1. 温度条件
理想的细胞储存温度为零下 196 摄氏度,即液氮温度。
此温度下,细胞的代谢活动几乎停止,细胞损伤风险降至最低。
液氮储存罐必须定期补充液氮,确保温度始终保持在 -196 摄氏度。
2. 储存环境
细胞应储存在无菌、无交叉污染的环境中。
储存罐应置于受控温度的房间中,避免阳光直射和温度波动。
建立严格的出入控制流程,防止未经授权人员接触细胞。
3. 细胞制备
在储存前,细胞应进行仔细制备,去除残留物质和杂质。
细胞浓度和活率应符合标准,以确保储存后的细胞质量。
制备过程应符合国际公认的细胞库操作规范 (cGMP),确保细胞的安全和有效性。
4. 储存时间
理论上,细胞在液氮中可长期储存,但储存时间会影响细胞活性。
不同类型的细胞具有不同的储存寿命,通常在 5 至 30 年之间。
定期监测细胞活率,以评估储存效果并确定是否需要重新储存或更换细胞。
5. 解冻与培养
解冻细胞时,应使用经过验证的协议,快速且小心地解冻,以最大限度地减少细胞损伤。
解冻后,细胞应在指定的培养基中进行培养,提供必要的营养和生长因子。
培养条件应优化,以促进细胞生长和分化。
6. 质量控制
建立全面的质量控制系统,监控细胞储存过程的每个方面。
定期评估细胞活性、纯度和无菌性。
对储存环境和设备进行定期维护和校准。
实施持续改进计划,不断优化储存条件和流程。
莱利赛生物:细胞储存领域的先驱
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细胞储存:确保细胞活力和可用性的关键条件
1. 储存温度
细胞的最佳储存温度因细胞类型而异,但一般在-80°C 至 -196°C 之间。
低温可以抑制新陈代谢,减少细胞损伤和死亡。
2. 储存介质
储存介质是一个保护细胞免受脱水和冷冻损伤的溶液。
常用的储存介质包括胎儿血清、血浆和无血清培养基,以及冷冻保护剂(如二甲基亚砜和丙烷二醇)。
3. 冷冻方法
冷冻细胞时,重要的是缓慢而受控地降温,以避免冰晶的形成,这会损坏细胞膜。
最常见的冷冻方法是程序化冷冻,它涉及逐步降低温度,同时添加冷冻保护剂。
也可以使用玻璃化冷冻,这是一种更快速的降温过程,可产生玻璃状状态,从而最大程度地减少冰晶形成。
4. 复苏方法
复苏细胞时,重要的是快速而小心地升温,以避免热休克。
最常见的复苏方法是快速解冻,它涉及将细胞放在 37°C 的水浴中。
也可以使用梯度解冻,这是一种更温和的方法,涉及逐渐增加温度以减少对细胞的损伤。
5. 储存容器
细胞应储存在无菌且密封的容器中,以防止污染和脱水。
常用的储存容器包括冷冻管、冻存瓶和安瓿。
6. 污染防止
储存细胞时防止污染至关重要,因为污染会导致细胞死亡和储存失败。
无菌技术、抗生素和真菌剂的加入以及定期监测污染可以帮助防止污染。
7. 细胞密度
储存细胞的密度至关重要,因为过高的密度会导致营养缺乏和细胞死亡,而过低的密度会浪费储存空间。
最佳细胞密度因细胞类型而异,但通常在每毫升百万至十亿个细胞之间。
8. 储存期限
细胞的储存期限因细胞类型和储存条件而异。
某些细胞(如干细胞)可以在适当的储存条件下储存数年甚至几十年,而其他细胞(如原代细胞)的储存期限可能更短。
9. 质量控制
储存细胞时进行质量控制至关重要,以确保细胞的活力和可用性。
质量控制措施包括活性测试、污染检查和形态评估。
10. 运输
运输细胞时,保持合适的储存条件以避免细胞损伤至关重要。
所需的储存条件将取决于运输时间和距离,并且可能需要使用液氮干冰箱或其他专门的运输系统。
结论
储存细胞时,优化储存条件对于确保细胞活力和可用性至关重要。通过仔细控制储存温度、介质、冷冻方法、复苏方法、容器、污染防止、细胞密度、储存期限、质量控制和运输,可以最大程度地减少细胞损伤并确保细胞储存的成功。
关键词:免疫细胞