免疫细胞采集质控研究（免疫细胞机采）

本文目录一览：

• 1、了解了“免疫细胞”，那么它的具体的操作流程究竟是怎样的呢？
• 2、免疫细胞如何守护人体健康？
• 3、如何采集免疫细胞？是不是很麻烦呢？
• 4、免疫组化技术的标准化质控管理
• 5、流式细胞免疫分析的质量控制包括哪些方面

了解了“免疫细胞”，那么它的具体的操作流程究竟是怎样的呢？

我们都知道现在有一种自体免疫细胞疗法，主要是通过提取患者体内不成熟的免疫细胞，也就是采血，然后在实验室中进行培养使其具有一定能力后，再输回到患者体内。那么你是否了解它的临床操作流程具体是怎样的呢？

下面我们就带大家来看看具体的操作流程吧：

一、细胞采集前的评估与准备

1.掌握患者心理特点。

在细胞采集前我们要向患者及其家属讲解本次治疗的目的以及治疗的基本操作流程，让患者更多的了解可能会出现的副作用和需要配合的注意事项，使它有更多的心理准备，可以减轻思想顾虑并且签署知情同意书。

2.必查项目：血常规、传染病八项（乙肝五项、梅毒、艾滋、丙肝）。

3.血管的准备：要选择比较大、粗、直、而且不容易滑动、弹性好的血管，避免在有静脉炎、擦伤、硬结、瘢痕、皮肤有破损处进针。

4.保证充足的睡眠，避免受凉，预防感冒。

5.饮食指导：

(1)采集前1天患者需注意饮食，禁止食用油腻的食物，要保持饮食的清淡，最好是富含铁、钙类的食物。

(2)患者采集细胞的当天可以进食，但是需要根据采集的时间和病情，然后在早餐或中餐中食用含适量盐份的汤类、牛奶200〜400ml或普通的食物。

(3)采集前20分钟需要口服10%葡萄糖酸钙注射液10〜20ml左右，这样可以采集时出现预防枸橼酸的反应，例如口服葡萄糖酸钙液体可以根据患者血糖指数及个人习惯加入葡萄糖液改善口感。

6.要嘱咐患者在采集当天携带住院病历或门诊系列检查报告单。

　 　二、细胞采集

1．细胞采集前我们要准备一次性的50 ML的注射器一只，一次性7号或12号静脉采血针一个，还有无菌布一块，抗凝剂（肝素钠（12500U /2 ml））一支。

2在这之前，我们要仔细查看检验报告单和知情同意书，认真核对病人信息以及治疗方案，确认没有错误后，就可以开始填写注射器上的标识了。

3.标识需要标明病人信息，然后贴在注射器上，注意不要覆盖刻度；然后就可以准备无菌治疗盘，放上备采集的血样进行备用。

4.在采血前还要最后一次的对病人信息再次进行核对，以免出现错误。

在选择穿刺血管的时候：我们常规情况下都是选则取肘部粗大的血管，例如贵要静脉、正中静脉或头静脉（避开瘢痕及皮损）。

5.采血过程中要严格执行无菌技术的操作，按照常规浅静脉穿刺技术进行穿刺。

　 　三、采集后处理

1.在对病人采血完毕后，要迅速拔出采血针，然后按压穿刺点5－10分钟后，检查一下穿刺点在没有出血情况后，就可以将患者送回病房了，此时要嘱咐病人需要卧床休息30－60分钟，可以适当的饮用一些温开水；然后将采血针内的血液抽到注射器内，套回针套，旋紧，将管打结、固定完成后即可。

2.最后要再次认真核对注射器上的标识信息，确认无误后，将血样放在无菌布里包裹好，在装在运送箱里，进行严实的封闭。结束后，就可以嘱咐外送人员将血样送到实验室里进行分离和培养。

3.分离和结束后，就可以将免疫细胞治疗单和相关检验报告复印件随血标本一起送回实验室存档。

　 　四、细胞培养

我们细胞培养的过程一定要严格在符合国家规定的无菌GMP细胞操作室里进行。

　细胞培养成分和添加物（培养液、细胞因子、血清等）以及制备过程所用的全部耗材的来源和质量认证，都必须符合临床使用的质量要求，一定要采用无动物血清培养基来进行细胞培养。

[if !supportLists]五、[endif] 控制 细胞质 量的稳定

控制细胞的质量主要分为两大步，一是检定细胞，二是检测细胞外源因子。

(一）每批免疫细胞的检定 ：

(1)首先要控制细胞的数量和存活率：细胞的数量至少要满足临床的最低要求，而且存活率应必须满足不低于85%。

(3)另外我们还需要进行无菌试验：每批培养的体细胞在患者输注前都要进行无菌试验，这样才能保证输进去的细胞是无携带病菌并且高质量的。

(4)之后还要检测体内细胞的纯度和均一性。

(5)最后还要检测细胞生物学的效应。

　 　(二）体细胞制品外源因子的检测包括：细菌、真菌、支原体和内毒素。

　 　六、细胞回输

细胞回输属于 静脉输注治疗 ：主要是由临床科室的护士负责的。

当我们的治疗时间到了第15天之后，我们就可以开始按照生物免疫治疗中心出示的《细胞回输计划单》的相应要求进行细胞回输了。其中具体的回输细胞的类型将视患者病情决定。

总结：

以上就是免疫细胞疗法的具体流程了，相信大家看了之后对此都有了一定的了解，如果想要更多的了解一下，欢迎来联系我们呦！

免疫细胞如何守护人体健康？

自新冠疫情爆发以来，“免疫力”成为了大家口口相传的网络热词。因为面对病毒，除了研发疫苗，我们并没有找到更好的治疗方式， 只有提高自身免疫力，才是比较靠谱的“保命”措施 。

那么，究竟什么才是免疫力？我们的免疫系统又是如何对抗病毒的呢？

免疫力是我们身体的免疫系统联合作战的能力，而这个系统的核心就是免疫细胞。一旦这些负责“吞掉”有害的病菌、病毒的 免疫细胞减少了，免疫系统就失去“保卫”能力，身体就更容易生病 。

其实，我们每一个人都是一个小宇宙，体内蕴藏着大约 60万亿个细胞 ，每一个细胞都是一颗颗小星星，他们不断生长、繁衍、代谢，组成了我们一个个鲜活生命。

免疫细胞，他们就像一个个战士保卫着我们身体的健康 ，而免疫细胞与脾脏淋巴结等免疫器官一起共同组成了人体的免疫系统，并随着人体的生长发育逐步完善。 

当免疫系统一旦发现有细菌、病毒的入侵或发现变异衰老的细胞时，会立刻动员免疫细胞部队将其歼灭。

每天，有数以亿计的免疫细胞在人体骨髓中生成，而每个成年人体内大约有 2万亿个免疫细胞 ，他们一直在守护着人体的健康。

人体的免疫细胞主要包括巨噬细胞、自然杀伤细胞（NK细胞）、粒细胞等 先天性免疫细胞 ，又称非特异性免疫细胞，以及T细胞、B细胞等 获得性免疫细胞 ，又称特异性免疫细胞，这两大类。 

当机体发现细菌、病毒、肿瘤细胞等异物后，首先发挥作用的是先天性免疫系统，他们是机体的常规部队，例如，NK细胞可以探测到肿瘤细胞病菌的相关分子，通过释放穿孔素和颗粒酶，清除衰老细胞、肿瘤细胞以及被病菌感染的细胞。

巨噬细胞如同工程兵，主要对死亡的细胞及病原体进行吞噬和消化，清扫战场，并激活淋巴细胞或其他免疫细胞。

此外，树突状细胞也能迅速对外部入侵者起反应，他们是机体的雷达，不断在体内巡逻，寻找任何潜在的威胁。一旦树突状细胞发现敌人，例如肿瘤细胞就会及时将其捕获，然后将入侵者的抗原信息传递给机体的导弹部队T细胞。

T细胞是肿瘤的天敌 ，它有很多类型，其中活化后的细胞毒性T细胞，如同精确制导的导弹，释放穿孔素颗粒酶，在肿瘤细胞的表面打孔，引起肿瘤细胞裂解，并诱导肿瘤细胞凋亡。 

除体细胞外，体内的另一种特异性免疫细胞B细胞则可以分泌抗体，防止机体受到细菌病毒的感染。

研究表明，人体内的细胞本身也有生命周期，正常人体内 每天约有100亿个细胞在生长和更新 ，在代谢过程中，细胞内的基因会因为环境因素而导致异常，即便是健康人，体内每天也大约有 1万到100万个细胞可能发生变异 ，当异常的突变积累到一定程度，细胞就转变为癌细胞。 

正常情况下机体有免疫系统的保护，能及时识别和清除衰老，变异或是被细菌病毒等感染的细胞。但当免疫力变弱，免疫部队战斗力下降时，则容易发生感染、肿瘤等疾病。

近年来，随着生命科学领域的突破性进展 ， 我们可以对自身的一部分免疫细胞进行特训，提高其战斗力。

比如，我们可以从血液中采集健康、富有免疫活力的种子细胞，在严格质控的细胞试验室内，完成对这些种子细胞的培养、扩增或改造等特训过程，从而组成一支免疫细胞的特种兵部队。再通过静脉介入等方式，将这些优秀的特种兵补充到人体内。 

这些特种兵一方面有着极强的杀伤力，可以直接参加战斗，同时，他们还可以对人体内原来功能低下的免疫细胞战士进行“救死扶伤”，增强这些部队的战斗力，从而逐步恢复和增强整体免疫力，有效清除体内的变异细胞，被病毒感染的细胞或肿瘤细胞，恢复人体健康。

用细胞技术留住青春

医学研究表明，人体的免疫力在青壮年时期达到鼎盛阶段， 随着年龄的增长，新的免疫细胞更新能力减弱，衰老的免疫细胞必须工作更久，负荷更重，造成免疫部队中“老弱病残”数量急剧增加，对抗病毒和细菌、清除变异细胞的能力也逐年减弱，患病风险也相对增加。

由于人体是由细胞组成的，所以人体的疾病、衰老和亚健康等状态都与我们的免疫细胞功能密切相关。

适当补充细胞，为健康做储备。

在人生的整个旅途中，随着年龄的增长，我们的免疫力、免疫细胞都会不断的衰退——环境的污染、辐射线、紫外线、病毒及病菌的感染及不良的生活形态，也会影响到免疫细胞的活性。

老以后，机体将不再能像从前那样“抵抗感染”，免疫力的弱化也让我们的健康每况愈下。 因此， 最好的保健，就是适当补充免疫细胞，为健康做储备 。

如何采集免疫细胞？是不是很麻烦呢？

对细胞存储者进行全面的健康评估之后，使用自动化的细胞采集设备，选择性地采集外周血中活跃的免疫细胞，分装成数十份后存储于-150℃以下超低温环境中，以备需要时复苏使用。跟常规的体检采血一样，只需通过静脉采集外周血的方式进行即可

免疫组化技术的标准化质控管理

免疫组化技术的标准化质控管理 【关键词】 免疫组织化学；病理学,临床；质控管理

免疫细胞学是免疫学与细胞化学相结合的一个分支学科，它是在免疫学理论基础上利用抗原与抗体的特异性反应，在细胞或组织中定位抗原或抗体。免疫组化技术是用标记物或显色物标记的抗体检测细胞和组织内的抗原，从而达到诊断和研究疾病的目的。随着免疫组织化学技术在临床病理研究与诊断中的广泛应用，因其反应步骤多，影响因素复杂，质量控制已被越来越多的病理技术专家重视。2008年全国病理学技术进展和应用研讨会上提出将质控应用到免疫组化技术上。本文对免疫组化技术的标准化质控管理进行了探索，现介绍如下。

1 标本的固定

为了更好地保持细胞和组织原有的形态结构，防止组织自溶，必须对标本进行固定。标本固定的好坏是影响病理诊断的关键，同样也影响免疫组化的结果，所以固定是质控的首要也是关键步骤。影响标本固定主要因素有以下几点。①标本离体后固定不及时：一般离体标本要求15 min内必须固定[1]，最好是在手术室由专业的护士将离体的标本用清水冲洗干净后立即放入质量浓度40 g/L中性甲醛内，固定液的用量为标本体积的5～10倍。而目前本院手术室做不到这一点，这就要求病理技术员在接到标本后要及时固定，不能延误时间。但是在手术室和路上延误的时间不能控制。因此，呼吁临床医生应和病理科联合起来，将标本固定地点放在手术室，以使标本及时固定，减少因固定不及时而出现的诊断困难。②标本固定的时间：40 g/L中性甲醛渗透速度一般是2 mm/h，随着时间延长速度会逐渐减慢，增加浓度反而会降低渗透速度。一般手术标本用40 g/L中性甲醛固定的时间以12～24 h为佳，最长不要超过72 h；如穿刺标本可用AFF液固定2～4 h。有研究显示，用40 g/L中性甲醛固定1周后的标本，其组织抗原几乎不能被检出[1]。但是，日常工作中常常会遇到有人催发病理报告的情况，他们希望病理科的报告最好像检验科那样早晨送下午就能拿到。这种情况下只有缩短制片程序，包括固定时间，这种操作只会增加病理诊断的风险，埋下误诊的隐患。③固定液的种类及浓度不恰当：免疫组化检测常用的固定液有40 g/L中性甲醛、40 g/L钙?甲醛、40 g/L多聚甲醛磷酸缓冲液等。穿刺标本可用AFF液固定。固定液浓度过高、过低都会因组织固定差而导致组织抗原丢失或易出现非特异性背景染色，从而影响免疫组化结果。EDTA是用于骨组织脱钙的螯合剂，因在脱钙过程中对组织的破坏性小而得到广泛使用，缺点是脱钙时间太长。④标本固定时处理不当：如淋巴结组织往往因包膜没切开，影响了固定液的渗透，而使组织固定差。大标本因没切开固定，而使标本固定不匀等，都可影响免疫组化染色。我们接诊了很多低级别医院来会诊标本，都存在以上问题，因固定差而直接影响免疫组化结果及诊断。

2 切片与烤片

免疫组化检测的切片厚以3～4 μm为宜，淋巴结组织可行2 μm厚切片，太厚影响染色结果和诊断。因免疫组化反应步骤多，易出现脱片现象，需要将载 玻 片处理后方可使用。处理方法：先将载 玻 片用肥皂水洗净后，放入清洁液中浸泡12～24 h，清水冲洗2 h，蒸馏水洗5遍，体积分数0.95乙醇浸泡后，用干净的绸布擦干，再挂胶。挂胶方法有很多种，如： APES、铬矾明胶液、多聚赖氨酸等。切片裱片要完整，不能有气泡，烤片时温度不能过高，65 ℃烤30 min即可进行染色。烤片时间过短易造成脱片，温度过高或过长可破坏抗原。

3 减少或消除非特异性染色

组织中非抗原抗体反应出现的阳性染色称为非特异性背景染色。最常见的原因是蛋白吸附于高电荷的胶原和结缔组织成分上。常见的消除方法有：①在滴加第一抗体前用体积分数0.02～0.05山羊血清或牛血清封闭组织上带电荷基团，而除去与第一抗体的非特异性结合。此种方法一般用于不需抗原修复的抗体或内源性生物素较高的组织效果佳。②体积分数0.03～0.06过氧化氢法是目前最常用的方法之一，我们认为体积分数0.05过氧化氢处理10～15 min的效果较好。③洗涤过程中用高盐缓冲液冲洗切片，也是消除非特异性染色的方法之一。方法是将磷酸缓冲液中加入10 g/L的氯化钠（pH 7.4）。④稀释抗体浓度，但必须通过阳性对照来掌握稀释的最佳浓度。我们的实践证明，应用北京中杉试剂公司生产的PV?9000二步法试剂盒，可有效地避免内源性生物素造成的非特异性染色，且操作简便。4 抗原修复

免疫组化在病理学上的应用常因甲醛固定等因素影响造成抗原失活。解决因固定包埋导致抗原失活的问题有3个途径：①开发新型抗体以识别甲醛固定后的组织抗原或提高免疫组化试剂的'灵敏度；②用改良固定液取代甲醛；③挽救因甲醛固定而失活的抗原，即抗原修复。而后者因方法简单而增敏效果显著，在病理技术中得到广泛应用。抗原修复是影响染色结果的最关键因素，目前最常用的是加热煮沸法，少数用酶消化法。加热抗原修复是1991年由SHI等最先报道，其机制是通过加热打开了组织抗原因甲醛固定所引起的抗原表位的交联。修复的方法有高压法、微波法、水浴法等。英联邦免疫细胞化学室间质控组织（UK NEQAS?ICC）进行的有105家实验室参与、历时两年的研究结果显示，ER、PR染色偏弱是由于微波加热时间不足与实验中操作控制不当所致，强烈推荐使用高压抗原修复[2]。国内也有专家研究表明，目前抗原修复最突出和最顽固的问题是修复不够。各种修复方法染色强度比较，高压法水浴法微波法。抗原修复液常用的有枸 橼 酸缓冲液（pH 6.0）、EDTA缓冲液（pH 8.0～9.0）等。在2008年全国病理学技术进展和应用研讨会上周小鸽教授做了以下实验（图1）：A类抗原在任何pH条件下，修复效果都很好；B类抗原在低和高pH时，修复效果好，但在中等pH时，修复效果很差；C类抗原随着pH的增高，修复结果越来越好。如果实验室只想用1种修复液，又能兼顾3类抗原，就可选择图中3条曲线最靠近的区域所对应的pH值，此处所对应的pH为8.0～9.0。因此，他认为高pH修复液比低pH修复液更好。我们认为高压修复具有压力稳定、受热均匀、阳性检出率和阳性强度高、背景着色少等优点，对核染色阳性的抗原用pH 9.0的EDTA修复液效果较好，胞浆胞膜染色阳性的用pH 8.0的EDTA抗原修复液修复的效果较好，但如果采用pH 9.0的EDTA在高压修复时易脱片。高压修复的方法是：先将高压锅内的修复液煮沸，将切片放入高压锅内，将压力加热至最大（105 kPa）1～2 min,加热功率不要大于1 000 W。有研究表明，Ki67与P53在使用电磁炉加热时，随着功率的增强，阳性强度反而减弱。我们认为只要功率在800 W左右，不管是电磁炉还是电炉加热对免疫组化的结果影响都不大。

流式细胞免疫分析的质量控制包括哪些方面

仪器的质控，每天的CST

试剂的质控，试剂的储存，保质期，新旧试剂的对比

操作流程的质控，商品化的阳性，阴性标准品是否可以得到稳定的结果