为什么要冻存免疫细胞（免疫细胞冻存有用吗）

2023-01-23 03:55:52 作者：max

本文目录一览：

1、CUT&RUN实验原理和步骤
2、储存干细胞专业知识是否掌握牢固哪方面需要加强
3、朋友推荐去生命银行存储免疫细胞，真的有用吗？什么样的人需要存储呢？
4、身边好多人都把免疫细胞存储下来了，究竟有必要存储吗？真可以为健康提供保障？
5、保险公司的冻存细胞有什么用
6、感受态细胞为何放置于负八十冰箱保存？

CUT&RUN实验原理和步骤

Concanavalin A或者说是ConA beads被lectin（凝集素）包裹，这个beads可以结合细胞膜/细胞核上的glycoconjugates（糖复合物）。膜是通透的，染色质可以被特异的抗体结合，在我们的这个例子里，选择的是PTMs。下一步，加入AG蛋白-micrococcal核酸酶（也叫做pAG-MNase），这个pAG-MNase结合到抗体连接的染色质上，然后通过适量浓度的Ca2+来激活pAG-MNase，从而切割DNA。被切下来的DNA游离到上清里，通过离心我们可以把这些抗体结合的DNA分离出来。

之后提取DNA，制备文库，然后进行测序。

最后就可以进行数据分析了。

CUTRUN实验可以用来分析多种蛋白的染色质图谱，包括PTMs，转录因子，染色质remodelers和染色质writers/readers。

如果你是第一次使用这个技术，请全面考虑你的细胞类型、实验条件、对照、抗体，从而解决你的生物学问题。这个试剂盒可以兼顾多种细胞类型（我现在的实验室里用的就是这个试剂盒）。

对于未固定的细胞，是研究组蛋白PTMs和转录因子理想的实验材料。这种细胞可以有多种来源，包括贴壁、悬浮细胞，组织样品。

CUTRUN也可以用lightly-crosslinked细胞（翻译成轻微固定的细胞？），样品固定一般用于研究一些染色质瞬时作用因子和某些PTMs。

当然你也可以提取nuclei，这种方法用于研究那些量很少的PTMs和蛋白。另外，当你的实验材料是免疫细胞时，也推荐提取nuclei，因为ConA beads可以激活某些免疫细胞。还有要提一下的是所有的材料都可以低温储存。

细胞数量上，推荐每个样品50万细胞。当然你需要尝试不同的细胞数量来优化你的实验。对于这个试剂盒来说，最少你可以用5000个细胞来进行实验。

对照和标准化是整个实验的关键步骤。阳性对照推荐使用H3K4me3或者H3K27me3,；阴性对照推荐使用Rabbit IgG。你还可以使用spike-in来进行标准化。

CUTRUN有6种主要试剂。这里需要注意的是，根据你的实验材料是细胞、nuclei、或者固定的细胞，所使用的试剂是不一样的（这里试剂列表就不贴了，有需要的同学可以去试剂盒官网看具体细节）。另外，有些试剂是需要现用现配的，官网说明书里写的很详细。

beads的活化在1.5ml tube里进行，你还需要与之匹配的magnetic rack。尽量不要用8连管，那样会损失很多。活化buffer要放置在冰上。

首先震荡beads（设置6档或7档），然后快速离心一下。然后把beads放在magnetic上，待溶液澄清了，吸走上清。然后用活化buffer清洗beads 30秒（清洗两次）。最后清洗完，还是用活化buffer重悬beads。这里要注意，beads要放置在冰上。下面是第一部分的总结图：

这一部分用的wash buffer请放置室温，防止刺激到你的细胞。这一步如果用8连管，每一管的细胞应在4.4milion。你可以首先收集你的细胞，同样是用wash buffer清洗细胞两次，最后用wash buffer重悬你的细胞。之后把beads加入到细胞悬液里。轻微震荡或用移液枪吹打。室温静置10分钟。

下面是第二部分的总结：

上一步静置后，把beads放在magnetic上，移除上清。加入冷的抗体buffer，这一步要快，防止beads干燥，但是不要太剧烈，防止细胞裂解。然后加抗体，阴性对照抗体1:10添加，阳性对照抗体1:100添加。轻微震荡，放在摇床上孵育过夜（4度，16小时）。下面是第三部分的总结：

首先快速离心8连管，把管放在magnetic上。待溶液澄清，移除上清。加入冷的dinitonin buffer。清洗2遍。清洗后用dinitonin buffer重悬beads。

pAG-MNase和digitonin buffer应放置在冰上。在样品里加入pAG-Mnase，室温孵育10分钟，快速离心，放置magnetic上，移除上清。使用digitonin buffer清洗beads两遍。然后用digitonin buffer重悬beads。

把样品放在冰上，加入CaCl2，这一步很关键，因为Ca会活化pAG-MNase，轻微震荡后，摇床上4度孵育2小时。之后加入stop buffer。如果你想加入spike-in，那么加完stop buffer后可以加入spike-in DNA。

37度10分钟。之后把tube放在magnetic上，把上清液移到新的管里。之后使用DNA purification kit。

上一步纯化DNA后，推荐10ul体积洗脱。使用1ul进行Qubit检测浓度。一般来说，如果每个样品的细胞数约0.5个million的话，下面有一些浓度参考：

下面就是制备文库了。就是跑PCR。这里要注意的是，如果你要研究的是转录因子，那么你要优化你的PCR条件，因为转录因子的文库片段小于120bp。然后使用bioanalyzer来检测片段富集：

最后就是测序了。一般每个样品3-5个million就可以了。

上面已经提到了，如果你的细胞是免疫细胞，要提前提取nuclei，因为ConA beads上的lectin在结合细胞的时候，会对免疫细胞有影响。pAG-MNase会通过核孔进入到核中。需要注意的是，digitonin buffer浓度要保持0.01%，防止beads粘附到tube上。

需要注意的是，我们平时做ChIP-seq的交联方法是不适用于CUTRUN的。这里使用的是lightly crosslinking。

这里要注意的是，冻存细胞是90%培养基+10%DMSO中放置在-80度里保存的。不要用液氮快速冷冻你的样品，因为会使你的细胞裂解、染色质外漏，会导致你的背景信号非常高。在进行CUTRUN步骤之前，37度快速解冻细胞。

对于贴壁细胞，不要用胰酶消化细胞！！！因为细胞表面的glycoprotein要结合beads。所以贴壁细胞只能用“刮”的。

为什么要冻存免疫细胞（免疫细胞冻存有用吗）

储存干细胞专业知识是否掌握牢固哪方面需要加强

储存干细胞专业知识是否掌握牢固哪方面需要加强？答：细胞存储是一种健康生活新方式，是全生命周期的健康保障。近年来，随着细胞冻存技术的发展和完善，行业发展前景巨大，目前中国干细胞以新生儿围产期组织干细胞存储为主，包括脐带血造血干细胞、脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞。那么，干细胞存储有什么具体的要求吗?造血干细胞在适合的环境下能够进一步分化成熟，成为有相应功能的造血或免疫细胞。通常患者需要的造血干细胞会通过抽取骨髓进行移植，而围产组织造血干细胞比骨髓中的含量要高数倍甚至数十倍，移植后发生排斥等副反应的程度也比较小。

同时选择造血干细胞存储的家庭要注意，卫生部规定了脐带血造血干细胞能够治疗的疾病包括骨髓衰竭、重症免疫缺陷症等遗传性及先天性疾病，和白血病、骨髓瘤、淋巴瘤等后天获得性疾病。如果是遗传性及先天性疾病，使用脐带血则有很大的局限性，因为自存的脐带血干细胞也携带遗传性及先天性疾病的致病基因，于病情并无多少益处，如果能够在公共脐带血库得到匹配的血型则是一件非常幸运的事情。因此，现如今呼吁捐献造血干细胞的声音比比皆是。

相对于造血干细胞，间充质干细胞存储近年来受到越来越多人的青睐，间充质干细胞的低免疫原性、多向分化能力、免疫调节功能和旁分泌功能等特性则赋予其更广泛的适用性。目前临床研究已经证明间充质干细胞在人类一百四十多种疾病中的良好疗效。作为间充质干细胞的重要来源，胎盘间充质干细胞存储成为越来越多家庭的新选择。

02干细胞存储有什么要求?干细胞存储前需要做一些必要的体检

干细胞存储前需要做一些必要的体检，必须是身体健康、无家族遗嘱病史、常规检测正常的孕妇才可以进行干细胞存储，而患有传染疾病的人群是不适宜做干细胞存储的。因为带有传染病的干细胞，即使储存了日后也是不能够使用。以造血干细胞存储为例，需要HIV-I/II抗体、乙肝表面原体、丙肝抗体、梅毒血清反应的检测全部阴性。只有以上体检合格，才能储存干细胞。

问题来了，身体健康、且通过常规检测后的孕妈，就能完成干细胞存储吗?事实上，在胎盘中提取出来的干细胞不一样都有用，所有的干细胞样本必须通过一系列的检测，唯有检测合格的干细胞才能入库。从国内老牌干细胞存储机构博雅干细胞库获悉，干细胞存储需要有专业的工作人员做分离，检测，制备等多道工序，实验室制备标准必须达到GMP标准，以确保干细胞在长期的存储过程中不会发生变异、失活和污染。同时制备成功的干细胞需要保存在零下196度的液氮中，保证干细胞处于休眠状态。

03干细胞存储有什么要求?有没有年龄限制?存储机构又该如何选?

干细胞存储有没有年龄限制呢?为什么很多人说干细胞存储越早越好?一般来说，干细胞存储是不受年龄限制的，只要身体健康，没有基因变异，都是可以选择干细胞存储，但是就像人有生老病死，人体的免疫细胞也并不是一成不变的，随着年龄的增长，身体内的干细胞的数量不断减少，相对应的活性和繁殖力会逐渐降低，甚至发生病变。所以，年轻时存储的干细胞的活力及繁殖力呈现的是年轻状态，当年迈的人群再回输当时存储的干细胞的时候，细胞治疗效果会更好。

此外，干细胞存储关系到孩子及家人一生的健康，而且干细胞储存环境是有高要求和高标准的，所以在进行干细胞存储之前，需要选择有权威认证和专业技术的专业细胞库。博雅拥有一系列专利的细胞处理、存储技术和设备，博雅干细胞库的细胞处理技术、质量管理体系获得AABB认证，代表着细胞质量可以达到全球最严苛的临床机构的认可，在干细胞存储质量上获得了全球公认的“通行认可”，这也意味着国内干细胞存储已经走向成熟，数据显示，选择在博雅干细胞库存储胎盘的家庭数量每年都在增加。

随着干细胞临床治疗行业不断发展以及大众健康管理意识的提升，干细胞存储已经成为健康生活的新风尚，成为一种常态化的追求和消费，尤其是新生儿脐带和胎盘的间充质干细胞存储渗透率正在逐年增加，不仅为家庭健康保驾护航，也正在对医学发展带来愈加重要的影响。

朋友推荐去生命银行存储免疫细胞，真的有用吗？什么样的人需要存储呢？

我来说一下，生命银行这个词这几年比较火，因为细胞科技的发展以及冷冻技术的成熟，现在国内外都有成熟的机构存储干细胞和免疫细胞，比如国内的博雅干细胞库，这个是比较有名的，也是比较早的一批机构，在标准认证以及技术实力、服务等等都还是很受青睐的。之前生小孩的时候，隔壁床的宝妈就在博雅干细胞库存储了胎盘干细胞，后来我就跟她聊了一下，才知道现在无论是存储干细胞还是免疫细胞，都越来越普遍了。免疫细胞的话，我看到有好多新闻报道用它来治疗白血病、骨髓瘤等等的成功案例，还有一些文献报道它在肝癌、胃癌等等这种实体肿瘤以及其他领域的疾病上的临床研究，觉得还是很有潜力的。个人觉得存储免疫细胞，就相当于为健康储备一些宝贵的医疗资源吧。只要是条件允许，应该都可以存储的吧。可以电话咨询一下专业的存储机构⌄

身边好多人都把免疫细胞存储下来了，究竟有必要存储吗？真可以为健康提供保障？

当然有必要了，世界上最好的医生就是我们自己体内的免疫细胞！尽早储存免疫细胞，为未来的自己留有一份保障！随着年龄的增加，免疫系统衰退引起的免疫功能下降，容易引起各种疾病。为了有效预防疾病，预先将当下健康年轻态的免疫细胞，通过安全采集并超低温冻存起来，在有防病之需时，或者是医疗条件允许时，再回输体内，来对抗疾病、延缓衰老、增强抵抗力。你可以在官网上看一下博雅干细胞公司，他们的细胞存储库是同时通过国际 AABB 标准认证、NRL能力检测和CAP 能力检测的临床级干细胞库，这个标准还真是够高的，国内就没有几个，实力还是非常强的，详细的你可以打他们的电话了解一下。