骨髓间充质干细胞分离液（骨髓间充质干细胞和骨髓基质细胞）

本文目录一览：

• 1、各位大侠，naive T 细胞的分离
• 2、骨髓间充质干细胞分离的方法有几种
• 3、美国生产的干细胞营养液是从什么东西里提取的
• 4、Ficoll和Percoll的区别
• 5、求助人脐带间充质干细胞提取方法

各位大侠，naive T 细胞的分离

GVHD是同种异体造血干细胞移植(allo-HSCT)后影响预后的 重要并发症。受者预处理造成组织损伤并释放炎性因子(如IFN-γ、IL-2等)引 起GVHD。最近的研究发现骨髓来源的间充质干细胞(MSCs)不仅可以分化为 多种间充质组织，而且具有支持造血和免疫调节作用，但其机制尚不清楚。目前 的研究认为供者来源的Naive T细胞识别受者主要组织相容性抗原启动了 GVHD。我们将体外新生的Naive T细胞接种于异基因MSCs上，观察MSCs对 Naive T细胞分泌细胞因子的影响，直接研究它对Naive T细胞的作用，将更深入 地揭示其预防GVHD的机制。 材料和方法：

1、 MSCs体外分离培养：将肝素抗凝的骨髓用密度梯度离心 法(过percoll细胞分离液)分离出单个核细胞，体外培养贴壁细胞，传3代后得 到纯度和数量均较高的MSCs，经60Co照射后作为实验细胞。

2、 脐血CD34+细 胞体外分化为Naive T细胞：将胎儿胸腺组织贴壁培养建立胸腺基质细胞培养 (TSC)体系；用单克隆抗体-磁珠分离系统分离纯化脐血CD34+细胞；将CD34+ 细胞植入TSC并添加IL-12、 FL、IL-2，共孵育5周后获取Naive T细胞并通过 流式细胞术鉴定其表型。

3、 MSCs与Naive T细胞共孵育：将体外培养获取的 Naive T细胞种入经照射近融合的MSCs中，对照组为单独MSCs培养和单独Naive T细胞培养。孵育7天后，取上清用ELISA定量检测IL-2、 IFN-γ、IL-4和IL-10， 并应用流式细胞仪检测共孵育前后T淋巴细胞表型变化 结果：1、 人骨髓来源的MSCs可以在体外培养扩增，用流式细胞术分析传3 代以后的细胞发现它们具有共同的表型CD166+，CD105+， CD45-和CD34-，2、 CD34+细胞可在TSC体系中分化出Naive T细胞，随着培养时间的延长，与体内 胸腺生成T细胞类似，依次出现CD4／8双阴性，双阳性，单阳性细胞。培养第5 周细胞表型测定：CD4+65． 2％，CD8+52． 7％，CD3+78． 8％，CD45RA表达88． 9％。3、 中文摘要 MSCS与NaiveT细胞共孵育七天，镜下观察可见共孵育组T细胞数量轻度增加， 流式细胞仪检测共孵育前后T淋巴细胞表型显示CDS+细胞相对增加。ELISA检 测上清发现共孵育组IFN一Y分泌减少(p0 .05)，IL一2分泌增加(p0.05)。另 外，在实验组和对照组中均未检测到IL一4、IL一10。 结论:MSCs具有一定的异基因反应性，能刺激NaiveT细胞增生，且MSCs 和NaiveT细胞共孵育组上清中的IL一2分泌增加而IFN一Y分泌减少，提示MSCs 可能借CDS+调节T细胞增生抑制异基因反应性T细胞分泌IFN一Y来发挥免疫调 节作用，本文结果将为进一步阐明MSCs免疫调节机制提供新的线索。

骨髓间充质干细胞分离的方法有几种

目前常用的分离MSC的方法主要有全骨髓法和密度梯度离心法，全骨髓法即根据干细胞在低血清培养基中有贴壁优势特性，定期换液除去不贴壁细胞，从而达到纯化及扩增MSC的目的。密度梯度离心法即根据骨髓中各细胞成分比重的不同，分离单核细胞进行贴壁培养。二者本质上无多大区别。随着对MSC表面抗原认识的深入，又有人利用免疫方法如流式细胞仪法、免疫磁珠法等对其进行分离纯化。但经过流式或磁珠分选后的细胞出现了增殖缓慢等一些问题，加之成本较高和技术的难度，在某种程度上限制了这些方法的广泛应用。

美国生产的干细胞营养液是从什么东西里提取的

干细胞营养液是采集新生婴儿的脐带血，患者的外周血或患者骨髓血，通过专用的干细胞分离液、提娶纯化后得到临床治疗所需要的干细胞。

干细胞是具有增殖和分化潜能的细胞，具有自我更新复制的能力（Self-renewing），能够产生高度分化的功能细胞。

它是一类具有多向分化潜能和自我复制能力的原始的未分化细胞，是形成哺乳类动物的各组织器官的原始细胞。干细胞在形态上具有共性，通常呈圆形或椭圆形，细胞体积小，核相对较大，细胞核多为常染色质，并具有较高的端粒酶活性。干细胞可分为胚胎干细胞和成体干细胞。

扩展资料

干细胞按照发育阶段分类：

胚胎干细胞和成体干细胞。

1、胚胎干细胞包括ES细胞。

2、成体干细胞包括神经干细胞、血液干细胞、骨髓间充质干细胞、表皮干细胞等。

按分化潜能，干细胞可分为，全能干细胞，亚全能干细胞，多能干细胞，单能干细胞。

全能干细胞：具有形成完整个体的分化潜能，如受精卵。

亚全能干细胞：为人类体内存在为数不多的三胚层分化潜能干细胞。

多能干细胞：具有分化出多种细胞组织的潜能。如胚胎干细胞。

单能干细胞：只能向一种或两种密切相关的细胞类型分化。如神经干细胞、造血干细胞。

参考资料来源：百度百科-干细胞

Ficoll和Percoll的区别

Ficoll和Percoll的区别：

1.价格区别：percoll的价格是ficoll两到三倍。

2.原理区别：percoll是利用percoll液经高速离心后形成一个连续密度梯度的原理，将密度不等的细胞分离纯化。而ficoll主要用于分离外周血中的单个核细胞，是一种单次密度梯度离心分离法。

3.性质区别：Percoll: 有PVP-coated，而且性质特殊：在10000g以下，可以形成很广范围的discontinue gradient (from 1.004 to 1.080 g/ml)；在10000g以上，能够沉降形成continue gradient。

ficoll ：所有性质都是特别为外周血单个核细胞分离而优化过的。

4.用途区别：ficoll:可以用于外周血中分离单核细胞，也可以进行脊髓干细胞的分离，骨髓干细胞的分离，颗粒细胞的分离。Percoll: 更多应用在亚细胞结构的分离，病毒分离。

参考资料来源：百度百科-Percoll分层液

求助人脐带间充质干细胞提取方法

方法:

无菌条件下截取流产胎儿双侧四肢骨,PBS冲洗髓腔,离心去脂肪及上清液,L-DMEM重悬细胞,沿管壁缓慢滴加至底部有等量1.073 g/mL Percoll分离液的离心管中,离心后吸取中间界面白膜层,加入含体积分数为10%的胎牛血清、青霉素钠、链霉素的L-DMEM完全培养基,接种后置于37℃、体积分数为5%的CO2饱和湿度孵箱内培养.48 h后换液,去除未贴壁细胞,以后每2d换液一次.待细胞达到80%～90%融合时,胰酶-EDTA消化传代.

主要观察指标:

倒置显微镜及Giemsa染色观察细胞形态;透射电镜观察细胞超微结构;流式细胞技术检测其表面标记物;碱性磷酸酶染色检测成骨分化能力;Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色检测成软骨分化能力.结果:原代及传代培养的胎儿骨髓间充质干细胞呈梭形外观,具有较强的增殖能力.胞体较小,细胞核/浆比例大,胞核呈圆形或椭圆形,胞浆少,染色质较疏松,表现出早期细胞的特点,传至第20代细胞超微结构仍无明显改变.细胞表面抗原CD29,CD44,CD105呈阳性表达,CD34,CD45呈阴性表达.骨髓间充质干细胞诱导分化后,碱性磷酸酶染色及Ⅱ型胶原均呈阳性.

结论:

利用密度梯度离心+贴壁筛选法可成功分离培养胎儿骨髓间充质干细胞,所获细胞能够向成骨细胞及软骨细胞分化,该方法为体外培养扩增胎儿骨髓间充质干细胞的简单、稳定、高效的手段.