MSC的细胞表面标志物鉴定常采用流式细胞仪来进行。MSC属混杂细胞群,其表面抗原也具有非专一性, 它可同时表达间质细胞、内皮细胞和表皮细胞的表面标志,如粘附因子、生长因子和细胞因子受体以及整合素家族等。
MSC的细胞表面标志物鉴定标准为:
① CD105、CD73和CD90阳性率≥90%;
② CD45、CD34、CD14或CD11b、CD79α或CD19、HLA-DR呈阴性,阳性率≤5%。
不同组织来源的MSC可共享相同的细胞表面标记,如CD29和CD44。
03 多向分化潜能鉴定
MSC具有在体外分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肝细胞等定向分化的能力,所以鉴定MSC的多向分化潜能也是重要的鉴定方法之一。MSC成骨诱导分化最常用的染色方法是茜素红染色法,成脂诱导分化最常用的染色方法是油红O染色法,而成软骨诱导分化最常用的方法是阿利辛蓝染色、悬浮培养。
干细胞是一类具有无限的或者永生的自我更新能力的细胞、能够产生至少一种类型的、高度分化的子代细胞。
一般来说,在干细胞和其终末分化的子代细胞之间存在着被称为“定向祖细胞”的中间祖细胞群,它们具有有限的扩增能力和限制性分化潜能。
这些细胞群的功能是增加干细胞每次分裂后产生的分化细胞的数量。干细胞具有自我更新的能力,但是干细胞的分裂实际上是相对不对称的。
干细胞鉴别方法:
人们普遍采用的干细胞鉴别方法主要有以下两种:
①利用干细胞的慢周期性,采用标记滞留细胞的分析方法来识别在体的静息干细胞。
②利用干细胞的自我更新能力,观察其在体外培养时表现出的无限的增殖能力来识别离体的干细胞。但这两种方法应用时具有一定的限制性。
研究人员普遍采用的方法是依靠干细胞的表面标志来区分和鉴定各种干细胞。干细胞的表面标志是指覆盖在细胞表面的特殊的蛋白质——受体,它能选择性地结合或黏附其他信号分子。
目前来说,直接鉴定骨髓间充质干细胞的存在并无公认的方法和统一的标准。其表面没有专属特异性的表达因子。
国内外的文献总结,MSC表达CD44+,CD105+,CD166+,CD34-,CD45-, CD73-等。但是有文献认为CD271+为MSC,也有的认为c-kit-Sca1+是MSC。
所以,你的这个问题很难回答,但是你可以就上面所述的因子,查一下相关文献。
此外,问题中,大鼠组织块里,如何有骨髓MSC,请问什么组织中?你的骨髓MSC是打入组织中,然后再鉴定吗?如果是如此,建议你采用荧光染料染色后的MSC打入组织,或者GFP表达的MSC,这样可以通过免疫荧光方法来鉴定组织中发荧光的细胞就是MSC。
如果你还有疑问可以联系:zrjia2006@126.com
做流式 cd34,cd90,cd105阳性指标要在95%以上,还有其他好几个指标,本人具体不做这方面工作,只知道这些。或者在显微镜下观察细胞形态,一般是梭形
不同的干细胞有自己特异的细胞表面抗原,鉴定细胞的种类最准确直接的方法就是用流式细胞仪检测其表面抗原。
以骨髓间充质干细胞(MSC)为例,需要鉴定CD34、CD44、SH1等表面标志。除此之外,骨髓间充质干细胞还需要进行分化实验,以证实其可以分化为骨、软骨、细胞。以上两条,即表面标志及分化实验没有问题,就可以确定培养的细胞为骨髓间充质干细胞。
不同的干细胞有不同的表面标志及分化能力,所以MSC只是做为一个例子来说明。
关键词:间充质干细胞表面标记鉴定