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外泌体一次注射多少剂量(外泌体注射浓度)

2022-12-22 03:59:10 作者:max
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什么是外泌体保存液,外泌体保存液介绍

外泌体的实验的基础,很多童靴认为这是最简单的。如果你真的这么认为,那么就大错特错了。收集样本有不同的要求,一个比一个重要。那该如何去选择我们的实验样本?取样的时候又该注意些什么?分离好后的外泌体又如何保存呢?

一、外泌体样本的选择和注意事项

实验样本不同在收集的时候需要注意的点不同。你研究的是哪种样本,需要特别注意哪些方面呢?看以下阐述:

1、细胞上清

选用细胞培养上清作为分离外泌体的实验材料不会像血样等存在样本量限制的问题,而且操作简单,直接离心即可。但在细胞培养过程中需注意污染、培养时间、细胞死亡率及FBS的问题。和所有的细胞实验一样,培养过程中不允许有污染,但有些培养细胞本身带有病毒基因组,在培养过程中会释放出病毒颗粒,这就要衡量病毒颗粒是否会影响后续实验。

一般培养24-48h后细胞即可分离外泌体,在特殊情况下,如在培养基中添加特殊的化学物质,培养15-60min即可收集。因细胞死亡会分泌小体,所以在研究外泌体时细胞的死亡率一定要控制 5% 之内。未经处理的FBS中含有大量的外源外泌体,所以细胞培养一定要用经过处理不含外泌体的FBS。

2、唾液

唾液的成分会因取样的位置和时间不同而不同,所以同血样一样需定点定时。唾液主要由舌下腺,颌下腺及腮腺3个腺体分泌,所以不同位置的唾液成分不同,在收集的时候需固定位置或是收集所有的唾液。不同时间段的唾液成分也会不一样,所以也需定时取。其他如吸烟进食都是禁止的,一般建议采样1h之内不能有进食行为,包括饮料,且不要剧烈运动,在平息状态下取样。最后一点,不能刷牙。

3、血液

在第一次外泌体课程的时候,就有许多同学问到关于血清和血浆选择的问题,那到底应该选哪个呢?血浆=血液-血细胞 血清=血浆-纤维蛋白原-凝血因子

分不清楚两者的弄清血清的来源就能牢牢记住啦。血清是血液凝固之后收集的液体,所以其中少了纤维蛋白原,凝血因子,以及多了很多凝血产物。纤维蛋白原可转化为纤维蛋白,具有凝血功能。在凝血过程中血小板会分泌大量的外泌体,有研究发现血清中有接近50%的外泌体来自额外的分泌。所以一般实验选择血浆,在特殊情况下,如研究与血小板相关的疾病的时候,当然是血清更适合。

受限于样本,血样一般取2ml。那取血样的时候有什么注意的地方呢?在外泌体的血样研究中,经常被忽略的一个问题就是针头的大小。在抽血过程中,血液流经针头的时候会产生剪切力,若针头太细,剪切力较大,会使细胞破碎或刺激血小板分泌外泌体,从而影响后续的实验。有些文献报道21号针头的大小比较合适作为外泌体研究的血样收集。其他诸如采血的位置,人的生理周期,饮食周期及时间周期(24h)等都会影响样品中的外泌体。所以取样的时候尽量定点定时。最后还需注意,尽量在采血30min内处理样本,因血液收集在收集管中时,血细胞和血小板还会分泌外泌体。

4、鼻涕

研究鼻涕有一个特殊的价值,其可以探索治疗性外泌体。啥是治疗性外泌体?在脑部的疾病治疗中,药物可以外泌体的方式注射到鼻腔,这样药物就可以避开血脑屏障。鼻涕的收集与许多环境因素相关,如年龄、季节、性别 、城市、过敏史及职业风险。鼻涕的收集方法没有统一标准,只需保证所有样本取样方法一致即可。

5、尿液

在尿液的取样中,除性别、年龄、进食等影响外,还有一个特殊的点即是尿液的新鲜程度,这个新鲜度指的是尿液在膀胱中存在的时间。

6、乳汁

乳汁中存在的外泌体、抗体等会影响新生儿的发育,具有较大的研究价值。泌乳的阶段、 胎次、膳食、泌乳量、是否是母乳喂养、母亲的健康状态、精神状态等都会影响外泌体的分泌。需要注意的是乳汁中含有大量的脂蛋白,会对后面分离外泌体产生影响。

7、脑脊液

脑脊液研究面临的困难主要在样本的获取及样本中外泌体丰度少,有木有一种雪上加霜的感觉。那这个问题如何解决?国外可购买商业正常样本或者使用其他疾病样本作为对照。

二、外泌体的保存

对于外泌体的保存,和其他分子样品一样,提取的外泌体低温保存即可,短时间(一周之内)可放4度,长时间放-20或-80。也有人认为放4度更好,怕低温冻融会影响外泌体的完整性,但目前还没有一个定论,而且大部分文献认为没有影响。那到底放几度呢?有一招,分装放-20或-80,是不是妥妥的。

优泌乐的用法用量

剂量应当由医生根据患者的需要决定。优泌乐可在将要进餐之前给药。必要时,优泌乐也可以在餐后马上给药。优泌乐制剂要通过皮下注射或持续皮下输液泵(见用法用量,使用和操作说明)用药,也可以肌肉注射(虽然不推荐这种用法)。必要时,优泌乐还可以静脉内给药,例如用于控制酮症酸中毒和急性疾病期间的血糖水平,或者用于控制手术中和手术后的血糖水平。皮下给药应当在上臂、大腿、臀部或腹部。注射部位应当轮流使用,同一个注射部位的注射一般每月不要超过1次。皮下给药时,注射优泌乐的时候要细心,确保不要注射到血管中。注射后,不要按摩注射部位。患者必须学会使用正确的注射技术。与普通胰岛素相比,优泌乐皮下注射后起效快,作用持续时间较短(2-5小时)。因为起效快,所以优泌乐注射(或通过持续皮下输注给药时的优泌乐推注)可以安排在很接近进餐的时间。任何胰岛素发挥作用的时间过程在不同的个体中或者在同一个体中的不同时间都可能有非常大的差别。和所有胰岛素制剂一样,无论在哪个部位注射,优泌乐都可以保持比可溶性胰岛素更快的起效时间,优泌乐的作用持续时间取决于剂量、注射部位、血供、温度和体力活动情况。根据医生的建议,优泌乐可以与长效的人胰岛素或口服磺脲类药物结合使用。使用和操作说明优泌乐笔芯要与有CE标记的注射笔搭配,按注射装置生产厂家提供的说明使用。a)用药前准备检查优泌乐溶液,溶液应当透明无色,如果优泌乐溶液看上去混浊、变浓、略微带有颜色或者发现有固体颗粒,则不能使用。下面是一般性描述,必须遵照每个注射笔的生产厂家使用说明安装笔芯,安装针头,进行胰岛素注射。b)注射1.洗手。2.选择注射部位。3.按说明清洁皮肤。4.去掉外面的针帽套。5.通过拉伸或夹紧使皮肤固定,按说明扎入针头。6.按下注射按钮推针。7.拔出针头,轻压注射部位几秒钟。不要揉搓注射部位。8.用外面的针帽套将针头拧旋下,安全销毁。9.注射部位应当轮流使用,同一个注射部位的注射一般每月不超过1次。c)混合胰岛不能把瓶装的胰岛素与笔芯装的胰岛素混合。d)通过胰岛素泵使用优泌乐只有某些Minimed和Disetronic的胰岛素泵可用于输注赖脯胰岛素。在输注赖脯胰岛素之前,应当仔细研究输液泵所附的生产厂家说明书。输液泵要使用正确的储药筒和导管,每48小时要更换输液器。插入输液器的时候要无菌操作。一旦发生低血糖,应当停止输注,直到低血糖缓解。如果发生反复或严重的低血糖,要通知医疗专业人员,考虑减少或停止胰岛素输注。泵发生故障或输液器出现堵塞可导致血糖水平迅速升高。如果怀疑胰岛素输注中断,要按照产品说明书中的说明处理,必要时通知医疗专业人员。通过胰岛素泵用药时,优泌乐不能与其他任何胰岛素混合。e)胰岛素静脉内用药赖脯胰岛素静脉注射应当按常规临床实践中的静脉注射操作,例如通过静脉推注或者通过输液系统注射。需要经常监测血糖水平。赖脯胰岛素在0.9%氯化钠或5%葡萄糖中0.1U/mL到1.0U/mL的浓度下输液,输液系统在室温下可保持稳定48小时。建议在开始给患者输液之前输液系统要先排气。

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什么是外泌体保存液,外泌体保存液介绍?

外泌体(exosomes)是一种由活细胞分泌,直径在30-150nm,具有双层脂质膜结构的小囊泡,它在机体内广泛存在,如外周血、腹水、尿液、唾液、脑脊液等各种体液中,内含丰富的蛋白质、脂质以及核酸等生物活性成分。外泌体参与物质运输,还携带和传递重要的生物信息,在介导免疫抗原递呈、树突状细胞的活化、神经退行性疾病发生、肿瘤细胞抗原的转移及肿瘤诊断治疗中发挥重要作用,吸引了很多科研人员的关注,在深入研究外泌体前,外泌体的提取纯化、鉴定及合理保存是首要的步骤,也是一切后续实验的基础,只有高活性、高稳定性的外泌体才能确保后续实验的质量和可信度。

目前外泌体只能在2~8℃稳定保存3天,-20℃稳定保存1个月。长期保存需要-80℃低温,并且不能冻融,存储条件要求高,这些缺点影响了外泌体的深入研究。

由此,有效保持外泌体的完整性、生物活性和内含物稳定性的外泌体保存液仍有待开发。

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