成纤维细胞提取培养（成纤维细胞提取培养基的作用）

本文目录一览：

• 1、请问心肌成纤维细胞怎样培养？
• 2、鸡胚成纤维细胞如何培养我最近在培养鸡胚成纤维细胞
• 3、鸡胚成纤维细胞培养实验的步骤
• 4、求助怎样培养成纤细胞

请问心肌成纤维细胞怎样培养？

博凌科为生物科技-为你解答：用Langendorff灌流消化（胶原酶II）只能取得心肌细胞。建议直接将心脏剪碎，成纤维细胞我们这里一般采用0.05％胰酶消化。无菌条件 取出心脏D-hank's液（PBS也可）漂洗，剪碎心脏加入5倍体积消化液，37C水浴3－5min，反复吹打，静置，待自然沉降后弃去上清液。剩余沉 淀再加入约5倍体积0.08%胰蛋白酶及0.1%胶原酶II混合液，反复吹打，大约10分钟（消化时间往往靠经验的判断），离心取沉淀重悬于含 20％BSA的DMEM（有条件可以用Cascade的培养液）。60－90min后更换培养液（差速贴壁，成纤维细胞比心肌细胞贴壁快）。1、胰酶的作用比较强烈，联合使用胶原酶将胶原纤维充分消化后利于离心时细胞沉淀，提高细胞存活率。另外，消化时间不宜太长，主要凭观察和经验来判 断。离心采用1000rpm 5min。2、酶的配置可以用d-Hank's液或生理盐水都行。血清的作用主要是终止消化，用一般加了血清的DMEM就行，我们这里是20％胎牛血清。3、贴壁时间：我师兄曾经告诉我2hr，现在我觉得90min已经很好了。4、细胞可以先用台盼蓝测定存活率。5、鉴定：在倒置显微镜下观察，细胞呈梭形、多角形，细胞质透明，细胞核大，呈椭圆形，常含有2－3 个核。IHC可以用I抗体（动物抗人B3、抗波形蛋白、抗血管平滑肌肌动蛋白）其余基本按IHC的步骤来。

鸡胚成纤维细胞如何培养我最近在培养鸡胚成纤维细胞

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成纤维细胞的分离培养一开始并不涉及成骨作用，而主要是用于研究细胞的老化、各种外来因子对细胞的损伤、细胞在体外条件下的恶性转化、以及某些先天性代谢异常、酶缺陷等。由于皮肤成纤维细胞易于获取，又易于在体外生长，皮肤成纤维细胞培养已在基础医学和临床医学研究中得到较广泛的运用，其分离培养技术已相对成熟，对其体外生长规律也有了较全面的认识。

原代培养

成纤维细胞的原代培养可用酶消化法或组织块法，其中组织块法又因其操作简便、条件易于控制而应用更为普遍。通常，以酶消化法获得的成纤维细胞悬液在接种后5~10min即可见细胞以伪足初期附着，与底物形成一些接触点;然后细胞逐渐呈放射状伸展，胞体的中心部分亦随之变扁平;最快者大约在接种后30min，细胞贴附底物即较为完全，呈现成纤维细胞的形态。采用组织块法则大约在接种后2~3天到1周左右，在接种的皮肤组织块周围长出细胞。待细胞融合成片，铺满培养容器底壁大部分时即可进行传代。一般都采用胰蛋白酶(trypsin)，将成纤维细胞从底壁消化下来后分瓶作传代培养。成纤维细胞在体外培养条件下能保持良好的分裂增殖能力。细胞分裂时变为球形;分裂后又平铺在附着物的表面成为有突起的扁平细胞。体外培养的成纤维细胞，其生命期限与物种等因素有关。

例如:人胚成纤维细胞约可培养50代;恒河猴皮肤成纤维细胞能传代超过40代;鸡胚成纤维细胞则只有少数能培养30代;而小鼠成纤维细胞多数只能生长8代左右。另外，从老年个体取得的成纤维细胞的寿命要比取自年轻者短。由于在细胞传代和进行体外培养时，细胞的生物学特性会逐渐发生一些不同于体内的改变，故通常只将前10代视这正常细胞，可在此时将生长旺盛的成纤维细胞冻存起来，以备将来复苏使用，这在将培养的细胞由动物实验向人体实验过渡的过程中必须给予足够的重视。

鸡胚成纤维细胞培养实验的步骤

这个本人正好有收藏，希望有所帮助

鸡胚绒毛尿囊膜血管形成(CAM)试验方法 1)．鸡胚准备和接种组织：选择北京白鸡种蛋，洗净，用l：1000苯扎溴铵(新洁尔灭)液浸泡3分钟，置37．8土0．5℃培养箱中孵育。鸡胚发育第7天，蛋壳消毒后，标记制作2cmX3cm左右观察窗。接种组织视研究目的而定，一定要在接种当日取材，充分清洗除去血污和粘液，再剪成1～2mm组织小块。

(2)组织接种：在制备鸡胚观察窗的次日，即鸡胚发育第8天进行组织接种。每个鸡胚可接种5—7个组织小块于接种部位CAM表面，再用透明胶纸封好，继续孵育。

(3)接种组织的收获与观察：组织接种后每12小时观察一次，到组织接种第11天(鸡胚发育第18天)收获接种组织，取出鸡胚，置接种组织连同周围的CAM于解剖显微镜下观察，并用10％甲醛固定保存，部分组织可作石蜡切片，用作血管生成研究的免疫组化染色等。

(4)CAM的血管生成表现：组织接种24小时后，CAM血管开始向接种组织生长，随培养时间的延长，血管数目及直径均明显增加；第2天，新细小血管直接趋向组织；第3天，新生血管形成以接种组织为中心，10～20条放射状血管网；尔后，CAM血管继续明显增加。非接种部位与接种部位比较，CAM血管数目少，大血管与小血管呈脉样均匀分布；而接种部位的CAM血管在接种组织周围弥散样增加，以组织为中心向周围呈放射状分布，在首先与组织发生联系的区域CAM血管更多。第4天，可见新生细小CAM血管生长形成中、粗血管，并在中、粗血管继续分支出细小血管，形成新的血管网。CAM血管管腔结构清晰，可区别动、静脉。

(5)CAM血管生成实验模型的用途：CAM血管生成模型用于血管生成的研究，可取得两方面结果：①检测评价接种物刺激CAM血管增生的血管生成作用，用于分析研究血管生成促进因子、抑制因子的活性和作用的检测，如肿瘤血管生成的研究等；②对接种物，如肿瘤组织、自身的血管生成进行研究，用于分析不同组织的血管生成活性和作用，如肿瘤组织有引发新生血管生成的作用，但肺癌与其他癌组织的血管生成活性和作用可能不同。

尽管血管生成的体内动物模型研究更为接近人体的生理状态，使研究结果更为可靠，但仍有一些不足之处，如操作繁琐，耗时过长；另外，在该类模型中，血管生成物必须植入眼角膜囊、颊囊、或绒毛尿膜囊使之诱导血管生成，难免产生人为因素诱导的血管生成；血管生成促进因子、抑制因子等需要从多聚载体中释放出来；操作方法和测定其结果的技术较为复杂

鸡胚卵用o．1％新洁尔灭消毒，在37．6℃(上下浮动 o．2℃），60％湿度的隔水式恒温孵箱内孵育c每日翻动2次，孵育第7天时(满24h为1天)，在绒毛尿囊膜体表投影距胚头1cm处上划定开窗位置。无菌条件下，磨切暴露绒毛尿囊膜，制出假气室。透明胶带封闭窗口。鸡胚开窗后24h，甲基纤维素盘放人假气室(避开大血管)，对照组盘中加入 20微升灭菌PBS，实验组盘中各加入待测物20微升，透明胶带封闭假气室，继续孵育。每日加样一次，第十二天取材。假气室注入丙酮甲醇混合液固定20分钟后，取假气室一侧的蛋壳后固定20分钟，剥离CAM膜．铺在滤纸上，阴干保存。

求助怎样培养成纤细胞

最快的办法，用齐氏生物的FibrOutTM成纤维抑制剂，效果还是不错的！

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