细胞化学法:是指在不破坏细胞形态结构的状况下,用生化的和物理的技术对各种组分做定量的分析,研究其动态变化,了解细胞代谢过程中各种细胞组分的作用。
在细胞内脂类的显示可以采用自发荧光或吸收荧光素的方法,确定脂类的位置与分布状态。
扩展资料:
蛋白质的显示:
显示蛋白质所用的米氏反应,其中硝基汞试剂作用于细胞中蛋白质侧链上的酪氨酸基,形成红色沉淀,在重氮基反应中氢氧化重氮与酪氨酸、色氨酸和组氨酸基反应形成有颜色的复合物。
某些碳水化合物、酯类和DNA可用对其醛基有特异结合的试剂,如雪夫氏试剂。对核酸的染色方法与核苷酸磷酸、碳水化合物和嘌呤及嘧啶的三种成分的特性有关。
参考资料来源:百度百科-细胞化学
指在抗体上结合萤光或可呈色的化学物质,利用免疫学原理中抗原和抗体间专一性的结合反应,检测细胞或组织中是否有目标抗原的存在,此方式不只可以用来测知抗原的表现量也可观察抗原所表现的位置。只要是能够让抗体结合的物质,也就是具有抗原性的物质包括蛋白质、核酸、多糖、病原体等都可侦测。
免疫组织化学的优势在于专一性、灵敏度、简便快速以及成本低廉,所以广为医院采用,通常是借由特定的肿瘤标记来筛选癌症。免疫组织化学染色法对基础研究及预防和诊疗上都是相当重要的一个方法。
扩展资料
应用的基本原则简述如下:
1、确定细胞类型和形态。组织细胞内有些蛋白具有组织特异性,如胶质原纤维酸性蛋白只存在于星形胶质细胞内,神经丝蛋白只存在于神经细胞内。通常把这些具有组织特异性的蛋白称为标记性蛋白。通过标记性蛋白的特异性抗体可确定细胞种类。
有些细胞在光镜下不易辨认,通过对胞质内的特定蛋白实施免疫组化染色,便能清楚显示此类细胞外形轮廓。这种作用在神经科学研究和肿瘤临床病理中显得尤为重要。
2、辨认细胞产物的来源。利用某些细胞产物为抗原,制备相应的抗体,对组织细胞实施免疫组织化学染色,以确定细胞产物的来源。如内分泌细胞产生的各种激素,大多数可用免疫组化染色技术辨认,据此可研究细胞的分泌功能及对内分泌肿瘤作功能分类,检测分泌异位激素的肿瘤等,了解细胞分化程度。
3、确定细胞的分化程度。不同的同一类细胞多表达不同的标志性蛋白,根据对这些不同蛋白的鉴定可确定细胞的分化程度。例如,神经上皮细胞的标志性蛋白是巢蛋白,当其分化为放射状胶质细胞时表达波形蛋白。
在神经元发生期分化为成神经细胞时则表达Ⅲβ神经微管蛋白,成神经细胞分化为成熟的神经元时表达神经丝蛋白。
4、追踪神经纤维束和它的投射区。用于此目的的免疫组织化学方法常与轴浆运输示踪法相结合来研究神经元之间的联系,轴浆运输示踪法是利用某些物质可被神经末梢摄取,经轴质逆行运输到胞体的特点,用组织化学方法显示出神经元的轮廓。常用示踪剂有辣根过氧化物酶和荧光金等。
5.在临床病理中的应用。如鉴定病变性质,发现微小病灶,探讨肿瘤起源或分化表型,确定肿瘤分期,指导治疗和预后。辅助疾病诊断和分类,寻找感染病因等。
参考资料来源:百度百科-免疫组织化学染色法
参考资料来源:百度百科-免疫组织化学
博凌科为免疫细胞化学技术是用已知的抗体检测组织与细胞中相应抗原的方法,但抗原抗体相结合的复合物在显微镜下是看不见 的,必须用特殊的标记物对抗体或抗原抗体复合物进行标记,才能使抗原抗体复合物在显微镜下具有可见性.常用的标记物有以下几种:⑴ 荧光素 用荧光素标记已知 抗体,再与组织或细胞中的相应抗原结合,在荧光显微镜下检测荧光素所发荧光,便可知抗原的分布部位,常用的荧光素有绿色 荧光的异硫氰酸荧光素和红色荧光的罗达明B200等.⑵ 酶 用酶标记已知抗体,再 与组织或细胞中的相应抗原结合,利用酶细胞化学方法显示该标记酶以达到显示抗原的目的.常用的标记酶如辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase)与其底物H2O2和 氨基联苯胺相遇时,形成的棕色沉淀可在光镜下观察到,遇锇酸反应后形成锇黑电镜下呈高电子密度.⑶ 胶体金 将 胶体金与抗体结合形成金标记抗体,再与相应的抗原结合,形成显微镜下可见的电子致密的金颗粒.常用的胶体金颗粒直径为5~60nm.⑷ 亲和物质 亲 和物质是一种有多价能力的物质,不仅与另一种亲和物质有高度的亲和力,而且可与抗体蛋白及各种标记物如荧光素、酶、胶体金等结合,因而可以通过荧光显微镜、酶加底物显色反应等定位某种特异分子.常用的亲和物质系统有生物素-亲和素系统、葡萄球菌A蛋白-免疫球蛋白系统.⑸ 铁蛋白 将 铁蛋白通过一种低分子的双功能试剂与抗体相结合,它既保留了抗体的免疫活性又具有显微镜下可见的高电子密度核心.
免疫组织化学(immunohistochemistry)又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。
它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用,在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。 免疫组化技术近年来得到迅速发展。50年代还仅限于免疫荧光技术,50年代以后逐渐发展建立起高度敏感,且更为实用的免疫酶技术。
关键词:免疫细胞化学法