免疫组化芯片（免疫组化芯片检测服务）

本文目录一览：

• 1、免疫组化Ki67（ 10是什么意思！急
• 2、免疫组化“Ki67”是什么意思？
• 3、免疫组化原理
• 4、免疫组化和原位杂交的区别
• 5、组织芯片技术在免疫组化及原位杂交阳性对照中如何应用？拜托各位了 3Q

免疫组化Ki67（ 10是什么意思！急

Ki67是一种增殖细胞相关的核抗原,其功能与有丝分裂密切相关,在细胞增殖中是不可缺少 ,但其确切机制尚不清楚，Ki67作为标记细胞增殖状态的抗原。阳性说明癌细胞增殖活跃。Ki67(10% )说明癌细胞增殖不太活跃。

扩展资料：

PCNA是一种分子量为36KD的蛋白质，在细胞核内合成，并存在于细胞核内，为DNA聚合酶δ的辅助蛋白。该酶三维结构呈夹子形，可以夹在DNA模板链上滑动，并连接着聚合酶δ，确保聚合酶工作过程中不会从模板链脱离。该蛋白对聚合酶的持续合成能力起重要作用。

在细胞核内存在可溶性与不溶性两种PCNA，可溶性PCNA在细胞周期各期中均有表达，其量在DNA合成过程中不发生明显变化，易被去污剂提取、甲醇破坏。

不溶性PCNA较稳定，不易被去污剂洗脱、甲醇破坏，这种PCNA在G0～G1期细胞中无明显表达，G1晚期，其表达大幅度增加，S期达到高峰，G2～M期明显下降，其量的变化与DNA合成一致，检测其在细胞中的表达，可作为评价细胞增殖状态的一个指标。

肿瘤细胞具有旺盛的增殖活性，而PCNA可作为评价细胞增殖状态的指标。因此，国内外在许多肿瘤中进行了PCNA的研究。

涉及PCNA与肿瘤发生发展、分级、分期、放疗敏感性、预后、复发和转移、死亡原因、肿瘤标志物等各个方面的相关性，得出了许多结论。

但在某些方面因作者和所研究肿瘤的不同，还存在一些争议，即使尚没有争议的结论，也是从一种或几种肿瘤中得出的，这些结论是否适用于所有肿瘤，仍有待进一步研究。

参考资料：百度百科---增殖细胞核抗原

免疫组化“Ki67”是什么意思？

Ki67，在很多肿瘤病理中它是判断肿瘤细胞增殖情况的一个指标，越高表示正在肿瘤细胞增殖多，恶性程度越高。

1、【免疫组化】

免疫组化，免疫组织化学技术（immunohistochemistry），是一项利用抗原抗体反应，通过使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内抗原，对蛋白定位，定性的实验技术。

免疫组化主要用的是组织标本和细胞标本两大类，组织标本包括石蜡切片（病理切片和组织芯片）和冰冻切片。石蜡切片，对组织形态保存好，保存时间也长，虽然对组织抗原暴露有影响，但可以抗原修复，所以石蜡切片仍然是首选的标本制作方法。

2、【免疫组化的步骤】

（1）4%多聚甲醛常规灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液（4℃）中过夜。蜡块制作。切片，贴片。0.01MKPBS清洗5min×3后；

（2）加入配好的0.3%的过氧化氢甲醇溶液（甲醇80ml＋0.01MKPBS 100ml＋30%过氧化氢）30min，以消除内源性过氧化物酶的影响，0.01MPBS清洗5min×3；

（3）加入配好的0.3% Triton X100（30% Triton X100＋0.01MKPBS 100ml）30min，以增加细胞的通透性，0.01MKPBS清洗5min×3；

（4）加入用血清稀释液（牛血清白蛋白1.00g＋0.01MPBS 100ml＋叠氮纳0.08g）稀释的一抗，4℃存放24-48h；吸去抗体，0.01MKPBS洗5min×3；

（5）加入0.01MKPBS稀释的的二抗，室温孵育2h。0.01MKPBS洗5min×3；

（6）加入ABC复合物之类的抗体，室温孵育2h，0.01MKPBS洗5min×3；蒸馏水迅速冲三次； 

（7）加入显色液，进行免疫组织化学显色，时间一般不超过30min，可不时在显微镜下进行观察，待细胞着色而背底颜色较淡时马上吸去显色液，用蒸馏水迅速冲三次后加入0.01MKPBS终止反应；

（8）梯度酒精脱水之后，封片，拍照。 

免疫组化原理

免疫组化技术是一种综合定性、定位和定量；形态、机能和代谢密切结合为一体的研究和检测技术。在原位检测出病原的同时，还能观察到组织病变与该病原的关系，确认受染细胞类型，从而有助于了解疾病的发病机理和病理过程。

免疫酶组化技术是通过共价键将酶连接在抗体上，制成酶标抗体，再借酶对底物的特异催化作用，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，于普通显微镜或电镜下进行细胞表面及细胞内各种抗原成分的定位，根据酶标记的部位可将其分为直接法（一步法）、间接法（二步法）、桥联法（多步法）等，用于标记的抗体可以是用免疫动物制备的多克隆抗体或特异性单克隆抗体，最好是特异性强的高效价的单克隆抗体。直接法是将酶直接标记在第一抗体上，间接法是将酶标记在第二抗体上，检测组织细胞内的特定抗原物质。目前通常选用免疫酶组化间接染色法。

免疫组化和原位杂交的区别

1、定义不同

免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。

原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交，从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。

2、作用不同

免疫组化：标本，实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类，前者包括石蜡切片（病理切片和组织芯片）和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。

抗体，免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体，单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。

常用染色方法，根据标记物的不同分为免疫荧光法，免疫酶标法，亲和组织化学法，后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高，有利于微量抗原（抗体）在细胞或亚细胞水平的定位，其中生物素—抗生物素染色法最常用。

原位杂交：细胞特异性mRNA转录的定位，可用于基因图谱，基因表达和基因组进化的研究；

感染组织中病毒DNA/RNA的检测和定位，如EB病毒mRNA、人类乳头状瘤病毒和巨细胞病毒DNA的检测；

癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测；

基因在染色体上的定位；

检测染色体的变化，如染色体数量异常和染色体易位等；

分裂间期细胞遗传学的研究，如遗传病的产前诊断和某些遗传病基因携带者的确定，某些肿瘤的诊断和生物学剂量测定等。

3、意义不同

免疫组化：近年来，随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的出现，使许多疑难肿瘤得到了明确诊断。在常规肿瘤病理诊断中，5%-10%的病例单靠H.E.染色难以作出明确的形态学诊断。

尤其是免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到了普遍的认可，其在低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断时，准确率可达50%-75%。

原位杂交：原位杂交：在研究DNA分子复制原理的基础上发展起来的一种技术。其基本原理是两条核苷酸单链片段，在适宜的条件下，能过氢键结合，形成DNA-DNA、DNA-RNA或RNA-RNA双键分子的特点，

应用带有标记的（有放射性同位素，如3H、35S、32P、荧光素生物素、地高辛等非放射性物质）DNA或RNA片段作为核酸探针，与组织切片或细胞内待测核酸（RNA或DNA）片段进行杂交，然后可用放射自显影等方法予以显示，在光镜或电镜下观察目的mRNA或DNA的存在并定位；

用原位杂交技术，可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。此方法有很高的敏感性和特异性，可进一步从分子水平来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。

参考资料：百度百科-原位杂交

参考资料：百度百科-免疫组化

组织芯片技术在免疫组化及原位杂交阳性对照中如何应用？拜托各位了 3Q

组织芯片技术其优点是可对大量的组织标本进行了各种检查，对肿瘤病理学、免疫学等研究具有可行性和可比性，同时有节省时间，节约成本的优点，对病理学研究 具有较多的优越性，如对各种组织起源的不同类型肿瘤进行免疫组织化学染色等研究，对各种抗体的敏感性及特异性的检测，因其实验条件的一致性，所以各种实验 结果的准确性、科学性、可比性[6-8]均有了保证。 免疫组织化学及原位杂交中的设立阳性对照是对免疫组化染色结果的准确性和可靠性保证，自身阳 性对照为最佳和首选，传统外部的阳性对照组织切片为单独一张切片，组织面积大且不宜与待检测组织在同一张切片上染色，多消耗试剂，有时也达不到实验条件的 一致性，而应用组织芯片技术在免疫组化及原位杂交中设立阳性对照有以下优点。 1)对一些抗体如p53、c-erbB-2、CD117、MART-A等，可针对性的选择阳性对照组织，摒弃阴性对照，同时节约了阳性对照组织，又可以节省试剂的成本。 2) 符合病理诊断的质控要求，提高病理报告的准确性和科学性，避免了因免疫组化结果不理想而导致出现病理诊断的疑难或病理诊断的误区。即使疑难病例病理切片会 诊，免疫组化或原位杂交切片因每一张切片上附有阳性染色对照组织，不会再次重复进行同样种类的免疫组化或原位杂交检测，节约医疗开支。 …………… …………………… 更多具体材料请参考： 芯片扫描仪及配件：

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