1、选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,最常见的是Ultra-15(10kD)。
通常应截留分子量不州让应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。
若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同,表格中有。
2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。
注意,一定要等离心机达到目的转速之后,方可野仔离开
离心机,否则离心机出问题时,无法第一时间处理,后果不可预测!膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一颂迹汪般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。
看孔径大小,根据自己目的桥旁蛋白来樱消凯选择所需孔径大小的超滤管,一般为目的蛋白的1/2 ,比如你超滤40KD的蛋白的话,就脊唤选10KD的,而不选30KD的
100kd意思尘孝胡是超滤膜的滤膜派拦精度为100千分之一微米,即100千微米,可以有效过滤出病毒、细菌等微小慎拿颗粒物质。
超滤膜上标的10KD、30KD都芦段是指截留率。单位越大,超滤得陪薯誉到的物质分手手子也越大。