提外泌体步骤（外泌体导入）

本文目录一览：

• 1、外泌体保存液是什么？
• 2、刘德华代言的外泌体
• 3、关于外泌体?
• 4、外泌体该如何提取
• 5、外泌体多组学01-外泌体初识
• 6、提取外泌体时如何去掉核糖体污染

外泌体保存液是什么？

外泌体(exosomes)是一种由活细胞分泌，直径在30-150nm，具有双层脂质膜结构的小囊泡，它在机体内广泛存在，如外周血、腹水、尿液、唾液、脑脊液等各种体液中，内含丰富的蛋白质、脂质以及核酸等生物活性成分。外泌体参与物质运输，还携带和传递重要的生物信息，在介导免疫抗原递呈、树突状细胞的活化、神经退行性疾病发生、肿瘤细胞抗原的转移及肿瘤诊断治疗中发挥重要作用，吸引了很多科研人员的关注，在深入研究外泌体前，外泌体的提取纯化、鉴定及合理保存是首要的步骤，也是一切后续实验的基础，只有高活性、高稳定性的外泌体才能确保后续实验的质量和可信度。

目前外泌体只能在2～8℃稳定保存3天，-20℃稳定保存1个月。长期保存需要-80℃低温，并且不能冻融，存储条件要求高，这些缺点影响了外泌体的深入研究。

由此，有效保持外泌体的完整性、生物活性和内含物稳定性的外泌体保存液仍有待开发。

刘德华代言的外泌体

刘德华注射羊胎素保持青春?5年前曾有媒体曝刘德华每年去瑞士注射羊胎盘素，1针58万人民币，能回春5岁，持续打可年轻10几岁。但近日杭州的某整形诊所，竟声称刘德华就是在该诊所打羊胎盘。而刘德华所属公司则回应着纯属无稽之谈。

刘德华被代言羊胎盘素

据悉，该诊所的网页拿刘德华打广告，称50岁的华仔每年都会进行一次羊胚胎活细胞治疗，不仅能让外表回到从前，精神也长久停留在在二三十岁的状态。自称徐医师的小姐说，施打羊胎盘素要先付订金5万人民币，还要预留1周时间到他们瑞士的合作医院施打，费用包交通食宿费， 约28万8000元人民币、较贵约48万8000元人民币。

徐医师更坦言华仔、王菲等巨星，确实透过他们诊所打羊胎盘素，声称：“但明星和我们签保密协议，不能透露公开。部分愿意打广告的，我们会放在网络上。”

对此，刘德华所属的中国台湾映艺表示：“无稽之谈，不回应无中生有的事!”据悉，刘德华的公司已将找律师处理被盗用宣传羊胎盘素一事。

羊胎素的神奇功效

羊胎素对于脸部的皱纹有很好的舒展作用，由于皮肤细胞的老化，弹性下降，造成抬头纹、眼角细纹和颈部的皱纹攀升，注射羊胎素后可得到良好的改善。

羊胎盘素治疗步骤

步必须接受严格的全身检查，因为具有某些病症的人将会对羊胎素产生过敏反应，而且根据接受注射者的不同情况，要进行不同的针剂配置和辅助治疗。由于羊胚胎素活性细胞有几十种类型，根据尤其是地区的人群健康状况特点，目前采用不同细胞进行组合的治疗方案，以使治疗效果达到化。

第二步是在专业医师的密切关注下进行注射，通过臀部直接肌肉注射，活性细胞经血液吸收，并较终作用于人体的免疫系统来产生作用。

第三步是观察期，接受注射者的饮食起居都要接受医师的咨询和观察，而这些都必须在有多年临床经验的诊所进行。

在这整个过程中，有专门的营养师为接受注射者进行饮食配置，以保证受疗者各方面的状态，有利于羊胎素的人体吸收。

根据多临床经验，在次注射的两年后需要再进行第二次的注射治疗，此后，根据个人条件，每2～5年注射一次。注射一般2～4周后，体内老化细胞开始恢复年轻，各器官机能回升，容貌也会明显的年轻化。

关于外泌体?

1、新鲜细胞的再生。外泌体可以使用到受损部位，激活干细胞，促进皮肤细胞新生

2、修复受损细胞。修复受损皮肤细胞，并且储存在皮肤组织中，通过调节皮肤微环境，起到生理修复的效果，而且效果更安全有效

3、防止氧化。外泌体可以激活抗氧化系统，促进抗氧化物质的增加，达到全面抗氧化、保护皮肤的目的。

4、免疫调节。外泌体能抗炎、调节皮肤微环境，还能能调节免疫、促进细胞迁移等，起到改善细胞功能、抗炎、维持组织微环境平衡的作用。外泌体中含有丰富的人体细胞生长因子以及蛋白质，可以激活细胞，从而达到皮肤抗衰老的目的。

外泌体该如何提取

BIOG产品特点

◎操作简便快速，可在半小时内获得理想的RNA；

◎提取RNA纯度高，无抑制剂，A260/A280为1.8-2.0；

◎产量更高，较国内同类产品高出20%；

◎可用于小量（200μL）血清、血浆、胸腹水、脑脊液、滑膜液、水样等液体样本中游离样本中RNA的提取；

◎不含苯酚和氯仿等有毒溶剂，安全无毒。

BIOG操作步骤

1. 请自行准备：无水乙醇、无RNA酶1.5mL离心管。

2. 取出洗涤液，按以下操作：

a)洗涤液A：21mL加入9mL无水乙醇，混匀；42mL加入18mL无水乙醇，混匀。

b) 洗涤液B：9mL加入21mL无水乙醇，混匀；18mL加入42mL无水乙醇，混匀。

c) 配制好的洗涤液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。

[if !supportLists]3. [endif]取无RNA酶的1.5mL离心管，加入200μL样本，4μLRNA Carrier混合均匀，再加入300μL裂解液及20μL消化液，漩涡震荡10秒，充分混匀，56℃水浴10分钟至完全裂解。

4. [endif]加入1mL无水乙醇，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响RNA的提取与后续实验。

5. [endif]将吸附柱放入收集管内，将760μL上述溶液转入吸附柱内，静置2 分钟，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。

6. [endif]将吸附柱放回收集管内，将剩余760μL溶液转移至吸附柱内，重复步骤5。

7. [endif]将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液A至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。

8. [endif]将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液B至吸附柱内，静置2分钟，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。

9. [endif]将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 4℃离心2 分钟，离去残留的洗涤液。

10. [endif]取出吸附柱，放入新的无RNA酶的1.5 mL离心管内，加入30-50μL洗脱液，静置3 分钟，12,000 rpm 4℃离心2 分钟，收集RNA溶液。

11. [endif]-70℃保存，或直接用于下一步实验。

注意事项

1. 为防RNA酶污染，实验过程中最好戴一次性干净手套、口罩，使用处理过的无RNA酶的容器和无RNA酶的超纯水 。

2. 裂解液、洗涤液含有刺激性化学物质，请做好防护措施，避免直接接触皮肤，防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时请就医。

3. 裂解液如有白色絮状物析出属正常现象，置于37℃水浴中溶解即可。

外泌体多组学01-外泌体初识

这是2020年发表在Science上的一篇综述

其中的一幅图比较频繁的出现在各大会议的PPT中：

外泌体的产生过程涉及质膜内陷和包含腔内囊泡( intraluminal vesicles ，ILVs)的细胞内多囊泡体(intracellular multivesicular bodies，MVBs)的形成。通过MVB与质膜融合和胞吐作用，ILVs最终分泌为外泌体，直径为~40-160nm( 类比大小：一个细胞体积约等于10^6个外泌体)：

参与外泌体的起源和生物发生过程的蛋白有：

此外，外泌体生物发生途径与其他与细胞内囊泡运输相关的其他分子途径的交叉混淆了功能研究的解释：

外泌体产生的速率 ：计算外泌体产生的速率受到与任何给定细胞类型的从头产生和外部外泌体摄取相关的动态过程的挑战

外泌体具有以下异质性特征：所有这些特征的结合将有可能导致外泌体的更高层次的复杂性和异质性

围绕外泌体功能的问题主要集中在理解其成分的命运，以及它们在细胞培养系统中在受体细胞上诱导的表型和分子改变

外泌体摄取和分泌途径可能会交叉，随着时间的推移，任何由内源性和循环外泌体组成的细胞都会导致外泌体混合群体的净产生。

与外泌体摄取相关的独特机制和途径，以及外泌体对某些细胞类型的公认特异性，增加了外泌体在细胞间通信中的功能的复杂性，例子：

为了追踪生理条件下外泌体的细胞间交换，我们探索了在小鼠体内涉及各种遗传策略的体内实验：

化疗等治疗干预也可能影响肿瘤的外泌体摄取和随后的生物学反应：

蛋白质被分类为外泌体，可以选择性地诱导受体细胞中的特定信号，以调节发育、免疫反应和疾病的过程。

人类的生殖、怀孕和胚胎发育需要精确、微调和动态的细胞间通信。精液、羊水、血液和母乳都含有具有公认功能的外泌体

外泌体在免疫反应中的作用已被广泛证明。最近的工程外泌体实验表明，外泌体在诱导适应性和先天免疫反应方面具有一定的作用，支持了它们在治疗开发中的效用，并在协调免疫反应应对感染因子或癌症方面发挥了潜在作用。

来自抗原提呈细胞(APCs)的外泌体携带p-MHC-II具有抗原肽的主要组织相容性复合体II(p)]和共刺激信号，并直接将肽抗原呈递给特定的T细胞以诱导其激活。

外泌体可能在代谢性疾病的出现和心血管健康中发挥作用。研究发现，它们可以转移代谢物，并通过胰腺b细胞、脂肪组织、骨骼肌和小鼠和人类肝脏之间的外泌体miRNA交换来转移代谢物，从而促进细胞间的通信。

这些发现支持了癌细胞来源的外泌体可以改变非癌细胞的代谢，包括脂肪细胞和胰岛细胞，从而在功能上促进恶病质和副肿瘤综合征的发展

外泌体生物发生和神经元细胞分泌囊泡调节之间的交集为外泌体和神经退行性疾病发病机制之间的假定联系提供了新的见解。外泌体可参与错误折叠蛋白的清除，从而发挥解毒和神经保护功能，或参与错误折叠蛋白的繁殖和聚集，有效促进蛋白质聚集物的“感染性”，促进疾病进展。

与外泌体在其他疾病中的作用相比，癌症外泌体的研究进展迅速，外泌体与癌症的几个显著特征相关。外泌体影响肿瘤形成、生长和转移、副肿瘤综合征(paraneoplastic syndromes)和治疗耐药性。外泌体在癌症进展中的作用可能是动态的，特定于癌症类型、遗传和阶段。

在大多数研究中，癌细胞来源的外泌体的基质细胞受体是癌相关成纤维细胞(CAFs)和免疫细胞，它们在肿瘤微环境中相互动态调节。

在多种癌症类型中，已经报道了来自癌细胞的外泌体在转移部位引起实质信号应答(parenchymal signaling response)，有效地重塑远处微环境以增强转移, 例如:

从基质到癌细胞的外泌体交换也可以调节癌症的进展和转移：

外泌体也参与了肿瘤微环境的血管生成和细胞外基质重塑，这是肿瘤生长和转移扩散的关键步骤

癌细胞脱落的外泌体可促进对各种化疗药物和抗体的耐药性

外泌体在向病变细胞传递功能性物质方面的特性有利于它们在基础水平和应用水平上作为治疗载体

外泌体存在于所有生物液体中，并由所有细胞分泌，使它们作为微创液体活检具有吸引力，并有可能通过纵向取样来跟踪疾病进展。

外泌体自身或作为药物有效载荷的载体正在积极探索作为治疗药物。与脂质体相比，注射的外泌体可以有效地进入其他细胞，并在外源性给予小鼠时以最小的免疫清除传递功能性货物。

此外，外泌体的治疗应用是有希望的，因为它们已被证明具有良好的耐受性。

提取外泌体时如何去掉核糖体污染

提取外泌体时如何去掉核糖体污染

（1）细菌是原核生物，不具有内质网、高尔基体等具膜结构的细胞器，因此不能完成图示的生理过程；图中物质①表示翻译的模板RNA，②是翻译的场所核糖体．（2）分析题图可知，③的作用是识别信号分子，为受体，本质是糖蛋白；受体位于细胞膜上，因此。

绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上，添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸，维生素的范围亦很广，另外常规含有无机盐和代谢添加剂（例如核苷酸）。MEM/F12 这两种培养基各取1/2，形成神经生物学最通用的培养基。Dulbecco`s改良培养基——DMEM，现应用于快速生长的细胞，同MEM含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍