外泌体流式细胞术检测（流式细胞术仪器）

本文目录一览：

• 1、什么是 流式细胞术检测
• 2、流式细胞术实验步骤是什么？
• 3、什么是流式细胞术（FCM）检测
• 4、采用流式检测方法中哪种仪器可以检测到外泌体的细小颗粒
• 5、流式细胞术的作用原理
• 6、如何用流式细胞仪检测线粒体数量

什么是 流式细胞术检测

又称荧光激活细胞分选法，一种细胞分选或分析技术。即以荧光素标记抗体结合相应细胞，用激光束激发单行流动的细胞，根据细胞所携带荧光(强度或类别)进行分选或分析。

流式细胞术实验步骤是什么？

流式细胞术实验：

1、制备细胞悬液，计数

2、分装，按照每个EP（1.5ml）管1-2*10 6个细胞分装，3500rpm，4度离心。

3、用100ulPBS重悬，加入10ul大鼠血清封闭，4度避光30min。

4、加入相应的荧光标记的抗体，混匀，避光，4度孵育30min。

5、加入1mlPBS洗两遍。

6、用200ul PBS重悬，经纱布过滤转至流式管，上级检测。

细胞或者大小接近的颗粒物质都可以检测。

样本通过鞘液的输送，成单个队列依次通过激光束。样本事先可以根据检测需要被荧光标记，通过激光束的时候就会得到荧光信号，被记录下来。可以同时标记不同的荧光标记做不同的检查。优点就是可以在短时间内检测大量的样本（每秒几千个到几万个细胞）。

主要应用于各种生物医学研究和临床诊断。国际上通用的白细胞和淋巴瘤的诊断标准就是靠流式细胞仪的分型来确定的。

以上内容参考：百度百科-流式细胞术

什么是流式细胞术（FCM）检测

1.流式细胞术（flow cytometry,FCM)是一种可以对细胞或亚细胞结构进行快速测量的新型分析技术和分选技术。2.特点1.测量速度快；2.可进行多参数测量；3.是一门综合性的高科技方法（ FCM综合了光学，电子学，流体力学，细胞化学，免疫学，激光和计算机等多门学科和技术）；4.既是细胞分析技术，又是精确的分选技术。

采用流式检测方法中哪种仪器可以检测到外泌体的细小颗粒

运用流式检测方法的有很多种检测仪器，其中纳米流式检测仪是相对于其他仪器检查中检测精度最高也最精确的一款仪器，对外秘体及细胞外囊泡、细菌病毒都有很好的检测效果。而这个仪器是厦门一家公司研发生产。

流式细胞术的作用原理

流式细胞术（Flow Cytometry, FCM）是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段，它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，与传统的荧光镜检查相比，具有速度快、精度高、准确性好等优点。

将待测细胞染色后制成单细胞悬液。用一定压力将待测样品压入流动室，不含细胞的磷流式细胞术酸缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与待测样品流成一定角度，这样，鞘液就能够包绕着样品高速流动，组成一个圆形的流束，待测细胞在鞘液的包被下单行排列，依次通过检测区域。

流式细胞仪通常以激光作为发光源。经过聚焦整形后的光束，垂直照射在样品流上，被荧光染色的细胞在激光束的照射下，产生散射光和激发荧光。这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管接收。光散射信号在前向小角度进行检测，这种信号基本上反映了细胞体积的大小；荧光信号的接受方向与激光束垂直，经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离，形成多个不同波长的荧光信号。

这些荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度，经光电倍增管接收后可转换为电信号，再通过模/数转换器，将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号。计算机把所测量到的各种信号进行计算机处理，将分析结果显示在计算机屏幕上，也可以打印出来，还可以数据文件的形式存储在硬盘上以备日后的查询或进一步分析。

检测数据的显示视测量参数的不同由多种形式可供选择。单参数数据以直方图的形式表达，其X轴为测量强度，Y轴为细胞数目。一般来说，流式细胞仪坐标轴的分辨率有512或1024通道数，这视其模数转换器的分辨率而定。对于双参数或多参数数据，既可以单独显示每个参数的直方图，也可以选择二维的三点图、等高线图、灰度图或三维立体视图。

细胞的分选是通过分离含有单细胞的液滴而实现的。在流动室的喷口上配有一个超高频电晶体，充电后振动，使喷出的液流断裂为均匀的液滴，待测定细胞就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正负不同的电荷，当液滴流经带有几千伏特的偏转板时，在高压电场的作用下偏转，落入各自的收集容器中，不予充电的液滴落入中间的废液容器，从而实现细胞的分离。

如何用流式细胞仪检测线粒体数量

可以参考

Mattiasson, G. (2004). "Flow cytometric analysis of isolated liver mitochondria to detect changes relevant to cell death." Cytometry A 60(2): 145-154.

最后得到一个相对的半定量

但是问题是，你在分离的过程中会都是大量的线粒体，所以结果是不准的。而且，线粒体也是在不断融合，变化的，是一个动态过程。流式这个方法是无法得到准确数目的。