外泌体浓度测定方法bca法（bca法测蛋白浓度中加入bca的作用）

本文目录一览：

• 1、测蛋白浓度的方法
• 2、蛋白质含量测定
• 3、蛋白质浓度的测定
• 4、蛋白质含量测定方法
• 5、蛋白质含量测定的标准方法
• 6、Eppendorf 蛋白质核酸自动分析仪BCA法测蛋白浓度时怎么建立标准曲线?

测蛋白浓度的方法

测蛋白浓度的方法有：凯氏定氮法、双缩脲法、酚试剂法、紫外吸收法。

1、凯氏定氮法：凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收，再以标准盐酸滴定。

2、双缩脲法：双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的分析方法。双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液，呈蓝色，由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。当底物中含有肽键时（多肽），试液中的铜与多肽配位，配合物呈紫色。

3、酚试剂法：取6支试管分别标号，前5支试管分别加入不同浓度的标准蛋白溶液，最后一支试管加待测蛋白质溶液，不加标准蛋白溶液，在室温下放置30分钟，以未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照，于650nm波长处测定各管中溶液的吸光度值。

4、紫外吸收法：大多数蛋白质在280nm波长处有特征的最大吸收，这是由于蛋白质中有酪氨酸，色氨酸和苯丙氨酸存在，可用于测定0.1～0.5mg/mL含量的蛋白质溶液。

蛋白质含量测定

应该是问蛋白质含量测定的方法吧。方法有以下几种：

1、直接测定UV法。

2、凯氏定氮法。

3、双缩脲法。

4、酚试剂法。

5、紫外吸收法。

6、BCA法。

7、Lowry法。

8、考马斯亮蓝法。

9、Bradford法测定试剂盒。

蛋白质含量增高，常见于多发性骨髓瘤患者，主要是异常球蛋白增加；血浆浓缩也可使蛋白质含量增加，如急性脱水、外伤性休克、肾病等。

蛋白质浓度的测定

通常用的蛋白质浓度测定方法是Bradford 、BCA 以及在280 nm 处的光吸收。实验室倾向于选择一些特定的方法，在订购新的试剂前先试用实验室的常规方法。Brad ford法是最好的一种可以用来满足所有目的的方法。

不能直接用一种方法的结果与另一种方法进行比较，必须相对浓度来比较，例如，用Bradford 法测量到的牛血清清蛋白的量比其称量的值高两倍。

蛋白质样品的特点决定选择何种测量方法。如果知道纯化的蛋白质中没有色氨酸，就不要依赖280nm的光吸收值。如果蛋白质样品中有去污剂，就必须选择一种对去垢剂不敏感的方法，或者去除去污剂。

用任何一种方法测量未知样品都要依据标准曲线，而且每次测量时都一样。如果要知道相对蛋白质的浓度，任何纯化的蛋白质都必须选择一条参考的曲线。牛血清清蛋自(BSA) 和lgG 是通常用的参照蛋白质，除非要测量抗体，一般都使用BSA 。

BCA

工作原理：将硫酸铜加到BCA (bicinchonic acid) 的碱性溶液中，产生一种苹果绿颜色混合物，当溶液中加入蛋白质样品时， Cu2＋ 与蛋白样品中的肽键相互作用转变成Cu+，混合物的颜色转变成紫色，在562 nm下有最大吸收值。

优点：快速、灵敏、准确。

缺点：受到去污剂和有机溶剂的影响，有时间依赖性，颜色会在24 小时发生变化。

Bradford

工作原理：染料考马斯亮兰G250 在pHl 时呈红棕色，与蛋白质结合后引起pKa值的变化，颜色就会变蓝，蓝色强度可以在595 nm 测量。

优点：快速、灵敏、准确、没有时间依赖性。

缺点：去污剂的浓度不能超过0.2% ，否则会干扰测量的结果。

280 nm 光吸收值

工作原理：芳香族氨基酸，尤其是色氨酸，在280nm有强烈的光吸收。所有的蛋白质都有芳香族氨基酸（或者紫外吸收因子），在280nm有独特的消光系数。

优点：快速，样品不会受到干扰。

缺点：没有其他方法准确。

双缩脲法(Biuret)

工作原理：测量肽键，在540nm测定OD值。

优点：快速，由于盐浓度的干扰比Bradford 法小，可用于追踪蛋白质分离过程。

缺点：低浓度时测量不准确。

 Lowry (Folin-Ciocalteu) 法

工作原理：与BCA 法类似， 在750nm测定OD 值。

优点：需要很少的物质。

缺点：取决于蛋白质样品中酪氨酸的存在。

蛋白质含量测定方法

应该是问蛋白质含量测定的方法吧。方法有以下几种：

1、直接测定UV法。

2、凯氏定氮法。

3、双缩脲法。

4、酚试剂法。

5、紫外吸收法。

6、BCA法。

7、Lowry法。

8、考马斯亮蓝法。

9、Bradford法测定试剂盒。

蛋白质含量增高，常见于多发性骨髓瘤患者，主要是异常球蛋白增加；血浆浓缩也可使蛋白质含量增加，如急性脱水、外伤性休克、肾病等。

蛋白质含量测定的标准方法

应该是问蛋白质含量测定的方法吧。方法有以下几种：

1、直接测定UV法。

2、凯氏定氮法。

3、双缩脲法。

4、酚试剂法。

5、紫外吸收法。

6、BCA法。

7、Lowry法。

8、考马斯亮蓝法。

9、Bradford法测定试剂盒。

蛋白质含量增高，常见于多发性骨髓瘤患者，主要是异常球蛋白增加；血浆浓缩也可使蛋白质含量增加，如急性脱水、外伤性休克、肾病等。

Eppendorf 蛋白质核酸自动分析仪BCA法测蛋白浓度时怎么建立标准曲线?

1.按下键“BCA”选择蛋白质显色反应的方法；

2.设置标准曲线的标准样品数量、测定次数和浓度范围.按下键“Parameter”用上下键 进行选择和参数调整.

3.将空白对照置入样品孔；

4.按下键“Blank”；

5.仪器记录空白对照,设置为0.000A；

6.将第一个标准品或样品（如需沿用已存储的标准曲线,可直接测样品）置入样品孔；

7.按下“Sample”或“Standard”；

8.依次测定标准品或样品,每个样品的测定值将自动存储在机器中,查看测定结果.