灌胃很方便的,也安全。我们这儿经常一两百只老鼠连续两个多月灌胃。
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一、大鼠灌胃
大鼠灌胃是最常见的给药方法之一。灌胃所用的针头可以从市场上购买,操作方法和小鼠灌胃大同小异,只是由于大鼠体积较大,抓大鼠的手法和小鼠有所不同。
大鼠灌胃是在清醒状态下进行的,不需要麻醉。大鼠的灌胃针长约6~8cm,直径约1.2mm。
大鼠灌胃时,右手持灌胃注射器,左手拇指和食中二指相对,抓住大鼠颈部皮肤,使大鼠的头部和颈部及躯干呈一直线,不需要固定大鼠的尾巴,就可以实施灌胃操作了,其余的操作均和小鼠一样。
大鼠一般灌胃量为1ml/100g体重,因此一般大鼠灌入2ml是可以的。大鼠的灌胃给药体积一般为5~10ml/kg。但是药物的浓度是需要自己按照动物实验方法学的方法进行换算:200g大鼠对应70kg人的折算系数为0.018。
二、大鼠腹腔注射
腹腔注射是常见的给药方式,尤其是在麻醉时。常见的麻醉方法均是麻醉药物腹腔注射。
大鼠腹腔注射的方法和小鼠基本相同。
1.大鼠腹腔注射可以用5ml的注射器,配合5.5~7号针头。
2.腹腔注射时右手持注射器,左手的小指和无名指抓住大鼠的尾巴,另外三个手指抓住大鼠的颈部,使大鼠的头部向下。这样腹腔中的器官就会自然倒向胸部,防止注射器刺入时损伤大肠、小肠等器官。进针的动作要轻柔,防止刺伤腹部器官。
3.尤其是对于体重较小的大鼠,腹腔注射时针头可以在腹部皮下穿行一小段距离,最好是从腹部一侧进针,穿过腹中线后在腹部的另一侧进入腹腔,注射完药物后,缓缓拔出针头,并轻微旋转针头,防止漏液。
4.大鼠腹腔注射的给药容积一般为5~10ml/kg。
三、大鼠尾静脉注射
这也是常见的操作,稍微有点难度,没有指导的话,一开始可能会感觉有点手足无措。但是可以肯定的说,只要掌握了方法,大鼠的尾静脉注射还是很容易的。总的来说,大小鼠的尾静脉注射难度相当,熟练后,大鼠应该比小鼠注射更容易,因为大鼠的尾巴较粗,而且血管也较粗,进针的手感比较好找。但是大鼠年龄增大后,尾部鳞片也较厚,此时尾静脉注射难度会加大,进针点宜选择两个鳞片的间隙,以利于针尖顺利刺入。
操作步骤:
1. 首先要固定大鼠,最简单的固定方法就是把大鼠麻醉,然后大鼠躺在那里不动,就可以顺利操作了。但是我们往往需要多次给药,就是单次给药的话,每只都麻醉的话,也很麻烦,而且还要考虑麻醉对实验结果和动物的影响,因此,有必要找另外的方法固定了。
再有的固定方法就和小鼠类似,做一个圆筒,最好是金属做的,(可以在当地的铁匠铺,或者买白铁铺里面定做)首先是金属比较结实,而且可以用来固定在铁架台上,方便操作。圆筒的一段有个盖子可以拿下来,盖子中间有个小孔,可以让大鼠的尾巴伸出来(中间的小孔可以用胶布缠一下,防止锐利的边缘割伤大鼠尾巴)。另外一段可以用金属网的结构,网的形状可以做成子弹头的头端形状。网状结构可以让光线透近来,方便大鼠钻进圆筒里面。圆筒的长度约15~20cm,直径约5~8cm,可以做个系列长度和直径的圆筒,适合不同大小的大鼠。操作的时候,可以把圆筒固定在铁架台上面,有铁丝网的一面稍微向上,拔下另外一头的盖子,抓住大鼠的尾巴,悬空大鼠,让大鼠的头部靠近圆筒,稍微引导一下,大鼠就会钻进圆筒,将大鼠的尾巴穿过盖子中间的小孔,盖上盖子,向外拉直大鼠尾巴,就可以进行下一步操作了。
也有直接利用大鼠笼盖的铁丝网固定大鼠,向上面小鼠固定的方法固定大鼠,那是高手所为,总共只需要一次到两次的静脉注射时可以试用,不推荐使用。
2.固定好大鼠后就是注射了,一般用一次性的5ml的注射器,去除针头,接上5.5号的头皮针,用头皮针穿刺,个人感觉比较方便,而且便于固定针头。
3.注射前首先要让大鼠的血管充盈。可以采用75%的酒精棉球擦拭的方法或者采用温水浸泡的方法,(一般水浴温度45度左右),大概2分钟就可以让尾部左右二侧静脉充分扩张,用电吹风的热风吹大鼠尾部,这种使静脉扩张的方法不但快而且操作方便,但要控制好吹的方式,不要弄伤动物。若大鼠的血管很不清楚,推荐采用温水浸泡的方法,水温以不烫手为宜。温水浸泡2~3分钟后,取出大鼠尾巴,用干棉球擦拭。等一会儿,待血管充盈后,酒精棉球擦拭后就可以进针了。若血管还不充盈,可以反复用温水浸泡,切不可冒险注射,除非你手法很熟练,另当别论。
4.大鼠尾部共有四条血管,一般认为左右的两条静脉比较容易注射,多采用这两条静脉进针。一般要求进针部位靠近大鼠的尾端,这样若注射失败的话,还可以再向上选择进针点。但是进针部位也不可以太靠下,因为越往下,静脉越细,操作越难,一般以大鼠尾巴下三分之一的位置比较好。
5.最关键的就是进针了。进针时操作者左手食指和拇指固定住大鼠的尾巴,让大鼠的尾巴在经过拇指后向下弯曲,进针点靠近拇指指甲。针头和血管呈约30°角,针尖斜面朝上,轻轻挑刺入皮肤后针头立即和血管平行,一般情况下一次就可以进入血管,可以将针头刺入血管一大半,轻轻回抽针栓,看见有明显的回血,就可以推注药液了,正常情况下,推注的过程应该没有明显阻力,血管也不会鼓起。推液时动作宜轻柔,若发现血管鼓起,那是针头没有刺入血管,需立即拔出针头,重新注射。(正常情况下,均可以看见回血,若没有回血,9成是没有进入血管,不要推药,拔出针头,重新穿刺,以防推注药液导致大鼠尾巴皮下水肿,加大穿刺的难度,若是带有颜色的液体,如伊文斯兰,就更要注意)
6.注射结束后,轻轻拔出针头,可以用干燥的棉球压一下进针点,防止液体回漏。
四、大鼠舌静脉注射
大鼠的舌静脉给药比较少见,因为他需要在麻醉状态下方可以操作。不麻醉的情况下也不是不可以,但是若不麻醉的话,既不符合动物福利,也很容易失败,而且操作人员也容易受伤。
一般在做垂体后叶素致大鼠心肌缺血的实验中,垂体后叶素的静脉注射采用舌静脉注射。
1.舌静脉注射一般采用1ml注射器,配4号针头。
2.大鼠麻醉后,仰卧位固定在鼠板上,牙齿也固定好。右手持眼科镊,轻轻拉出大鼠舌头,左手拇指和食指轻轻捏住舌尖,可见大鼠舌头两侧均有一条很清楚的静脉,一般右侧的比较顺手(我是右撇子),左手稍微绷紧大鼠舌头,不要绷的太紧,这样静脉会看的不清楚,以能拉直大鼠舌头,且能清楚看见血管为宜。
3.右手持注射器,针尖斜面朝上,和舌头血管呈15°角,挑刺入血管。(舌静脉非常浅,针尖挑刺舌面皮肤后就进入血管了),轻轻推注药液,若发现舌头有鼓起,则是注射失败。这样注射点很容易出很多学,形成血肿,这侧静脉想再次注射就很困难了,那么最好就选用另外一侧静脉了。
4.舌静脉血流很丰富,拔针时一定要用干棉球压迫注射点,帮助止血。
5.正常的舌静脉注射不影响大鼠的进食。
五、大鼠经皮肤给药
首先需要脱毛可以配制8%的硫化钠溶液,也可以自配脱毛剂,配方:硫化钠:肥皂粉:淀粉为3:1:7,加水混合成糊状软膏。用棉签将脱毛剂涂在要脱毛的部位,观察看见区域内鼠毛发粘用干净棉签沾洁净的水将脱毛部位清洗干净,大鼠一般用腹部皮肤,小鼠可用背部皮肤。
六、大鼠鞘内给药
鞘内给药有两种方式:一是急性给药,二是长期慢性给药。慢性给药,具体的说应该是在暴露出寰枕膜后将PE10管插入蛛网膜下隙,至有清亮脑脊液反流后可确定位置正确,然后将PE10管插入7.5cm达腰膨大水平,固定并缝合即可。注射反意寡核苷酸,所以直接在L4~5椎间隙进针就可以对于长期给药宜选慢性套管给药,选做好插入深度标记的PE-10导管,根据动物大小和所需埋置的脊髓节段,决定好插入深度,一般270~320g的大白鼠腰骶部约7.5cm,胸段约5~5.5cm。给药:将4号注射针头锯断,并磨尖,插在PE-10导管上,导管另一端接在另一接又注射器的4号针头上,给药时只需将钢管另一端与动物身上埋植好的PE-10导管相接即可。
七、大鼠阴道给药
大鼠阴道给药方法类似于小鼠,而且大鼠的生殖道比小鼠要长一些,会比小鼠操作相对容易一些。小鼠阴道内感染,是往小鼠阴道内注射感染菌液,开始感染时采用的是用小儿科的头皮针改做的软管向小鼠生殖道内注射,但因为小鼠生殖道很浅,而且软管本身占有小鼠生殖道的一部分体积,导致主入的菌液易漏,后来尝试用50ul的加样器每次取20ul,采取多次注射的办法。
做此类实验主要是注意感染的药物或液体不要漏出来,可以采取多次注射的办法。
八、大鼠鼻腔给药
1.有滴鼻和喷雾两种常见方式
喷雾其实就是雾化吸入。
滴鼻给药没有办法达到雾化吸入的效果。
雾化吸入需要有雾化设备,一般医院的都有,但是医院的如果借不出来,自己家里的加湿器也可以凑合。
雾化给药的时候,要把大鼠放在一个相对比较密闭的的容器中(当然要有透气孔),让大鼠尽可能多地接触药物,但是好象没有专门的这种容器,一般都是自制的,材料最好是有机玻璃。如果需要一只一只给药的话,那么大鼠固定器也可以着用。
雾化的时间如果没有特殊要求,一般来说是半个小时。
从药物进入体内分布的部位来看,滴鼻应该作用于局部为主,而喷雾/雾化吸入等给药方式可使药物进入气管,肺等部位,吸收情况应该有比较大的不同。
2.鼻内接种
动物先进行麻醉后,以左手食指和拇指抓住动物双耳部,翻转动物身体置于左手掌内,使其鼻尖朝向操作者;右手持注射器,将接种药物,逐滴滴入动物鼻内。接种量不宜过多:大鼠为0.05~0.1ml(小鼠为0.03~0.05ml;豚鼠与兔可为2ml)。
回答怎么样呢?
嘿嘿。
分~~~~
组成 柴胡15g,黄芩9g,胡黄连9g,杭白芍15g,木香9g,元胡9g,生大黄(后下)15g,芒硝(冲服)9g。
用法用量 1.对家犬胰腺外分泌功能的影响:取成年健康家犬8只在局麻下在十二指肠降段置引流管,并在术后3-10日内,在健康及清醒条件下收集十二指肠液。对已取得基础值标本的动物可开始灌喂中药。本组均用相同的固体食物作试餐以诱发动物胰液分泌。在动物进食后15分钟内收集胰液并立即测定胰酶。结果:清胰汤灌喂家犬实验前后十二指肠液内胰淀粉酶和胰脂肪酶的变化,在统计学上皆无显著性差异,而胰蛋白酶活力普遍降低,在统计学上有显著差别,P0.05。
2.对大鼠胰腺外分泌功能的影响:将柴胡、白芍各16.60g,黄芩、胡连、木香、元胡各9.36g药以清水浸泡15分钟,煮沸15分钟,加入单独浸泡过15分钟的大黄(15.60g)后再煎15分钟,过滤,冲入芒硝(9.36g)。总浓度为100%,pH5.2。选用雄性大鼠250g,腹腔麻醉,无菌原则下按Bourry法进行实验标本制备。术后第二天开始实验,各鼠每次实验至少间隔1日。实验在动物清醒状态下进行,实验前不禁食、水,但禁用任何药物。实验时固定大鼠,拨开手术部位的金属接管收集胰液。实验全过程中以慢速匀速连续注射器向大鼠尾静脉内输入0.15ml的氯化钠无菌注射液,注入量为1.7ml/小时,20分钟稳定期后,开始收集基础期胰液标本;继之向十二指肠内注入0.35ml氯化钠溶液(对照组)或100%浓度的清胰汤Ⅰ号取液(给药组),均为1.7ml/小时,进行生化分析。十二指肠注入清胰汤Ⅰ号后,大鼠胰腺外分泌则与对照组不同,流率变化不大,抑制蛋白浓度,蛋白排出也相应被抑制,P0.01增加碳酸氢盐浓度,P0.02;相应其排出也有类似变化,P0.05。提示:胰腺酶分泌的抑制及流率的保护不变可能是清胰汤Ⅰ号治疗胰腺炎的主要药理作用。
不一样,腹腔注射药物有首过效应,注射剂量要高于尾静脉注射
活性成份:聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子。由重组人粒细胞刺激因子与20KD的聚乙二醇交联反应并经纯化得到。
分子量:38.8KD
辅料:醋酸-醋酸钠缓冲液,山梨醇及聚山梨酯80 非髓性恶性肿瘤患者在接受会发生有临床意义发热性中性粒细胞减少的抑制骨髓的抗肿瘤药治疗时,使用本品可降低发热性中性粒细胞减少引起的感染发生率。
本品不用于造血干细胞移植的外周血祖细胞的动员。 据国外文献报道:
1 脾破裂
使用聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子(PEG-rhG-CSF)后有可能发生脾破裂,包括致命个案。若患者在使用PEG-rhG-CSF后左上腹或肩疼痛应评估是否发生了脾肿大或脾破裂。
2 急性呼吸窘迫综合症
使用PEG-rhG-CSF的患者可能发生急性呼吸窘迫综合症。若患者在使用PEG-rhG-CSF后出现发热和肺浸润或呼吸窘迫,应评估其是否为急性呼吸窘迫综合症。若患者出现急性呼吸窘迫综合症需停止使用PEG-rhG-CSF。
3 严重变态反应
患者使用PEG-rhG-CSF后可发生严重变态反应。所报道的事件大多发生在初次给药。变态反应包括过敏反应,可在中止最初抗过敏治疗后的数日内复发。对PEG-rhG-CSF发生严重过敏反应的患者应长期停止用PEG-rhG-CSF。对PEG-rhG-CSF和重组人粒细胞刺激因子(rhG-CSF)有严重过敏反应病史的患者不得给予PEG-rhG-CSF。
4 镰状细胞病患者使用
镰状细胞病患者使用PEG-rhG-CSF后可能发生镰状细胞危象。镰状细胞病患者在使用rhG-CSF (PEG化重组人粒细胞刺激因子的母体化合物)后可发生严重的甚至致命的镰状细胞危象。
5 对肿瘤恶性细胞生长刺激效应的潜在性
在肿瘤细胞系中发现与PEG-rhG-CSF和rhG-CSF作用的重组人粒细胞刺激因子受体,PEG-rhG-CSF作为任何类型肿瘤的生长因子的可能性不能被排除,包括PEG-rhG-CSF未被批准应用的髓性恶性肿瘤和脊髓发育不良。 以下几项严重不良反应PEG-rhG-CSF见警告与注意项:脾破裂;急性呼吸窘迫综合症;严重变态反应;在镰状细胞病患者使用;对肿瘤恶性细胞生长刺激效应的潜在性。
其他不良反应:
1.肌肉骨骼系统:骨痛、关节痛及肌肉酸痛较为常见,一般持续1-7天,严重程度多为轻度。
2.消化系统:偶有血丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶升高,发生率低于10%。
3.泌尿系统:极少有血肌酐、尿素氮的轻度升高。
4.其他系统:偶有患者出现乏力、发热、头晕、心悸、失眠、注射部位红肿硬结及注射部位疼痛。
5.免疫原性:象所有的治疗性蛋白一样,PEG-rhG-CSF具有潜在的免疫原性。对本品抗体的检测在后续研究中进行。 1、本品应在化疗药物给药结束48小时后使用。
2、使用本品过程中应每周监测血常规2次,特别是中性粒细胞数目变化的情况。
3、长期使用本品的安全有效性尚未建立。
4、若出现过敏反应,可表现为皮疹、荨麻疹,需对症治疗,若重复使用本品,过敏症状仍然出现,提示本品与过敏反应有因果关系,建议不应再次使用本品。
5、本品不可在间隔14天内及细胞毒化疗后24小时使用,因为这有潜在的可能会降低快速分泌的骨髓瘤细胞对细胞毒化疗的敏感性。
6、本品仅供在医生指导下使用。 目前还没有进行本品和其他药物之间相互作用的正式研究。但是金属锂可能对嗜中性白细胞的释放有一定的促进作用,接受锂和本品治疗的病人需要更为频繁地检测中性粒细胞的数量。
生长因子治疗使骨髓造血活力增加,从而导致骨显像变化一过性阳性,当解释骨显像原因可考虑以上结果。 本品的作用机理是粒细胞刺激因子与造血细胞的表面受体结合从而刺激增生和阻止功能活化细胞增生,受体结合机制及中性粒细胞功能的研究表明:PEG-rhG-CSF和rhG-CSF具有相同的作用机制。与rhG-CSF相比,PEG-rhG-CSF能降低血浆清除率,延长半衰期。
动物急性毒性试验选择小鼠和大鼠进行。临床成人PEG-rhG-CSF使用剂量为100 μg/kg体重为基数,相当于小鼠剂量为1230 μg/kg,大鼠剂量为620 μg/kg。以最大允许容量,对20只小鼠一次性尾静脉注射PEG-rhG-CSF 3750 μg/kg,相当于临床成人用量的3倍,PEG-rhG-CSF经大鼠尾静脉给药其最大耐受量为2250 μg/kg,相当于临床成人用量的4倍,结果表明耐受性良好。动物长期(重复给药)毒性研究,在Wistar大鼠和Beagle犬上进行。给药时间均为连续用药56天,另加21天恢复性观察期。试验设计了3个PEG-rhG-CSF剂量组和一个对照组。Wistar大鼠长期毒性试验的三个剂量分别为80 μg/kg/day, 480 μg/kg/day和790μ g/kg/day, 分别相当于人临床使用剂量的0.13倍、0.8倍和1.3倍。Beagle犬长毒试验中给予PEG-rhG-CSF的3个剂量分别为30 μg/kg/day, 110 μg/kg/day和280 μg/kg/day,分别为人临床使用剂量的0.17倍、0.6倍和1.52倍。结果显示:在Wistar大鼠和Beagle犬两种动物56天试验期和21天恢复性观察期间,各项检查指标及组织病理学均未见由于药物引起的异常改变,且均未发现延迟性毒性反应。主要的发现为中性粒细胞增多症及髓外造血活跃的组织病理改变,尤其在中剂量和高剂量明显,且绝大多数指标在停药后恢复,而无延迟性毒性反应。遗传毒性研究如Ames试验、CHL染色体畸变分析及小鼠骨髓微核试验和生殖毒性研究以及免疫毒性和/或免疫原性研究均无明显阳性发现。未见其它更高剂量用药的动物安全性数据 。
只能以10%氯化钾注射液加入到5-10%葡萄糖,或生理盐水中静脉滴注。每1000ml中,最多加入10%%氯化钾注射液15-20ml,即1.5-2.0克,构成0.15-0.2%浓度的溶液静脉滴注,每分钟不能超过30滴。
若用10%氯化钾直接静脉注射,不论大人,小孩,5-10ml,立即致人死亡!!!
若做尸体解剖,死者的心脏停止于舒张期!
关键词:大鼠尾静脉注射外泌体用量