外泌体透射电镜观察为什么要负染（外泌体透射电镜观察为什么要负染色体检查）

本文目录一览：

• 1、外泌体还可以这样研究吗
• 2、外泌体的电镜观察
• 3、用透射电镜TEM观察脂质体形态不规则，可能的原因是什么

外泌体还可以这样研究吗

外泌体的提取主要包括以下几种方式。

一是超速离心法，这是目前外泌体提取最常用的方法 。此种方法得到的外泌体量多，但是纯度不足，电镜鉴定时发现外泌体聚集成块， 由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准，也有一些研究认为此种 方法得到的是微泡不是外泌体 。

二是过滤离心， 这种操作简单、省时，不影响外泌体的生物活性 ，但同样存在纯度不足的问题。

三是密度梯度离心法， 用此种方法分离到 的外泌体纯度 高，但是前期准备工作繁杂，耗时，量少。

四是免疫磁珠法，这种方法可以保证外泌体形态 的完整，特异性高、操作简单、不需要昂贵的仪器设备，但是非中性pH 和非 生理性盐浓度会影响外泌体生物活性， 不便进行下一步的实验 。

五是PS亲和法，该方法将PS（磷脂酰丝氨酸）与磁珠结合，利用亲和原理捕获外泌体囊泡外的PS。该方法与免疫磁珠法相似，获得的外泌体形态完整，纯度最高。由于不使用变性剂，不影响外泌体的生物活性，外泌体可用于细胞共培养和体内注射。2016.9 nature杂志发表了该方法最新数据，表明PS法可提取相当高纯度的外泌体。

六是色谱法，这种方法分离到的外泌体在 电镜下大小均 一， 但是需要特殊的设备 ， 应用不广泛 。

外泌体的电镜观察

直接观察外泌体

全标本包埋外泌体

100,000 × g exosome沉淀 或 富集的冰冻外泌体

2% or 4% (w/v) PFA

PBS

1% 戊二醛

草酸双氧铀, pH 7

甲基纤维素-UA, pH 4: 9份2% 甲基纤维素 +1份4%乙酸双氧铀，用前混合

Formvar-carbon载样铜网

封口膜

5号镊子

玻璃培养皿

不锈钢环，比铜网略大

1号滤纸

铜网储存盒

透射电镜

Figure 1. TEM下exosome形态。箭头示exosome，三角形示脂质颗粒

Ref:

1: Current Protocols in Cell Biology

用透射电镜TEM观察脂质体形态不规则，可能的原因是什么

你可能用的负染法吧？干燥后，脂质体脱水肯定会变形的。可以用冷冻透射电镜，无需脱水，不变形。