细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于一196~C液氮中低温保存,可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来,这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞,可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种,起到了细胞保种的作用。除此之外,还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。 细胞冻存时向培养基中加入保护剂--终浓度5%.15%的甘油或二甲基亚砜(DMSO),可使溶液冰点降低,加之在缓慢冻结条件下,细胞内水分透出,减少了冰晶形成,从而避免细胞损伤。 采用"慢冻快融"的方法能较好地保证细胞存活。标准冷冻速度开始为-1 到 -2℃/min,当温度低于-25℃时可加速,到-80℃之后可直接投入液氮内(-196℃)。复苏细胞时则直接将装有细胞的冻存管投入40℃热水中迅速解冻。
材料:冻存管,离心管,细胞培养用材料,500 mL烧杯,胶布,搪瓷杯,75%酒精棉。
药品:培养基(RPMI1640或DMEM),小牛血清,0.25%胰蛋白酶溶液,二甲基亚砜(DMSO)或甘油,0.5%台盼蓝染液,液氮。
仪器:4℃冰箱,-70℃冰箱,液氮容器,微量加样器,水浴锅,离心机。
(一)细胞冻存
1.取待冻存的细胞用胰酶消化(见相关实验细胞传代培养部分),用培养基将细胞冲洗下来。800 r/min离心5 min,弃上清收集细胞。如果是悬浮生长的细胞,则可直接离心收集细胞。
2.加入适量冻存液(10%甘油+90%培养基,或者10%DMSO+90%培养基)制成细胞悬液。细胞浓度宜大,3×106个/mL左右,并可适量增加牛血清浓度至20%。
3.细胞悬液装入冻存管中。用胶布封裹,做好标记(写上细胞种类、时间及冻存条件等)。
4.冻存管在4℃下存放30 min,转放-20℃ 1.5~2 h,再转人-70℃ 4-12 h后即可转移到液氮内(-196℃),注意进行登记。
(二)细胞复苏
1.取一搪瓷杯盛上适量自来水加热至40℃左右。
2.从液氮中取出冻存管立即投人40℃水中迅速解冻。
3.取出冻存管,用75%酒精清洁管口,打开。
4.离心去上清收集细胞,用无血清培养基洗1次,加人3 mL新鲜培养基,于小培养瓶中培养。
5.每日观察细胞生长情况,如果死细胞较多,复苏次日应换液。待细胞长满后可进行传代培养。
一般家用冰箱冷冻箱室的温度在零下18℃左右,在这种温度下,一般细菌都会被抑制或杀死,所以这里面存放食品具有更长的保存期。有的冰箱,冷冻室可以达到零下24℃。
当然也有一些低温冰箱,医用冰箱,冷冻温度可以达到零下几十度,中科美菱低温冰箱可以达到零下164℃。
负80度超低温冰箱样本存放试剂、样本、药品。根据查询相关信息显示超低温冰箱是学校及科研单位实验室及医院重要的样本保存重要保障。
没问题,
缓冲液
一般都是一些无机盐成分,不那么容易降解的,你就是反正该室温下一个星期也没问题,但是酶最好不要忘了放在低温或常温,虽然在4度一天不至于失活,但
酶活力
会下降很多的
冰箱冷藏室温度变为负7度,可以通过调温按钮将冷藏室温度调高。
冰冻切片是不需要固定的,冰冻切片新鲜取材后,应立刻放入冰冻切片机内切片。如不能立即切片,要放入天驰液氮罐的中用液氮速冻,然后放在-70度低温冰箱内长期保存抗原性不会丢失。
关键词:负70度低温冰箱