无血清外泌体的制备（提取外泌体的血清怎么保存）

本文目录一览：

• 1、什么是外泌体？
• 2、实战分享 | 外泌体提取之经验小结
• 3、刘德华代言的外泌体
• 4、细胞怎样从外界获得物质和能量，在这个过程中细胞膜

什么是外泌体？

什么是外泌体

人到中年，最难以启齿的矛盾便是脸上越来越多的皱纹和内心与日俱增的

“抗老需求”之间的矛盾。为了今天的容颜不被明天改变，什么玻尿酸、水光针甚至是干细胞美容，我都勇于“尝鲜”。而灶颤哪作为美容界的后起之秀——“外泌体”，我更是不愿错过。毕竟它虽然是近两年兴起的美容模式，但其发展历史也已经有40多年了，而它的美容功效更是有口皆碑，比干细胞美容有过之而无不及，一时间，关于外泌体美容的宣传铺天盖地，可谓是风头无两，颇有“江湖大佬”的地位。但也正因为如此，我们更要科学严谨的对待外泌体美容，了解它的原理，才能更好的应用它。

外泌体，从字面上看，就是细胞向外分泌的物体。科学释义是：细胞所分泌的直径为30~150nm的双层磷脂囊泡，主要功效成分包括蛋白质类物质及micRNA类核酸物质。

外泌体的作用机理

外泌体最大的功能便是人体的“通信兵”，它能在细胞间传递物质，从而调控受体细胞的功能及生物学行为。通俗的说，外泌体就好像一辆“细胞货拉拉”，装了自家一堆有用的东西隐码（里面有miRNA，mRNA和lncRNA等小分子核酸，还有细胞因子等蛋白），然后分泌出细胞外，再接着进入另一个细胞，进行“卸货搬家”。

希吉亚外泌体分离方法

外泌体天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和细胞培养基等生物体液中，希吉亚外泌体的分离方法有很多种，常用的有超速离心法、免疫磁珠法等。

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超速离心法：超速离心法是大家最熟悉的一种分离方法，文献中应用最多且也是目前比较受到认可的方法。超速离心是先通过低速离心去除细胞和细胞凋亡碎片，再通过超高速去除大囊泡和沉淀外泌体。此方法耗时耗力，往往需要8-30个小时；且需要大量的起始材料和超速离心机；产量不高。

希吉亚外泌体美容机制

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免疫磁珠法：利用外泌体表面特有的表面标记物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗标记物抗体的磁珠与外泌体囊泡孵育后结合，即可将外泌体吸附并分离出来。该方法具有特异性高、操作简便、不影响外泌体形态完整等优点，但外泌体的生物活性易受pH和盐浓度影响，不利于下游实洞差验。

促进细胞再生。外泌体可以有效刺激受体细胞，释放细胞活力，促进其再生和新生。因而可以帮助淡化祛除斑点，促使肌肤光亮细腻。

修复受损细胞。外泌体外泌体可以加速I型胶原和III型胶原的基因表达，促进成纤维细胞增殖、胶原合成，从而让帮助修复受损的肌肤屏障。而且它可以提高受损部位的修复能力和愈合能力。

抑制炎症产生。外泌体可以诱导巨噬细胞向M2型极化，从而降低了巨噬细胞诱发炎症反应的能力，从而抑制炎症。我们肌肤的很多问题都与肌底炎症有关，而外泌体可以通过抑制炎症来让肌肤从内而外的健康起来。

干细胞疗法围绕使用完整细胞来替代丢失的组织。相反，外泌体是与细胞分离的囊泡。外泌体促进恢复青春活力的方式是利用外泌体中携带的有效成分来帮助其他细胞。

干细胞和外泌体的另一个主要区别是前者仅从身体的特定部位获得，例如：骨髓、血液、脂肪组织。而外泌体，可以从几乎所有类型的细胞中获得。胎盘中也含有大量的外泌体。

通过上述科普，大家对外泌体美容一定有了更全面的认识

实战分享 | 外泌体提取之经验小结

近些年来，关于外泌体的研究如火如荼。外泌体在免疫中抗原呈递、肿瘤的生长与迁移、组织损伤的修复等生理病理上起着重要的作用。同时，不同细胞分泌的外泌体具有不用的组成成分和功能，可作为疾病诊断的生物标志物。 来自华中科技大学同济医学院附属协和医院的崔老师，对外泌体提取积累了自己的心得，并将自己的研究成果发表在 Bioactive Materials 上。 下文是崔老师的分享。

要进行关于外泌体的研究，提取纯化外泌体一直是大家非常关注的问题。 能否获得较高纯度的足量外泌体，直接关系着后续研究能否开展 。虽然目前仍然没有能同时保证外泌体的含量、纯度和生物活性的提取宏氏方法，但是我们可以结合当前的实际情况，对外泌体提取做一些探讨和经验总结。

超速离心（差速离心）法是目前最常用的外泌体提取方法 ，即采用低速离心、高速离心交替进行，可分离到大小相近的囊泡颗粒。超离法因操作简单，获得的囊泡数量较多而广受欢迎。本人近期发表的论文中最后也是采用了这种方法。

具体的步骤大家都比较熟悉，无论是提取血清来源的外泌体，还是细胞条件培养基来源的外泌体 ，大家都习惯于先将血清或者条件培养基收集后保存于-80℃的温度下，等达到一定量后，再批量进行超速离心。

这样的话， 大家会发现一个非常严重的问题，尤其是在拍摄电镜的时候——背景杂质很多，并且很多囊泡的形态不够典型，不镇绝雀是文献中描述的那种典型的双凹圆盘状或者茶托状。

通过几次实验的对比，我大概发现了原因， 主要是由于在冻存收集到培养基的时候，没有进行低速离心和普通高速离心。

低速离心可以去除培养基中的未贴壁细胞、死细胞以及大的细胞残骸，而普通高速离心可以去除其中的大型细胞外囊泡。无论是未贴壁细胞、死细胞、大的细胞残骸，还是大型细胞外囊泡，在-80℃冻存及复温的过程中，都会发生破裂，产生小型的细胞膜碎片结构。

这样的话，就导致了电镜背景很杂乱，难以达到高水平论文杂志期刊的要求。另外，还会导致这御早样一个矛盾现象，即蛋白定量中计算的外泌体产量虚高，而蛋白免疫印迹中外泌体标记物蛋白的含量却不高。

因此，在这里推荐给大家一个小贴士

就是在收集准备提取外泌体的条件培养基或者血清时，一定要提前做到低速离心和普通高速离心这一步，尤其是为了做透射电镜或者蛋白免疫印迹实验而提取的外泌体 ，一定要注意这一点。尽管过程比较费时，但是能生产出有用的结果才是更重要的。

至于其他的外泌体提取方法，如密度梯度离心、色谱柱、超滤离心法、微流控芯片法、磁珠免疫法、多聚物沉淀法，我看到学校里面鲜少有人去尝试，毕竟更麻烦。但不同的方法各有优劣，大家可根据自己的实验，谨慎选用。

刘德华代言的外泌体

刘德华注射羊胎素保持青春?5年前曾有媒体曝刘德华每年去瑞士注射羊胎盘素，1针58万人民币，能回春5岁，持续打可年轻10几岁。但近日杭州的某整形诊所，竟声称刘德华就是在该诊所打羊胎盘。而刘德华所伏拦属公司则回应着纯属无稽之谈。

刘德华被代言羊胎盘素

据悉，该诊所的网页拿刘德华打广告，称50岁的华仔每年都会进行一次羊胚胎活细胞治疗，不仅能让外表回到从前，精神也长久停留在在二三十岁的状态。自称徐医师的小姐说，施打羊胎盘素要先付订金5万人民币，还要预留1周时间到他们瑞士的合作医院施打，费用绝皮包交通食宿费， 约28万8000元人民币、较贵约48万8000元人民币。

徐医师更坦言华仔、王菲等巨星，确实透过他们诊所打羊胎盘素，声称：“但明星和我们签保密协议，不能透露公开。部分愿意打广告的，我们会放在网络上。”

对此，刘德华所属的中国台湾映艺表示：“无稽之谈，不回应无中生有的事!”据悉，刘德华的公司已将找律师处理被盗用宣传羊胎盘素一事。

羊胎素的神奇功效

羊胎素对于脸部的皱纹有很好的舒展作用，由于皮肤细胞的老化，弹性下降，造成抬头纹、眼角细纹和颈部的皱纹攀升，注射羊胎素后可得到良好的改善。

羊胎盘素治疗步骤

步必须接受严格的全身检查，因为具有某些病症的人将会对羊胎素产生过敏反应，而且根据接受注射者的不同情况，要进行不同的针剂配置和辅助治疗。由于羊胚胎素活性细胞有几十种类型，根据尤其是地区的人群健康状况特点，目前采用不同细胞进行组合的治疗方案，以使治疗效果达到化。

第二步是在专业医师的密切关注下进行注射，通过臀部直接肌肉注射，活性细胞经血液吸收，并较终作用于人体的免疫系统来产生作用。

第三步是观察期，接受注射者的饮食起居都要接受医师的咨询和观察，而这些都必须在有多年临床经验并厅差的诊所进行。

在这整个过程中，有专门的营养师为接受注射者进行饮食配置，以保证受疗者各方面的状态，有利于羊胎素的人体吸收。

根据多临床经验，在次注射的两年后需要再进行第二次的注射治疗，此后，根据个人条件，每2～5年注射一次。注射一般2～4周后，体内老化细胞开始恢复年轻，各器官机能回升，容貌也会明显的年轻化。

细胞怎样从外界获得物质和能量，在这个过程中细胞膜

用人的红细胞，放在清水中，让其吸水胀破，得到：

（樱谈1）分隔、形成细胞和细胞器，为细胞的生命活动提供相对稳定的内环境，膜的面积大大增加，提高了发生在脊燃碰膜上的生物功能；

（2）屏障作段丛用，膜两侧的水溶性物质不能自由通过；

（3）选择性物质运输，伴随着能量的传递；

（4）生物功能：激素作用、酶促反应、细胞识别、电子传递等。

（5）物质转运功能：细胞与周围环境之间的物质交换，是通过细胞膜的砖运动功能实现的，其主要转运方式