分布，从而达到分离各种细胞的目的，入单个核细胞的比重为1.075~1.090，而红细胞、粒细胞等的比重在1.092左右，因此，将血液轻轻加在比重为1.076~1.078的分离液上，使成一界面，再经离心，即出现分层，最上面为血浆层，界面处有一白色云雾状细胞层即为淋巴细胞和单核细胞，而红细胞和粒细胞则沉于管底。分离液的比重受温度变化的影响，实验应在室温(20℃)下进行，若实验时，室内温度低于20℃则先将分离液在37℃水浴中高于 20℃的夏季，得率可能偏低。

实验材料人静脉血(每毫升血用20单位肝素抗凝)

试剂、试剂盒聚蔗糖-泛影葡胺(Ficoll-Isopaque)淋巴细胞分离液(比重1.077±0.001) Hanks液95%甲醇水溶液Jenner (May-Grunwald)染液Giemsa染液95%乙醇

仪器、耗材圆底小试管1ml或2ml吸管毛细吸管载玻片水平式离心机