细胞要冻存后多久才能复苏（细胞冻存和复苏）

本文目录一览：

• 1、细胞在零下196度多长时间可以复苏
• 2、细胞冷冻后,还是可以复活。那为什么人被冷冻后却不再复活?
• 3、细胞的冻存与复苏要注意什么 – 手机爱问
• 4、人死之后冰冻起来，等将来技术成熟之后再解冻，能否复生？
• 5、有科学家做过实验，第一位冷冻人啥时候能复苏？

细胞在零下196度多长时间可以复苏

这个温度是保存细胞的 复苏细胞要快速溶解 从﹣196度拿出之后立马放37度水浴锅中，边晃动便溶解，估计一分钟左右即可溶解，然后离心 、重悬，之后加入新鲜培养基，放37度培养箱培养即可。

细胞冷冻后,还是可以复活。那为什么人被冷冻后却不再复活?

冷冻复活面对最大挑战是,人可不是薄薄的一层细胞,要同步冷冻基本是不可能的。但冷冻复活的条件是在最短时间内让细胞完全冰冻从而停止生命活动,但如果降温太快的话细胞中的水分会结冰从而破坏细胞结构,太慢的话人会冻死而不是冷冻保藏。而且现在升温复活的技术完全不具备,再加上愿意冷冻保藏的人基本上都是老人或者重病的人,就算技术成熟了,能不能坚持渡过升温复活那段时间也很难说

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细胞的冻存与复苏要注意什么 – 手机爱问

细胞冻存与复苏步骤注意事项

一、原理

在不加任何条件下直接冻存细胞时，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等，能引起细胞死亡。如向培养液加入保护剂，可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在－130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。

细胞复苏时速度要快，使之迅速通过细胞最易受损的－5～0℃，细胞仍能生长，活力受损不大。

目前常用的保护剂为二甲亚砜（DMSO）和甘油，它们对细胞无毒性，分子量小，溶解度大，易穿透细胞。

二、操作步骤

（一）冻存

1、消化细胞（同实验二），将细胞悬液收集至离心管中。

2、1000rpm离心10分钟，弃上清液。

3、沉淀加含保护液的培养，计数，调整至5×106/ml左右。

4、将悬液分至冻存管中，每管1 ml。

5、将冻存管口封严。如用安瓿瓶则火焰封口，封口一定要严，否则复苏时易出现爆裂。

6、贴上标签，写明细胞种类，冻存日期。冻存管外拴一金属重物和一细绳。

7、按下列顺序降温：室温→4℃（20分钟〕→冰箱冷冻室（30分钟）→低温冰箱（－30℃ 1小时）→气态氮（30分钟）→液氮。

注意：操作时应小心，以免液氮冻伤。液氮定期检查，随时补充，绝对不能挥发干净，一般30立升的液氮能用1～1.5月。

（二）复苏

1. 细胞实验室进行常规消毒，紫外照射40min以上。

2. 培养液（DMEM）、0.25％胰蛋白酶（Trypsin）恒温水浴箱370C预热20min，备用。

3. 二甲基亚砜（DMSO)在40C冰箱中冷藏30min，备用。

4. 从液氮保存罐中取出冻存管，立即放入400C水浴中，快速摇晃，直至冻存液完全融化。

5. 将细胞悬液移入15ml离心管，缓慢加入4ml培养液，离心（1000r/min，5min）。

6. 用培养液悬液混悬沉淀细胞，调整细胞浓度，方培养箱中培养。

7. 记录复苏日期。

【注意事项】

1. 取细胞的过程中注意带好防冻手套，护目镜。此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。

2. 冻存液的问题：冻存液的配置已是常识，在这里不作详述，但二甲基亚砜（DMSO）对细胞不是完全无毒副作用，在常温下，二甲基亚砜对细胞的毒副作 较大，因此，必须在1-2min内使冻存液完全融化。如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤，二甲基亚砜（DMSO）最好选择进口产品。

3. 离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二甲基亚砜浓度较高，注意加入少量培养液可稀释其浓度，以减少对细胞的损伤。

4. 离心问题：目前主要有两种见解。一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养，第二天换液。因为离心的目的是两个，去除 DMSO，去除死细胞，这个是标准流程，但对一般人来说，把握不好离心转速和时间，转的不够活细胞沉底的少，细胞就全被扔掉了，转过了活细胞会受压过大， 死亡。此外在操作过程中容易污染，所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜（DMSO），DMSO对细胞有一定的毒副作用，所以须将离心后的液 体前倒净，且一定倒干净。我在试验中按照常规的离心分装的方法进行复苏，结果无有异常。

5. 细胞贴壁少的问题：教科书中说明冻存细胞解冻时1ml细胞液要加10ml－15m培养液，而在我的试验中的经验总结为培养基越少细胞越容易贴附。

6. 复苏细胞分装的问题：试验中我的经验总结为复苏1管细胞一般可分装到1-2只培养瓶中，分装过多，细胞浓度过低，不利于细胞的贴壁。

7. 加培养基的量放入问题：这个量的多少的把握主要涉及到的问题是DMSO的浓度，从如果你加培养基的太少，那么DMSO的浓度就会比较大，就会影响 细胞生长，从以前的资料来看，DMSO的浓度在小于0.5%的时候对一般细胞没有什么影响，还有一个说法是1％。所以如果你的冻存液的浓度是 10％DMSO的话那么加10ml以上的培养基就恰好稀释到了无害浓度。

人死之后冰冻起来，等将来技术成熟之后再解冻，能否复生？

从理论上分析是可行的。但是短期不可达成。现在，在实验室的细胞冻存技术已经非常普遍，就是把细胞放到液氮里长期保存，需要用时再复苏。细胞冻存时需要加冻存液，并且缓慢冻存。如果不加冻存液直接冻存，细胞内外的水会形成结晶，引起一系列的不良反应。例如，细胞脱水，局部电解质溶液浓度增高，PH值变化，造成蛋白质变性等不良后果。并且，水形成的结晶如果比较多，随温度的降低，结晶体积增大，破坏细胞膜结构和造成DNA的架构被破坏，细胞死亡。缓慢冻存，能使细胞内的水份排除，减少结晶的形成。我总结人体冷冻保存，要解决的有细胞结晶受损和器官缺乏营养衰竭死亡的问题。这就需要在人体器官衰竭前迅速用对机体细胞无害冻存液替换掉体液，并且使整体达到冻存状态。而且，在复苏的时候也要注意修复受损的一些问题。目前，世界上已经有很多例人体冻存，但并未尝试过复苏。其实，广义的人体冻存已经应用于临床，也就是器官移植，要移植的器官短期保存。但是，整体冻存技术还是不成熟。人体结构很复杂，每个部分冻存的条件不相同，冻存复杂，可能需要分开冻存。并且，由于大脑结构功能的，稍有破坏就可能造成不可逆的毁灭性伤害。这就寄希望于纳米修复技术，显然这个技术现在还处于起步状态，短期内冻存人体复苏是无法实现的。现阶段人体冻存保存，谁也不不能保证其可靠性，都还是寄希望于未来的技术进步。抛开冻存花费成本和需要解决的社会关系等问题，可以说，人体冻存现在还是一个对未来美好愿望，对一些身患重症现在医疗条件无法治愈的人来说，选择冻存，还有一线希望。

有科学家做过实验，第一位冷冻人啥时候能复苏？

在1967年，加州大学的一位心理学家詹姆斯·贝德福德（James Bedford）因为癌症去世。在贝德福德去世后几小时，按照他生前的遗嘱，他的遗体被冷冻保存起来，成为全球第一位“冷冻人”。

按照人体冷冻技术的设想，当人因为绝症而死亡之后，把遗体迅速用温度低至零下196摄氏度的液氮来冷藏。在这种极低的温度下，让遗体中的细胞不会死去，而是进入休眠的状态，这样遗体可以被长时间保存下去。到了未来医学发达的那一天，再对冷冻的遗体进行解冻，然后治愈曾经没救的疾病，使得冷冻人能够复生。

具体而言，在冷冻之前，先要把遗体中的血液抽出来。因为血液中含有大量的水，一旦进行低温冷冻，水结冰之后，体积会膨胀，所产生的冰晶会损伤身体。因此，需要把血液换成防冻剂，贝德福德当年使用的是二甲基亚砜。此后，他的遗体被转入液氮中保存。

然而，当年的冷冻技术较为落后，注入贝德福德体内的二甲基亚砜无法让身体长期保持完好，他的大脑很可能已经出现了不可逆的损害，未来想要复苏极为困难。直到上个世纪80年代，玻璃化技术才被引入，它让冷冻者的身体不会遭到冰晶的破坏。

贝德福德已经冷冻了52年，他还是处于低温冷冻的状态。根据科学家的评估，贝德福德的冷冻状态良好。此前，有传闻称，贝德福德将在冷冻50年后被复苏，但这是假的。人体冷冻技术现在只是处于试验阶段，目前人们只进行了冷冻的那一步，还从来没有进行过复苏操作，没人知道被冷冻的人能否真的复活过来。

从已知的实验来看，人体冷冻技术有望最终成为现实。目前，科学家已经对老鼠、猪和猴子等动物做了相关实验，它们经过几个小时的冷冻之后，最终成功复苏。只是距离真正成功那一天，可能还要数十年甚至数百年。

如果人体冷冻技术成为现实，这将具有重大的现实意义。这不仅是医学上的突破，而且还会给人类的宇宙探索带来变革。宇宙中的各个恒星系统之间相距非常遥远，人类有限的生命耗不起漫长的星际旅行。如果有了人体冷冻技术，太空旅行者将不需要担心时间的问题，星际穿越不再是空谈。