人胚胎干细胞无血清培养基（胚胎干细胞培养条件）

本文目录一览：

• 1、动物细胞培养的常用培养基类型有哪些？各有何特点和用途
• 2、细胞培养知识点
• 3、干细胞培养这个职业怎么样?
• 4、高中，生物，胚胎干细胞的培养
• 5、hpaepic细胞用什么培养基

动物细胞培养的常用培养基类型有哪些？各有何特点和用途

动物细胞的培养基的种类和组成 分3类： ⒈天然培养基 ⒉合成培养基 ⒊无血清培养基

天然培养基：

天然培养基主要取自动物体液或从动物组织分离提取。其优点是营养成分丰富，培养效果良好，缺点是成分复杂，来源受限。天然培养基/液的种类很多，包括生物性液体（如血清）；组织浸液（如胚胎浸液）；凝固剂（如血浆）等。如：胎牛血清

合成培养基：

合成培养基（synthetic medium），又称为组合培养基，是通过顺序加入准确称量的高纯度化学试剂与蒸馏水配制而成的，其所含的成分（包括微量元素在内）以及他们的量都是确切可知的。合成培养基一般用于实验室中进行的营养、代谢、遗传、鉴定和生物测定等定量要求较高的研究。比如：1640、DMEM

无血清培养基：

无血清培养基和试剂被广泛的应用于培养哺乳动物和无脊椎动物细胞以制备单克隆抗体，病毒抗原和重组蛋白等。大多数的无血清培养基含有向细胞内转运离子的转铁蛋白和调节葡萄糖摄取量的胰岛素，以及一些蛋白质和清蛋白，纤维蛋白，胎球蛋白等，这些蛋白在细胞培养中发挥各种不同的功能，如提供细胞贴壁所需的基质，抗生物反应器剪切力，作为脂质和其他生长分化因子的载体等。比如：间充质干细胞无血清培养基

细胞培养知识点

即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)，是一种能够与DNA强力结合的荧光染料，常用于荧光显微镜观测.

因为DAPI可以透过完整的细胞膜，它可以用于活细胞和固定细胞的染色。（流式检测荧光病毒感染细胞时加DAPI去死活）

有些抗生素会在一周内降解，培养基最好现用现配。

丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。

几乎所有的细胞对谷氨酰胺都有较高的要求。谷氨酰胺脱掉氨基后，可作为培养细胞的能量来源，参与蛋白质的合成和能量代谢。在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。所以，各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置-20℃冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4度冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。

GlutaMAX-Ⅰ是一个L-谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的a-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L-谷氨酰胺供利用。

GlutaMAX-Ⅰ二肽非常稳定，即使在121℃灭菌20min， GlutaMAX-Ⅰ二肽溶液有最小的降解；而在相同条件下，L-谷氨酰胺几乎完全降解。

L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的，但其在溶液中不稳定，经过一段时间后会降解，确切的降解率一直没有最终确定。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。因此GlutaMAX-Ⅰ是细胞培养中谷氨酰胺的替代品

与CO2一起形成缓冲系统，保持培养基PH值稳定。

在细胞表面,NRDc能够结合HB-EGF并能促进其诱导的细胞迁移。 NRDc基因敲除的小鼠,大部分在出生后48小时内死亡,神经系统发育滞后。 我们研究发现,NRDc是第一个特异结合组蛋白H3K4me2的蛋白,并且具有调控基因转录的功能。

中文名分散酶II，一种非特异性金属蛋白酶，细胞生物学中常被用来从各种不同组织或器官中消化细胞外基质，释放并制备原代单细胞；或用于细胞培养中的细胞收获或接种转移；也被用于防止悬浮细胞培养时的细胞意外结团。，如原代细胞的分离，细胞传代等。另外，Dispase II还可用于消除悬浮细胞培养过程中发生的细胞聚集。与其他细胞生物学常用蛋白酶（如胰蛋白酶、胶原酶、链霉蛋白酶等）相比，该酶具有以下优势：1）一种快速有效且温和的细胞消化酶，对细胞损伤小，且能维持细胞膜完整性；2）来源于细菌，无支原体或其他动物病毒污染；3）稳定性强，不受温度、pH及血清组分的影响；4）可用于多种类型组织和细胞的分离等。

本品非无菌Dispase II，来源于Bacillus polymyxa，使用时需对其除菌处理，用于细胞培养时常用工作浓度为0.6-2.4 U/mL。

是包含蛋白水解酶和胶原酶活性的一种细胞消化液，是胰酶/EDTA消化液的完美替换产品，用于从常规组织培养器皿和粘附培养器皿中消化细胞，消化为单个细胞。与传统的胰酶消化液相比，本品具有以下优势：

1）适用于绝大多数原代细胞和哺乳动物细胞系的消化，以及昆虫细胞；

2）温和有效的消化干细胞（hESCs和mESCs），冻存后细胞具更高复苏率；

3）几分钟内实现粘附细胞的分离，不需清洗或中和反应，节省细胞传代时间；

4）对细胞消化较为温和，能增加细胞产量和存活率；增强细胞贴壁效率；改善细胞形态和细胞生长特性等。

注意事项：Accutase™融化后4℃保存，至少2个月稳定。不可室温保存。也可分装成单次用量，放到-80 ℃冻存，有效期2年。

cGMP mTeSR™1是使用最为广泛的，用于培养人胚胎干细胞（ES 细胞）和诱导多能干细胞（hiPS 细胞）的无饲养层培养基。从iPS的生成、培养到诱导分化，使用mTeSR™1培养细胞均建立了成熟的实验流程；该培养基已在50多个国家成功用于维持上千种ES细胞系和iPS细胞系，应用此培养基的研究成果发表于顶级的多能干细胞杂志，并为干细胞研究人员提供了强大的支持。

mTeSR™1是一款高度专业化、不含血清的完全培养基。mTeSR™1培养基选用的原材料经过严格的预筛选，确保了批次间的一致性，同时为ES 和iPS细胞的无饲养层培养提供稳健的实验环境，这为研究人员提供具有高度一致性的、表型均一、未经分化的高质量ES/iPS细胞培养物提供了保障。

mTeSR1在符合cGMP质量管理体系下生产，确保最高的质量和一致性以及可重复性。

建立体外AGM-S3基质细胞共培养体系,以揭示AGM-S3细胞对终末分化中性.

是指在琼脂平板上经过一定温度和时间培养后形成的每一个菌落，是计算细菌或霉菌数量的单位。这个单位比“菌落数”更准确地反映问题的实质。理论上，一个活细菌可以在条件合适的固体表面上形成一个菌落，但是吸附于微小颗粒上的两个以上菌体或粘连在一起的菌团可能共同形成一个菌落，而且不同环境因素作用下，细菌的生活能力各不相同，会影响其在该条件下形成菌落的能力，致使形成的菌落数远低于实际的活菌数。因此可用菌落形成单位代替以往常用的“菌落数”作为平板计数的数量单位。

消化试剂。一种无酶试剂，适用于将人胚胎干（ES）细胞或人诱导多能干（iPS）细胞集落解离为细胞聚集体，且无需对已发生分化的集落进行手工挑选。

Matrigel是一种细胞外基质的混合物，其中包含laminin和多种生长因子，用于细胞培养。

基底胶是从富含胞外基质蛋白的EHS小鼠肿瘤中提取出基底膜基质，其主要成分有层粘连蛋白、Ⅳ型胶原、巢蛋白、肝素糖蛋白，还包含生长因子和基质金属蛋白酶等。在室温条件下，基底胶聚合形成具有生物学活性的三维基质，模拟体内细胞基底膜的结构、组成、物理特性和功能，有利于体外细胞的培养和分化，可用于对细胞形态、生化功能、迁移、侵染和基因表达等的研究。

用途：培养细胞时可无需稀释直接包被，包被厚度可为0.5 mm(薄层)或1.0 mm(厚层)。Matrigel也可以在无血清培养基中稀释后用于包被培养器皿表面，根据细胞类型和应用目的确定相应Matrigel浓度。

温和细胞解离试剂（GCDR）是一种无酶试剂，适用于将人胚胎干（ES）细胞或人诱导多能干（iPS）细胞解离为细胞聚集体以进行常规传代或单细胞悬浮液。它也适用于分离肠隐窝以建立肠道类器官，以及用于在传代类器官培养物时分解康宁®基质凝胶®圆顶。GCDR不含酶或其他蛋白质。

GCDR现在也在经过认证的质量管理体系下按照相关的cGMP制造，以确保可重复结果的最高质量和一致性。

基于最原始的配方，是我们成分明确、一致性高的无滋养层培养基，用于培养诱导多能干细胞（iPSC）。也可用于ESC培养。（* DOI: 10.1111/cpr.13002 ）

人多能干细胞基础培养基，是完全确定的、不含血清和动物源成份的培养基，用于人ES和iPS细胞的分化。它是基于AndrewElefanty博士发表的APEL配方（缺乏不确定的成份，如不含蛋白的杂交瘤培养基）

该培养基可用于贴壁或EB操作流程。 可与多种不同的诱导因子或细胞因子一起使用，支持外胚层，中胚层和内胚层谱系的分化。

它们基本参与了90%以上种类细胞的培养过程。

作为带头大哥，能力非常全面，号称是应用最广泛的细胞培养液。

作为随时紧跟老大MEM的二弟，青出于蓝而胜于蓝，浓度要高出2~4倍，可分为高糖型（含葡萄糖4500mg/L）和低糖型（含葡萄糖1000mg/L）。

老三中规中矩，营养成分比较简单，比DMEM少一点糖和谷光甘肽，常用于淋巴细胞的培养。

起初是作为一种无血清配方设计的，常补加血清用于支持各种正常的和转化细胞的增殖。F12常和DMEM以I:I结合，称为 DMEM/F12培养基 ，作为开发无血清配方的基础，以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的营养成分的优点。

小兄弟F12常用来支持CHO、Hela和L－细胞生长以及原代大鼠肝细胞和前列腺上皮细胞的培养。MEM和F12 这两种培养基各取1/2，即可形成神经生物学最通用的培养基。

干细胞培养这个职业怎么样?

就是细胞培养技术员，很稳定。

干细胞是21世纪生物医学界普遍关注的新研究课题，干细胞（stem cells，SC）是一类具有自我复制能力（self-renewing）的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。

干细胞培养作用

干细胞无血清培养基是无血清、不含异源动物成分（Xeno-free）的人类干细胞培养基，可促进多种来源的人类干细胞的生长，如骨髓（BM-hMSC）、脐带（UCM-hMSC）。

干细胞培养基可促进人类干细胞的长期生长，同时还能保持多向分化潜能。干细胞培养基和干细胞无血清营养添加物共同使用，细胞贴壁及增值效果更好  。

干细胞培养特点

1、无血清、不含异源动物成分；所有成分都是明确的，且同种来源（人），包括蛋白质；不含抗生素；

2、能够培养不同来源的人类间充质干细胞；

3、维持人类干细胞的长期生长，保留类纤维原细胞形态；

4、极低的背景分化率；

5、维持干细胞的自我更新及多向分化潜能，可分化为骨细胞、脂肪细胞及软骨细胞。

高中，生物，胚胎干细胞的培养

肯定不是。

饲养层是一层细胞，用于提供干细胞培养所需的物质（教材中说的很清楚）。

细胞培养液的成分有：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、血清或血浆.

干细胞相关的培养液都必须在5％CO2的气体环境中培养使用。否则会对细胞产生影响。气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一，所需气体主要有氧气和二氧化碳。氧气参与三羧酸循环，产生供给细胞生长增殖的能量和合成细胞生长所需用的各种成分。开放培养时一般把细胞置于95%空气加5%二氧化碳混合气体环境中。二氧化碳既是细胞代谢产物也是细胞生长繁殖所需成分，它在细胞培养中的主要作用在于维持培养基的pH值。大多数细胞的适宜pH为7.2-7.4，偏离这一范围对细胞培养将产生有害的影响。一般情况下，细胞耐酸性比耐碱性大一些，在偏酸环境中更利于细胞生长。

hpaepic细胞用什么培养基

培养基的选择：

细胞培养是实验室里最常见和最基本的实验了，但却不是最简单的。别小看细胞培养，这里可蕴含着大学问。有时候细胞状态不好，转染、药筛这些实验根本就没办法做。影响细胞培养的因素很多，让我们先从培养基和血清说起。

◆ MEM是由Eagle’s基础培养基(BME)发展而来的，其中增加了组分的范围及浓度。

◆ 改良的BEM(DMEM)培养基是为小鼠成纤维细胞设计的，现在常用于贴壁细胞的培养。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍，维生素浓度是MEM的4倍，采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。最初的配方中葡萄糖含量为1000 mg/L，后来为了某些细胞的生长需要，将葡萄糖含量又调整为4500 mg/L，这就是大家常说的低糖和高糖了。

◆ aMEM含有附加的氨基酸、维生素以及核苷和脂肪酸，它可广泛应用于各种细胞类型，包括对营养成分要求苛刻的细胞。

◆ Ham’s F12是为在低血清浓度下克隆CHO细胞而设计的，现在也广泛应用于克隆形成率的分析及原代培养。F12还可以与DMEM等体积混合使用，得到一种高浓度与成分多样化相结合的产物，这种培养基已应用于许多原代培养及更难养的细胞系的培养。

◆ RPMI 1640培养基是专为淋巴细胞培养而设计的，现在已广泛应用于悬浮细胞的培养。

准备几种培养基，然后花大约两周的时间做一个简单的细胞生长实验，来选择其中最适合的。

以前大部分实验室都是用干粉培养基，但配制过程就较为繁琐，要溶解、调pH值，过滤，过程中可能会产生一些浓度误差，而且有些实验室的水质并不理想，所以培养的效果会有差异。

血清的选择：

血清含有生长因子可促进细胞的繁殖，含有附着因子可促进细胞的贴壁，同时还具有抗胰酶活性。血清同时也是矿物质、脂类及激素的来源。最常用的血清有小牛血清、新生牛血清、胎牛血清和马血清等。牛血清是按照采血时间的早晚来分类的。采血时间越早，营养物质越丰富，所含抗体也越少，因而胎牛血清适合要求高的细胞系和克隆化培养。

而血清批次间的差别就是不可避免的，这种差异来源于不同的制备方法和除菌方法、动物的年龄差别及血清的储存条件等，而且与取血动物的来源关系密切。不同的牧场、不同的气候天气及其他环境因素都可能影响血清的质量。因此选好了一种血清就要尽可能长期使用它。在需要更换时，也要尽量保持与原有的一批血清相似。现在很多公司都提供血清预留，你一旦选定了某个批次的血清，最好备足一年的量，这样可以避免很多麻烦。

血清固然是细胞培养中不可或缺的成分，但血清的批间差异大，更换血清时需要做大量的测试以取保替换的血清与原来的相似。而血清的供应也是必须要考虑的因素。

无血清培养基(Serum-Free Media)，通常以SFM表示，顾名思义，就是在细胞培养中不需要添加血清，但是在某些应用中可能要添加生长因子或细胞因子。无血清培养基中添加了血清的主要成分：粘附因子、生长因子、必需的营养物质和激素等，能减少上述血清带来的不利因素，使细胞培养的条件更稳定。但它也不是完美的，从有血清培养过渡到无血清培养的条件并不像想象中那么直截了当。处于发育的不同分化阶段的细胞(例如干细胞与定向前体细胞相比)需要不同的配方，对生长因子和细胞因子的选择尤为重要。而且在去除血清的同时，也去除了一些血清蛋白具有的保护、解毒作用，因此对试剂、水的纯度和仪器清洁度的要求更高。另外，它的价格也比普通的培养基贵很多。

这么多种，要选择起来也是个头疼的事情。除了部分培养基是公开配方的，如用于培养内皮细胞的MCDB 131(Sigma)，大部分液体培养基都是专利配方的，也就是说其中的成分是保密的。那么你只能是检索文献、让供应商推荐，然后用自己的细胞做几次传代培养来选出最合适的培养基。毕竟实践出真知嘛。