切取大小约 5mm × 5mm ,长 3mm ~4mm 的茎组织块。
用 3 % 戊二醛固定 2 h ,漂洗后 ,经 35 % 、 50 % 、 60 % 、
70 % 、 95 % 、 100 % 、 100 %各 l h 的乙醇系列脱水 , 过
渡到纯二甲苯 , 在室温浸腊 ( 溶点 53 ℃ ) 24 h , 移入
40 ℃温箱逐步升温至 56 ℃,加石腊至饱和 ,3 h 后将
样品移入溶化的石腊中 ( 换三次 , 每次 2 h) 包埋成
块 ,迅速冷却后固定在切片机的样品座上 ,用切片机
对需观察的面进行修整 , 把修整好的样品转入二甲
苯中脱腊 ( 换三次 ,每次 1 h) ,从二甲苯过渡至无水
乙醇 ,再过渡至醋酸异戊酯 , 经二氧化碳临界点干
燥、镀金、电镜观察。
生物组织扫描电镜实验的前期处理有哪些步骤
1.实验方法
实验方法是整个实验设计的精髓,是做好实验设计的关键所在.现将与中学实验有关的一些最常见的经典的实验方法汇总如下:
(1)化学物质的检测方法:
①淀粉——碘液
②还原糖——斐林试剂、班氏试剂
③CO2——Ca(OH)2溶液或酸碱指示剂
④乳酸——pH。
采用低速离心(细胞离下来的转数即可,如1000rpm-1500rpm),然后将沉淀转入2.5-4%的戊二醛中固定(2h以上,可于4度放至几天),然后再次离心,用丙酮逐级脱水(30%,50%,70%,80%,90%,100%,100%)再用叔丁醇置换,然后真空冷冻干燥,接下来将细胞粉(抽干应呈现为粉末状)涂抹在导电胶上,再将导电胶粘放到样品台上进行喷金处理,处理好的样品就可以放入扫描电镜样品室进行观察拍照了。
扫描电镜用于固体材料表界面微观结构检测,其最大应用特点是可对粗糙原始表面进行微纳米尺度结构直接观察。
砂纸打磨会破坏表面微观结构,只是制备平整断面的一道工序,为了后续镜面抛光,观察晶体晶相做准备。
扫描电镜样品制备非常简单,基本要求无油、干燥、导电,能放进样品仓即可。
简述扫描电子显微镜的构造和工作原理,对试样有要求和制备试样:
扫描电镜基本结构:电子光学系统+真空系统+样品装载和移动系统+信号探测器系统+ 电气控制系统+ 计算机系统。电子束作为点光源帧扫描样品,并接收逐点生成的信号作为视频信号。视频信号的显示器尺寸固定,当调节电子束扫描区域大小的时候,即实现视频图像放大倍数的调节。
能谱仪基本结构:探测器 + 电器控制系统 + 计算机系统 。入射电子束电离样品,伴随电子能级跃迁发射特征x射线,特征能量X射线轰击探测器半导体探测晶体,将能量转化为电信号,通过测量电信号大小可计算出特征X射线能量,从而知道样品中存在哪些元素。
概述
某些含水量低且不易变形的生物材料,可以不经固定和干燥而在较低加速电压下直接观察,如动物毛发、昆虫、植物种子、花粉等,但图象质量差,而且观察和拍摄照片时须尽可能迅速。对大多数的生物材料,则应首先采用化学或物理方法固定、脱水和干燥,然后喷镀碳与金属以提高材料的导电性和二次电子产额。
我记得电镜标本用戊二醛和锇酸固定,但是我没有自己做过,步骤和药品浓度就不清楚了
取样,戊二醛等固定液固定,酒精梯度脱水,冷冻干燥or二氧化碳临界点干燥,喷金或蒸碳。
以上四个步骤,根据所使用的SEM成像的真空模式,可以有所省略。
如果用ESEM,取样后可直接放入样品室,在一定“环境真空”下进行观察;如果采用LV模式,直到干燥,可以免喷金;高真空模式,必须做到喷金等样品导电处理。
具体可到公益网站:中山大学生物电子显微学实验室网站查询
扫描电镜样品制备: 基础课程,生物样品因含水,其样品制备有其特殊性。
有时候公益网站有点那个,不好点开,请看转载链接
关键词:外泌体扫描电镜样品制备步骤