由于植物干细胞的独特的构造,尽管有了160年的努力,但却从来没有成功地只将植物干细胞纯粹地分离出来并培养的先例。
形成层(植物干细胞)是由具有很薄且微小的细胞壁的微小细胞层构成,在分离过程中极易受损。《Life Science》(1999)322:633-650
形成层是由狭窄地沿轴方向很细地分布的,具有很薄的细胞壁和很多液泡的细胞构成,夹在由很厚的细胞壁的维管束组织中间,有着提取时极易受损的技术性难点。《journal of Microscopy》(1997)187:77-84
形成层是植物的分裂组织,即植物的干细胞组织。形成层由很薄的细胞壁的很少层数的细胞构成,在植物体内极微量存在。由于这样的结构特点,如果施加物理性外力的话,在分离的过程中极易受损,并丧失干细胞的特性。
2005年世界首次成功分离并培养了植物干细胞。
采用两种酶两步法分离培养人睾丸精原干细胞。方法先后应用Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶消化法,Percoll密度梯度离心,差异贴壁法,进行人精原干细胞的分离及培养;采用细胞免疫荧光法进行人精原干细胞的鉴定;流式细胞法对Oct-4标记阳性的细胞进行筛选,并同时检测所获精原干细胞的纯度,建立精原干细胞和支持细胞共培养体系。结果两种酶两步法消化的人睾丸细胞悬液活细胞率为91.07%,Percoll密度梯度离心结合差异贴壁离心纯化后的细胞经Oct-4细胞免疫荧光法检测表达阳性,流式细胞技术检测阳性细胞所占比例为86.7%,该阳性细胞能够在支持细胞饲养层上稳定生长30 d。结论所获Oct-4表达阳性细胞为精原干细胞。Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶两步酶消化法是一种经济、简单易行、对细胞污染损伤少的分离培养人精原干细胞的方法,利用此方法分离的人精原干细胞能够在支持细胞饲养层上形成稳定集落。
干细胞大部分都是别人捐的,或者是取自于亲属的,很少有自体去提取的,因为像白血病,再障等疾病,本身干细胞具有问题,字体提取,根本没有治疗作用
关键词:干细胞分离提取