外泌体microrna内参（外泌体mirna测序）

本文目录一览：

• 1、使细胞中组织分离开来,跟细胞分离开区别
• 2、样品直接提取microrna和通过外泌体提取microrna有什么区别
• 3、什么生物学实验用内参外参
• 4、microRNA的qPCR内参可以用GAPDH吗
• 5、什么是细胞外泌体_细胞外泌体是什么？

使细胞中组织分离开来,跟细胞分离开区别

分离是把细胞间的蛋白质等物质破坏，使细胞不再连在一起，分散是使细胞散开，形成单层的分离是原来细胞都粘连在一起，分离后细胞紧靠在一起但不粘连，压一压就可以把它们分散开来，叫分散外泌体的作用途径和方式：

外泌体由来源细胞释放入外环境后，距离较近的可由近分泌途径直接被受体细胞吸收，距离稍远的可由旁分泌途径被吸收，还有部分外泌体循环入体内作用于全身系统由内分泌途径被吸收。对于近距离的吸收，起初研究者认为外泌体是与受体细胞非特异性结合发生胞膜融合后进入细胞。但近来发现，这一过程其实与受体细胞表面特异性分子(如T细胞膜蛋白Tim4)的调节或受体细胞上4次跨膜蛋白有关，这说明外泌体的摄取并非完全随机发生。外泌体被受体细胞吞噬后可到达吞解体，也可到达晚期endosome的囊腔中，但exosome是由吞解体裂解还是由晚期endosome释放于受体细胞质中，以及是什么原因导致了这种不同的吸收路线，目前还不清楚。且组织特异性是否参与远距离的靶向吸收循环系统中外泌体，仍是另一个潜在的研究方向。目前认为外泌体主要通过四种方式在细胞间发挥信息传递作用，1)外泌体作为信号复合物，通过细胞表面配体直接刺激受体细胞；2)外泌体在细胞间转移受体；3)外泌体向受体细胞运送功能蛋白或传染性颗粒；4)外泌体通过mRNA、microRNA或转录因子向受体细胞传递遗传信息。一旦外泌体被受体细胞吸收后，其内载有的脂质、蛋白质、mRNA、microRNA等成分可以通过改变转录和翻译程序。影响蛋白修饰，调节信号级联通路、关键酶反应以及细胞自动调节等方式影响受体细胞的细胞表型和功能，而来源细胞和受体细胞的种类及其生理病理状态将决定具体是哪种机制发挥主要作用

样品直接提取microrna和通过外泌体提取microrna有什么区别

首先要了解microRNA的分布，例如在血浆中microRNA有三种分布形式：游离状态、与蛋白结合形成复合体、包涵在囊泡中（外泌体是囊泡的一种）。

这样就清楚了，直接提是提全部，外泌体提取只针对一部分。

什么生物学实验用内参外参

miRNA。

miRNA实验中内参、外参基因的应用。

miRNA一般指microRNA。MicroRNA(miRNA)是一类由内源基因编码的长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子，它们在动植物中参与转录后基因表达调控。

microRNA的qPCR内参可以用GAPDH吗

mirna的荧光定量pcr可以用actin做内参

miRNA通过与转录本的相互作用，关闭或抑制基因的表达。

最近的研究表明它们影响了约三成的基因。

miRNA在多个组织中差异表达，这就让表达图谱分析成为研究的重点。

同时，miRNA的过表达和抑制也是近年来常用的研究方法。

我知道和使用过的U6内参基因只有两个：RNU6-1和RNU6-2.前一个就是常见的u6,后一个有时被称为u6b.在我的大鼠RNA样本当中,u6表达量有些太高,u6b的Cq值与我的目标miRNA比较接近,稳定性也很好.但是这些对植物样本中的内参基因选择没有什么指导意义。

为了确定u6在植物中的保守性,比较快捷的办法是找到谈论这个话题的文献综述.如果没有人写过这样的综述的话,就只能靠自己去数据库找到所有序列自己对比了。

关于内参基因的选择,必须实验确定特定样本中的表达水平稳定,其他文献中报导的内参基因不一定适合你的样本.做新的课题时,选择内参基因一般是选取3-5个常用的,PCR测试后选取。

什么是细胞外泌体_细胞外泌体是什么？

外泌体是指包含了复杂 RNA 和蛋白质的小膜泡 (30-150nm)，现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。1983年，外泌体首次于绵羊网织红细胞中被发现， 1987年Johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中 。

所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。 有关他们分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的精确分子机制刚刚开始研究。 外泌体被视为特异性分泌的膜泡，参与细胞间通讯，对外泌体的研究兴趣日益增长，无论是研究其功能还是了解如何将其用于微创诊断的开发。

1983年，外泌体首次于绵羊网织红细胞中被发现， 1987年Johnstone将其命名为“exosome”。现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中 。

外泌体富含胆固醇和鞘磷脂。2007年， Valadi等发现鼠的肥大细胞分泌 的 exosome可以被人的肥大细胞捕获，并且其携带的mRNA成分可以进入细胞浆中可以被翻译成蛋白质，不仅仅是mRNA，exosomes所转移的microRNA同样具有生物活性，在进入靶细胞后可以靶向调节细胞中mRNA的水平。这一发现使得研究人员对exosome的研究热情激增，截止已经通过286项研究发现了41860种蛋白质、2838种microRNA、3408种mRNA。

一类外泌体中常见的细胞质蛋白是Rabs蛋白，是鸟苷酸三磷酸酶(GTPases,)家族的一种。它可以调节外泌体膜与受体细胞的融合，有文献报道称RAB4, RAB5和 RAB11主要出现于早期以及回收的核内体中，RAB7 和 RAB9主要出现于晚期的核内体。现有大量的研究发现外泌体中含有40种RAB蛋白。除了RAB蛋白，外泌体中富含具有外泌体膜交换以及融合作用的膜联蛋白（包括膜联蛋白1、2、4、5、6、7、11等）。外泌体膜上富含参与外泌体运输的四跨膜蛋白家族（CD63, CD81 和CD9)）、热休克蛋白家族（(HSP60, HSP70, HSPA5, CCT2 和HSP90以及一些细胞特异性的蛋白包括A33（结肠上皮细胞来源）、MHC-Ⅱ(抗原提呈细胞来源)、CD86(抗原提呈细胞来源)以及乳凝集素（不成熟的树突状细胞）。其它一些外泌体中的蛋白包括多种的代谢类的酶（GAPDH, 烯醇化酶 1, 醛缩酶 1, PKM2, PGK1, PDIA3, GSTP1,DPP4, AHCY, TPL1, 抗氧化蛋白, P4HB, LDH, 亲环素 A,FASN, MDH1 和CNP）、核糖体蛋白（RPS3）、信号转导因子（黑色素瘤分化相关因子, ARF1, CDC42, 人类红细胞膜整合蛋白, SLC9A3R1）、粘附因子（MFGE8、整合素）、细胞骨架蛋白以及泛素等。