结肠干细胞怎么分离

　　

什么是结肠干细胞

　　结肠干细胞（Colonic stem cells）是一种重要的基础研究领域，它们具有不同的分裂活性与增殖能力，能够维持肠道内皮组织稳定与细胞更新。结肠干细胞研究对于治疗结肠癌等疾病具有重要意义。

　　

干细胞的分离方法

　　目前，主要有两种方法：空泡法和酶解法。

　　

空泡法

　　该方法是将组织操作于一个含25mM HEPES、137mM NaCl、5.4mM KCl、0.8mM MgSO4、1.5mM CaCl2、10mM glucose以及10mM NaHCO3的人工代用体液（PH7.4），并加入酶消化液，如collagenase和dispase等，分别在37℃和30-37℃下进行。通过反复冲洗、离心和过筛后得到含有单个细胞的上清液。这种方法所分离到的细胞大多数是粘附性细胞，因此不利于分离结肠干细胞。

　　

酶解法

　　酶解法的主要步骤是将完整的结肠组织操作于含有EDTA、DNase和Collagenase的缓冲液内。通过反复冲洗、离心和过筛后得到单个细胞悬液。此方法能够分离出CD133+、CD44+ 和 Lgr5+结肠干细胞，也可以渐进性（from bottom to top）地将上清剂倒出，分离纯的干细胞群体。

　　

结肠干细胞的识别标志物

　　识别结肠干细胞的标志物有多种，其中包括：CD133、Lgr5 和 CD44 等。

　　

CD133+结肠干细胞

　　CD133是一种表面标记蛋白分子，广泛存在于多种细胞类型中，但只在少数干细胞中高表达。有研究显示，人结肠中有5-10%的上皮细胞即为CD133+肠道干细胞。CD133的鉴定可通过流式细胞术或荧光显微镜观察，这一方法普遍使用于分离人肠道上皮的嵌合物（crypts）。

　　

Lgr5+结肠干细胞

　　Lgr5是一种细胞表面标志蛋白，适用于除了人以外的大多数物种。Lgr5+细胞在小肠和结肠中都有发现，并能够不断分裂进行自我更新。Lgr5+细胞可以通过以上提到的酶解法进行分离。

　　

CD44+结肠干细胞

　　CD44是一种产生多个不同外显子形式的跨膜糖蛋白，其作用是在不同的细胞和组织类型中介导细胞偏导、细胞-细胞互作和胶原基质附着。同时，CD44也被认为是一种标识“浸润性”肿瘤但不包括结肠腺瘤的生荚型结肠腺癌（CR-CRC）的细胞表面标志蛋白。流式细胞术可以用来检测和分离CD44+细胞。

　　

结肠干细胞的应用前景

　　随着对结肠干细胞的深入研究，越来越多的学者开始探讨其潜在应用。

　　

调节肠道微生物组

　　研究表明，结肠干细胞通过其分泌的信号分子可以调节肠道微生物组。肠道微生物组与人体自身免疫、代谢和认知等方面密切相关。因此，借助结肠干细胞对于调控肠道微生物群落具有重要的应用价值。

　　

治疗结肠癌

　　结肠癌是常见的消化系统恶性肿瘤之一。研究显示，结肠干细胞与结肠癌发生有关，并且肠道上皮细胞中的某些突变可以使非干细胞成为“干型”细胞。因此，结肠干细胞在结肠癌治疗中也有着广泛的应用前景。

　　

治疗克隆氏症

　　克隆氏症是一种罕见的遗传性疾病。在这种疾病中，人体某些细胞会被错误地复制或分裂，形成与原始细胞完全相同的群体。结肠干细胞的使用可以帮助诊断、治疗克隆氏症患者。

　　

重建人工肠道

　　在现代医学技术中，重建人工肠道已经成为一种常见的方法。利用结肠干细胞可以进行肠道组织的再生和修复，从而帮助重建人工肠道。

　　总而言之，结肠干细胞在当今的医学研究中具有广泛的应用前景，其分离也逐步变得更为容易和标准化，未来相信会有越来越多的相关研究涌现。