作为一名生物科学专业的学生,我深知干细胞在医学领域中的巨大潜力。因此,我决定提取我的干细胞来进一步探索这个领域。
提取干细胞的第一步就是要收集样本,通常我们可以采用皮肤或口腔黏膜中的细胞作为样本。在这里,我选择了皮肤细胞。
收集到皮肤细胞之后,需要对其进行处理。我将细胞放入面积为25cm^2的T75 细胞培养瓶中,加入9毫升DMEM 低糖培养基和1毫升10% FBS混合液,在CO 孵化箱中维持37°C和5% CO 的条件下培养。
接下来,我需要将皮肤细胞诱导成干细胞。我使用的是基因转染法,在细胞培养上清液(60-80% 连续培养三代)中加入干细胞诱导因子;每隔24小时翻一次,在诱导6~8天左右即可看到干细胞的出现。
在出现干细胞后,我需要对样本进行筛选以确保纯度。使用Trizol 细胞裂解试剂将细胞体处理并取出总RNA,进行cDNA 合成及qPCR 分析,验证表达了一部分干细胞标志物,如Oct4, Sox2, Nanog 等。质余比应大于 1.8。
最后,我将干细胞通过凝胶分离技术进行纯化。我将细胞放入凝胶分离管中,并添加凝胶移液器缓冲液使细胞完全悬浮于缓冲液中。然后,我用由26号针和已经预制好的移液器组成的移液器-针复合体穿过凝胶分离管的针孔从上向下射出。
这样,我就成功地提取了我的干细胞。虽然这个过程可能会有一些复杂,但干细胞的潜力无疑是巨大的。通过这个方法,我相信我们可以探索更多关于干细胞的秘密,并为医学领域的发展做出更大的贡献。