胚胎干细胞保存温度（胚胎干细胞保存温度要求）

本文目录一览：

• 1、国家对干细胞库温湿度有什么要求
• 2、2022高考生物必背知识点总结大全
• 3、干细胞冻存实验中，冻存前多久需要给细胞换上新鲜的培养基
• 4、听过博雅干细胞储存的干细胞都是存储在-196℃的液氮中，究竟好不好？
• 5、谁帮忙总结下 高中生物选修3知识点
• 6、胚胎干细胞（ES细胞）介导法（转基因动物培育的途径之一），即将外源基因导入胚胎干细胞，然后将转基因的

国家对干细胞库温湿度有什么要求

国家对于干细胞库的温度和湿度是有着严格的标准要求的。必须在这个标准之下才能够对干细胞进行保存。

2022高考生物必背知识点总结大全

高尚的生活是受爱激励并由知识导引的生活……没有知识的爱与没有爱的知识，都不可能产生高尚的生活。下面我给大家分享一些2022高考生物必背知识点 总结 大全，希望能够帮助大家，欢迎阅读!

目录

2022高考生物必背知识点

怎么提高生物成绩

学好高考生物的方法

2022高考生物必背知识点

专题一 基因工程

1. 基因工程的场所?(生物体外)

2. 基因工程操作水平?(DNA分子水平)

3. 基因工程利用的技术?(基因重组和转基因技术)

4. 基因工程的原理?(基因重组)

5. 基因工程的别名?(DNA重组技术)

6. 基因工程的目的?(获得人类需要的基因产物)

7. 基因工程/DNA重组技术的基本工具?(限制性核酸内切酶(限制酶)，DNA连接酶，载体)工具酶?(限制酶，DNA连接酶)

8. 限制酶的分布?(主要分布在原核生物中)

9. 限制酶的作用部位?(磷酸二酯键)

10. 限制酶的特异性?(限制酶只能识别特定的双链DNA序列，并在特定的切割位点切割)

11. 限制酶的专一性?(不同的限制酶识别不同的核苷酸序列)

12. 限制酶作用的结果是?(形成黏性末端或平末端)

13. DNA连接酶的种类?(2类。来自大肠杆菌的E.coliDNA连接酶(只能催化连接黏性末端)，来自T4噬菌体的T4DNA连接酶(既能催化连接黏性末端也能连接平末端))

14. DNA连接酶的作用位点?(磷酸二酯键)

15. DNA连接酶和DNA聚合酶的区别?(DNA连接酶催化连接DNA片段，不需要模板，DNA聚合酶催化连接单个脱氧核苷酸，需要模板)

16. 载体的种类?(质粒(最常用)，λ噬菌体的衍生物，动植物病毒)

17. 作为载体必备的条件?(能够在受体细胞中稳定存在并自我复制，对受体细胞无害，有一个或多个酶切位点，具有标记基因)

18. 质粒?(独立于拟核以外的小型环状双链DNA分子)

19. 标记基因的作用?常用的有?(供重组DNA的鉴定和选择)(四环素抗性基因，氨苄青霉素抗性基因)

20. 基因工程中使用的质粒是否是天然质粒?(不是，使用的是人工改造过的天然质粒)

21. 基因工程的基本操作程序的步骤?(4个，获取目的基因，基因表达载体的构建(核心工程)，将目的基因导入受体细胞，目的基因的检测与鉴定)

22. 获取目的基因的 方法 ?(从基因文库中获取，利用PCR技术扩增，化学方法人工合成)

23. 基因文库的分类?(基因组文库和部分基因文库(如cDNA文库))

24. PCR(多聚酶链式反应)技术的原理?(DNA复制)

25. PCR技术操作环境?(生物体外，在PCR扩增仪中)

26. PCR与DNA复制不同之处?(前者不需要解旋酶，高温解旋，后者要用解旋酶解旋;前者的DNA聚合酶要求热稳定性高，后者环境温和不需要热稳定性高的DNA聚合酶)(PCR技术中需要一种特殊的酶：Taq酶，又叫热稳定性DNA聚合酶)

27. 若基因较小，核苷酸序列已知，则可以通过DNA合成仪?(用化学方法直接人工合成)

28. 基因表达载体?(不同生物构建的表达载体有差别，但都需具备四部分：启动子，终止子，目的基因，标记基因)(复制原点)

29. 启动子和起始密码子，终止子和终止密码子?(启动子和终止子是DNA，起始密码子和终止密码子是RNA。启动子和终止子是转录的起点和终点，起始密码子和终止密码子是翻译的起点和终点)(启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位)

30. 转化?(目的基因进入受体细胞并在其内稳定维持和表达的过程)

31. 将目的基因导入植物细胞的方法?(农杆菌转化法(最常用)，花粉管通道法，基因枪法)

32. 农杆菌的特点?(农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移到受体细胞并整合到受体细胞染色体的DNA上)

33. 将目的基因导入动物细胞的方法?常用的受体细胞是?为什么?(显微注射技术)(受精卵)(受精卵全能性高)

34. 将目的基因导入微生物方法?(Ca2+处理法，用Ca2+处理细胞获得能吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞)

35. 目的基因的检测?(分为三个层次。首先检测目的基因是否插入转基因生物的DNA，其次检测目的基因是否转录出相应的mRNA，这两个采用分子杂交技术，最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，用抗原-抗体杂交技术)

36. 目的基因的鉴定?(个体水平的鉴定，如进行抗虫(抗病)接种实验鉴定转基因抗虫(抗病)植物是否出现抗虫(抗病)性状)

37. 基因工程操作的四个步骤中没有用到碱基互补 配对 的是?(将目的基因导入受体细胞)

38. 膀胱生物反应器与乳腺生物反应器(乳房生物反应器)的比较?(目的基因表达的细胞不同，膀胱生物反应器的外源基因在膀胱上皮细胞中表达。其优势体现在转基因动物既可以为雌性，也可以为雄性，且各个年龄段都能获取目的产物)

39. 蛋白质工程利用的手段?(基因修饰和基因合成)

40. 蛋白质工程的目的?(获得满足人类生产和生活需求的蛋白质)

质工程与基因工程的区别?(蛋白质工程可以获得新的蛋白质，基因工程只能生产自然界已存在的蛋白质)

42. 蛋白质工程流程图(从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列(基因)→合成DNA→表达出蛋白质

专题二 细胞工程

1. 细胞工程的操作水平?(细胞水平或细胞器水平)

2. 植物细胞工程有哪些技术?(植物组织培养，植物体细胞杂交技术)

3. 植物组织培养概念?(在无菌和人工控制下，将离体植物器官、组织、细胞培养在人工配制的培养基上，给予适宜培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整植株)

4. 植物组织培养的原理(理论基础)?(细胞的全能性)(细胞最终获得个体才能体现全能性)

5. 全能性的概念?大小比较?(具有某种生物全部遗传信息或全套遗传物质的细胞都具有发育成完整生物体的潜能)(受精卵生殖细胞干细胞体细胞;植物细胞动物细胞)

6. 细胞未均表现出全能性的原因?(基因的选择性表达)

7. 植物组织培养的过程?(离体的植物器官、组织或细胞 (脱分化) 愈伤组织(再分化) 胚状体或根、芽→植物体)

8. 脱分化概念?脱分化的结果?(已经分化的细胞经诱导后失去其特有的结构和功能转化为未分化细胞的过程。)(结果是形成愈伤组织)

9. 什么是愈伤组织?再分化?(具有分生能力的薄壁组织)(愈伤组织再分化出幼根和芽等)

10.脱分化，再分化过程的比较?(都需要添加植物激素(生长素和细胞分裂素)，但二者含量比例不同。另脱分化要严格避光，再分化过程需要光照

)11.植物组织培养的应用?(微型繁殖、作物脱毒、制造人工种子、单倍体育种、细胞产物(培养到愈伤组织)的工厂化生产。)

12.植物体细胞杂交的过程?意义?①：去壁。(酶解法)用纤维素酶和果胶酶②：原生质体的融合(利用了细胞膜的流动性)(两两融合可形成3种细胞，要进行筛选。)诱导融合方法：物理法包括离心、振动、电激等。化学法常用聚乙二醇(PEG)作为诱导剂。③：融合的原生质体再生细胞壁，标志着杂种细胞的形成。④：脱分化：形成愈伤组织⑤：再分化：愈伤组织再分化出幼根和芽等，进一步发育成杂 种植 株意义：克服了远缘杂交不亲和的障碍。

13.动物细胞工程包含哪些技术?(动物细胞培养(基础)，核移植技术，动物细胞融合，生产单克隆抗体)

14.动物细胞培养原理?(细胞增殖)

15.动物细胞培养过程?(取动物胚胎或幼龄动物的器官或组织(分裂能力强)→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理(去掉组织间蛋白，分散成单个细胞)→制成细胞悬液→原代培养(特点：细胞贴壁和接触抑制)→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。)

16.细胞贴壁和接触抑制?(悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表 面相 互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。)

17.细胞株?细胞系?(细胞株遗传物质没发生改变)(细胞系遗传物质发生了改变)

18.动物细胞培养的条件?(①无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。②营养：合成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入血清、血浆等天然成分。③温度：适宜温度：哺乳动物多是36.5℃±0.5℃;pH：7.2～7.4。④气体环境：95%空气+5%CO2。O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。)

19.动物细胞培养技术的应用?(制备病毒疫苗、制备单克隆抗体、检测有毒物质、培养医学研究的各种细胞。)

20.动物核移植技术?(包括胚胎细胞核移植(比较容易)和体细胞核移植(比较难))(核移植获得的动物称为克隆动物(无性生殖))

21.体细胞核移植过程?(如下图)选用去核卵(母)细胞的原因：卵母细胞比较大，容易操作;卵母细胞细胞质多，营养丰富，含能促进全能性表达的物质。

22.体细胞核移植技术的应用?(①加速家畜遗传改良进程，促进良畜群繁育;②保护濒危物种，增大存活数量;③生产珍贵的医用蛋白;④作为异种移植的供体;⑤用于组织器官的移植等。)存在的问题?(克隆动物存在着健康问题、表现出遗传和生理缺陷等。)

23.动物细胞融合概念?(动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞(具备双亲的遗传性状))

24.动物细胞融合原理?(细胞膜的流动性)

25.诱导动物细胞融合的方法?(物理法包括离心、振动、电刺激等。化学法：聚乙二醇(PEG)。生物法：灭活的病毒)

26.动物细胞融合的意义?(克服了远缘杂交的不亲和性，成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育的重要手段。)

28.单克隆抗体的制备?(1)抗体：一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。(2)杂交瘤细胞的特点：既能大量繁殖，又能产生专一的抗体。(3)单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。(4)单克隆抗体的作用：① 作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定抗原发生特异性结合，具有准确、高效、简易、快速的优点。② 用于治疗疾病和运载药物：主要用于癌症治疗，可制成“生物导弹”，也有少量用于治疗 其它 疾病。

专题三 胚胎工程

1. 胚胎工程?(胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术，如胚胎移植、体外受精、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术。经过处理后获得的胚胎，还需移植到雌性动物体内生产后代，以满足人类的各种需求。)

2. 精子的发生部位?时间?(睾丸曲细精管中)(初情期开始到生殖机能衰退)

3. 精子发生过程?(精原细胞 → 多个精原细胞 → 初级精母细胞→次级精母细胞→精细胞→精子

)4. 精细胞变形成精子?(细胞核变为精子头部的主要部分，高尔基体发育为头部的顶体，中心体演变为精子的尾，线粒体聚集在尾的基部形成线粒体鞘，其他物质浓缩成原生质滴最后随精子成熟脱落)

5. 精子的形态大小?(形态似蝌蚪，分头颈尾三部分，大小与动物体形大小无关)

6. 卵子的发生部位?时间?(卵巢)(开始于胚胎性别分化后)

7. 卵子发生过程?(卵原细胞→多个卵原细胞→初级卵母细胞→次级卵母细胞+第一极体→(受精)→ 卵细胞+第二极体)

8. 卵泡?(初级卵母细胞形成时周围被卵泡细胞包围整体称为卵泡)

9. 排卵?(指卵子(初级或次级卵母细胞)从卵泡中排出)

10.卵子受精的标志?受精完成的标志?(在透明带和卵细胞膜之间观察到两个极体时)(雌雄原核融合形成合子)

11.受精作用场所?(输卵管)

12.受精作用过程?(准备阶段：精子获能，卵子发育到减数第二次分裂中期。受精阶段：顶体反应(精子顶体释放顶体酶溶解卵丘细胞间物质，形成穿越放射冠通道。透明带反应(精子穿过透明带接触卵细胞膜时透明带发生生理反应)。卵细胞膜反应(精子头部进入卵细胞膜后卵细胞膜发生封闭作用)，雌雄原核形成，发育成熟后融合形成受精卵)

13.防止多精入卵的屏障?(第一道屏障：透明带反应、第二道屏障：卵细胞膜反应)

14.早期胚胎发育场所?(输卵管)

15.早期胚胎发育过程?①受精卵：胚胎发育的起点。②卵裂期：特点：细胞有丝分裂，细胞数量不断增加，但胚胎的总体积并不增加，或略有缩小。 ③桑椹胚：特点：胚胎细胞数目达到32个左右时，胚胎形成致密的细胞团，形似桑椹。是全能细胞。④囊胚：特点：细胞开始出现分化(该时期细胞的全能性仍比较高)。聚集在胚胎一端个体较大的细胞称为内细胞团，将来发育成胎儿的各种组织。中间的空腔称为囊胚腔。出现了囊胚从透明带中伸展出来的孵化过程。⑤原肠胚：出现胚层分化(外，中，内胚层)，内胚层包围着原肠腔，滋养层发育成胎儿的胎膜和胎盘。

16.体外受精?(模拟体内受精，包括卵母细胞的采集和培养、精子的采集和获能、受精)

17.卵母细胞的采集和培养?(小型动物：用促性腺激素处理，从输卵管中冲取卵子(不需要培养可直接用于受精);大型动物：从屠宰场已屠宰的母畜卵巢中获取或直接从活体卵巢中采集(需培养至MⅡ中期后受精))

18.精子的采集方法与获能?受精?(采集方法：手握法，假阴道法和电刺激法。获能方法：培养法(放入获能液中培养)和化学诱导法(放在一定浓度的肝素或钙离子载体A23187溶液中诱导获能))(要放入培养液中共同培养卵子精子完成受精)

19.早期胚胎培养培养液主要成分?(“两盐两素两酸一清”有机盐，无机盐，维生素，激素，氨基酸，核苷酸，血清)

20.试管苗，试管动物，克隆?(试管苗和克隆属于无性生殖，试管动物属于有性生殖)

21.胚胎移植?(指雌性动物体内早期胚胎或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物的体内，使之继续发育为新个体的技术)

22.胚胎移植的意义?(充分发挥雌性优良个体的繁殖潜能，大大缩短了供体本身的繁殖周期等)

23.胚胎移植的生理学基础?(1.供、受体生殖器官的生理变化相同，为胚胎提供相同的生理环境;2.早期胚胎没有与母体子宫建立组织联系，为胚胎收集提供可能3.受体对外来胚胎基本不发生免疫排斥反应，为胚胎的存活提供可能4.胚胎能与受体子宫建立正常的生理和组织联系，但其遗传特性不受影响)

24.胚胎移植的基本程序?(对供、受体的选择和处理，配种或进行人工授精，对胚胎进行收集、检查、培养或保存，对胚胎进行移植，以及移植后的检查等)(如对供、受体母牛进行同期发情处理(注射孕激素)，对供体母牛进行超数排卵处理(注射促性腺激素)，配种或人工授精，收集胚胎(冲卵)，对胚胎进行质量检查，胚胎移植(手术法或非手术法)或保存(-196℃液氮中冷冻保存)，对受体进行妊娠检查，产下犊牛)

25.胚胎分割?(指采用机械方法将早期胚胎切割成2、4或8等份等，经移植获得同卵双胎或多胎的技术)(属于无性繁殖或克隆)

26.胚胎分割所用仪器?选取的胚胎?注意事项?分割针分割滋养层的目的?(实体显微镜和显微操作仪)(发育良好、形态正常的桑椹胚或囊胚)(分割囊胚时要将内细胞团均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育)(做DNA分析性别鉴定)

27.胚胎干细胞?(哺乳动物的胚胎干细胞简称ES或EK细胞，来源于早期胚胎或从原始性腺中分离出来。具有胚胎细胞的特性，在形态上表现为体积小，细胞核大，核仁明显;在功能上，具有发育的全能性，可分化为成年动物体内任何一种组织细胞。另外，在体外培养的条件下(如在 饲养 层细胞上或在添加抑制因子的培养液中)，可以增殖而不发生分化，可进行冷冻保存，也可进行遗传改造。)

28.胚胎干细胞的主要用途?(①移植ES细胞修复坏死或退化部位，治愈糖尿病、肝(心)衰竭、成骨不良等病症;②ES细胞体外诱导分化，可培育人造组织器官，用于器官移植，解决供体器官不足和器官移植后免疫排斥的问题;③ES细胞在牛黄酸、丁酰环腺苷酸等诱导因子作用下可向不同类型组织细胞分化。)

怎么提高生物成绩

在高三开始复习了之后，正常情况来讲，考生们的成绩都会稳步上升。这个时候想要提高生物成绩，就要多看书，注重基础知识。对于高三学生来说，时间是最宝贵的，所以考生在看书时不能从首页开始看起，要找到自己基础比较薄弱的地方看，最好是可以背熟知识点。

另外，想要提高生物成绩，是免不了做题的，但是在做题时不能只做，还要学会分析。要知道题目考察的是什么，然后对照着书上的知识点复习，这样学习更有针对性一些。对于做错的生物题一定要做好标记或是整理在错题本上，这样可以在过一段时间再做一遍。

最后，虽然在高三大部分生物课上的知识，都是已经学习过一遍的复习课。但是考生想要提高生物成绩，就要在上课时认真听讲，只有跟紧老师的思路，才能掌握好更多的知识。如果有不懂的问题，一定要及时请教老师，不要闭门造车。

学好高考生物的方法

生物是一个比较偏文的学科，所以需要记背的知识点有很多。想要学好高中生物，就一定要把知识点记扎实。要求背诵的知识一定要背下来，没有商量的余地。因为在高考生物答题过程中，只有一字不差的知道某概念，才能做对题目。

严谨是生物学科最大的特点，往往在概念上差之毫厘，结果上可能就会谬之千里。在碰到自己常错的题目或是一些经典题目，高三学生要学会整理错题。不要放过任何错题，只有现在把所有的错题改正并掌握好，才能在考试的时候不再犯相同的错误。

想要学好生物，对于课本中的实验也有给予重视，像是孟德尔测交实验就是考试中经常出题的点。另外实验中的常用方法也是考试中的重要出题点，像是演绎推理法、控制单一变量法等都是比较常见的，由此可以看出课本实验的重要性。

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干细胞冻存实验中，冻存前多久需要给细胞换上新鲜的培养基

在冻存前一天最好换一次培养液。

细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保种的作用。除此之外，还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。

细胞冻存时向培养基中加入保护剂--终浓度5%．15%的甘油或二甲基亚砜(dmso)，可使溶液冰点降低，加之在缓慢冻结条件下，细胞内水分透出，减少了冰晶形成，从而避免细胞损伤。

采用"慢冻快融"的方法能较好地保证细胞存活。标准冷冻速度开始为-1

到

-2℃/min，当温度低于-25℃时可加速，到-80℃之后可直接投入液氮内(-196℃)。

听过博雅干细胞储存的干细胞都是存储在-196℃的液氮中，究竟好不好？

液氮是一种无色、无味、温度极低的物质，由于其化学惰性，可以直接和生物组织接触，立即冷冻而不会破坏生物活性。干细胞储存的液氮罐就是通过液氮的物理特性制作的一种设备，使得干细胞在充满氮气的环境中实现低温保存。冻存干细胞是一项看似简单却极具技术含量的系统工程，对于储存温度和储存环境的要求非常高。干细胞放入液氮罐正式储存前，为了防止干细胞在低温环境中破损，需要对干细胞加入冷冻保护剂，进行降温处理。在降温的过程中，要利用 计算机程序逐步缓慢降低温度至-90℃后才可以转入-196℃深低温液氮中进行长期冻存，保障干细胞的活性。博雅干细胞库也是这种操作的！

谁帮忙总结下 高中生物选修3知识点

选修3复习提纲

一、  基因工程

1、（a）基因工程的诞生

（一）基因工程的概念

基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。

2、（a）基因工程的原理及技术

原理：基因重组

技术：（一）基因工程的基本工具

1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）

（1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。

（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。

（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。

2.“分子缝合针”——DNA连接酶

(1)两种DNA连接酶（E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较：

①相同点：都缝合磷酸二酯键。

②区别：E·coliDNA连接酶来源于T4噬菌体，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。

(2)与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。

3.“分子运输车”——载体

（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。

（2）最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。

（3）其它载体： 噬菌体的衍生物、动植物病毒

(二)基因工程的基本操作程序

第一步：目的基因的获取

1.目的基因是指： 编码蛋白质的结构基因 。

2.原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法_。

3.PCR技术扩增目的基因

（1）原理：DNA双链复制

（2）过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链；第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链；第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。

第二步：基因表达载体的构建

1.目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。

2.组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因

（1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。

（2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段 ，位于基因的尾端。

（3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因。

第三步：将目的基因导入受体细胞_

1.转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。

2.常用的转化方法：

将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是 农杆菌转化法，其次还有 基因枪法和 花粉管通道法等。

将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是 显微注射技术。此方法的受体细胞多是 受精卵。

将目的基因导入微生物细胞：

3.重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。

第四步：目的基因的检测和表达

1.首先要检测 转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用 DNA分子杂交技术。

2.其次还要检测 目的基因是否转录出了mRNA，方法是采用 用标记的目的基因作探针与mRNA杂交。

3.最后检测 目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取 蛋白质，用相应的 抗体进行 抗原－抗体杂交。

4.有时还需进行 个体生物学水平的鉴定。如 转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。

（三）（b）基因工程的应用

1.植物基因工程：抗虫、抗病、抗逆转基因植物，利用转基因改良植物的品质。

2.动物基因工程：提高动物生长速度、改善畜产品品质、用转基因动物生产药物。

3.基因治疗：把正常的外源基因导入病人体内，使该基因表达产物发挥作用。

（四）（a）蛋白质工程的概念

蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。（基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质）（1）蛋白质工程崛起的缘由：基因工程只能生产自然界已存在的蛋白质

（2）蛋白质工程的基本原理：它可以根据人的需求来设计蛋白质的结构，又称为第二代的基因工程。

基本途径：从预期的蛋白质功能出发，设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的脱氧核苷酸序列（基因）以上是蛋白质工程特有的途径；以下按照基因工程的一般步骤进行。（注意：目的基因只能用人工合成的方法）

设计中的困难：如何推测非编码区以及内含子的脱氧核苷酸序列

二、细胞工程

（一）植物细胞工程

1.理论基础（原理）：细胞全能性

2.植物组织培养技术（b）

（1）过程：离体的植物器官、组织或细胞 ―――→愈伤组织 ―――→试管苗 ――→植物体

（2）用途：微型繁殖、作物脱毒、制造人工种子、单倍体育种、细胞产物的工厂化生产。

A 植物繁殖

微型繁殖：可以高效快速地实现种苗的大量繁殖

作物脱毒：采用茎尖组织培养来除去病毒（因为植物分生区附近的病毒极少或没有）

人工种子：以植物组织培养得到的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等为材料，经人工薄膜包装得到的种子。优点：完全保持优良品种的遗传特性，不受季节的限制；方便储藏和运输

B 作物新品种培育

单倍体育种：

a过程：植株（AaBb）通过减数分裂得到花粉（AB、Ab、aB、ab四种类型）；对花粉进行花药离体培养（技术是植物组织培养）；得到单倍体植株；对其幼苗时期进行秋水仙素处理；得到了正常的纯合二倍体植株（AABB、AAbb、aaBB、aabb四种类型）。

b 优点：明显缩短育种年限

C 突变体利用：在组织培养中会出现突变体，通过从有用的突变体中选育出新品种（如筛选抗病、抗盐、含高蛋白的突变体）

D 细胞产物的生产：通过能够产生对人们有利的产物的细胞进行组织培养，从而让它们能够产生大量的细胞产物。

（3）地位：是培育转基因植物、植物体细胞杂交培育植物新品种的最后一道工序。

3.植物体细胞杂交技术

（1）过程：

（2）诱导融合的方法：物理法包括离心、振动、电刺激等。化学法一般是用聚乙二醇（PEG）作为诱导剂。

（3）意义：克服了远缘杂交不亲和的障碍。

（二）动物细胞工程

1. 动物细胞培养（a）

（1）概念：动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。

（2）动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。

（3）细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。

（4）动物细胞培养需要满足以下条件

①无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。

②营养：合成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入血清、血浆等天然成分。

③温度：适宜温度：哺乳动物多是36.5℃＋0.5℃；pH：7.2～7.4。

④气体环境：95%空气＋5%CO2。O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。

（5）动物细胞培养技术的应用：制备病毒疫苗、制备单克隆抗体、检测有毒物质、培养医学研究的各种细胞。

2.动物体细胞核移植技术和克隆动物

（1）哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植（比较容易）和体细胞核移植（比较难）。

（2）选用去核卵(母)细胞的原因：卵(母)细胞比较大，容易操作；卵(母)细胞细胞质多，营养丰富。

（3）体细胞核移植的大致过程是：

高产奶牛（提供体细胞）进行细胞培养；同时采集卵母细胞，在体外培养到减二分裂中期的卵母细胞，去核（显微操作）[注：为什么要用卵细胞？它可以提供充足的营养；操作简便；细胞质不会抑制细胞核全能性的表达]；将供体细胞注入去核卵母细胞；通过电刺激使两细胞融合，供体核进入受体卵母细胞，构建重组胚胎；将胚胎移入受体（代孕）母牛体内；生出与供体奶牛遗传基因相同的犊牛

（4）体细胞核移植技术的应用：

①加速家畜遗传改良进程，促进良畜群繁育；②保护濒危物种，增大存活数量；

③生产珍贵的医用蛋白；④作为异种移植的供体；⑤用于组织器官的移植等。

（5）体细胞核移植技术存在的问题：

克隆动物存在着健康问题、表现出遗传和生理缺陷等。

3.动物细胞融合

（1）动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。

（2）动物细胞融合与植物原生质体融合的原理基本相同，诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的方法类似，常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒、电刺激等。

（3）动物细胞融合的意义：克服了远缘杂交的不亲和性，成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物生物新品种培育的重要手段。

（4）动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较：

细胞工程 植物体细胞杂交 动物细胞融合

理论基础 细胞的全能性、细胞膜的流动性 细胞增殖、细胞膜的流动性

融合前处理 酶解法去除细胞壁（纤维素酶、果胶酶） 注射特定抗原，免疫处理正常小鼠

诱导手段 物理法:离心、振动、电激

化学法：聚乙二醇（PEG） 物理法:离心、振动、电激

化学法：聚乙二醇

生物法：灭活的病毒（灭活的仙台病毒）

诱导过程 第一步：原生质体的制备

（酶解法）

第二步：原生质体融合

（物、化法）

第三步：杂种细胞的筛选和培养

第四步：杂种植株的诱导与鉴定 正常小鼠免疫处理

动物细胞的融合

（物、化、生法）

杂交瘤细胞的筛选与培养

专一抗体检验阳性细胞培养

单克隆抗体的提纯

用途和意义 克服远缘杂交的不亲和障碍，大大扩展杂交的亲本组合范围

应用：白菜-甘蓝等杂种植株 制备单克隆抗体

诊断、治疗、预防疾病，例如“生物导弹”治疗癌症

4.单克隆抗体

（1）抗体：一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。

（2）单克隆抗体的制备过程：

对免疫小鼠注射特定的抗原蛋白（目的使小鼠产生了效应B细胞）；提取B淋巴细胞；同时用动物细胞培养的方法培养骨髓瘤细胞并提取；促使它们细胞融合[注：融合的结果是有很多不符合要求的；如有2个B淋巴细胞融合的细胞等，所以要进行筛选]；在特定的选择培养基上筛选出融合的杂种细胞[特点是能迅速大量增殖，又能产生专一的抗体]；然后对它进行克隆化培养和抗体检测[筛选出能够分泌所需抗体的杂种细胞]；最后将杂交瘤细胞在体外做大规模培养或注射入小鼠腹腔内增殖，从细胞培养液或小鼠腹水中可得到大量的单克隆抗体。

（3）杂交瘤细胞的特点：既能大量繁殖，又能产生专一的抗体。

（4）单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。

（5）单克隆抗体的作用：作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定抗原发生特异性结合，具有准确、高效、简易、快速的优点。用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗癌症治疗，可制成“生物导弹”，也有少量用于治疗其它疾病。

三、胚胎工程

（一）动物胚胎发育的基本过程

（1）精子的发生：补充，精原细胞先进行有丝分裂后进行减数分裂；变形过程中，细胞核为精子头的主要部分，高尔基体发育为顶体，中心体演变为精子的尾，线粒体在尾基部形成线粒体鞘膜，其他物质浓缩为原生质滴直至脱落。[线粒体为精子运动提供能量]

（2）卵子的发生：在胎儿时期，卵原细胞进行有丝分裂演变成初级卵母细胞[被卵泡细胞包围]，减一分裂在排卵前后完成，形成次级卵母细胞和第一极体进入输卵管准备受精；减二分裂是在受精过程中完成的。

（3）受精：精子获能（在雌性动物生殖道内）；卵子的准备（排出的卵子要在输卵管中进一步成熟到减二中期才具备受精能力）；受精阶段[卵子周围的结构由外到内：放射冠、透明带、卵黄膜]，a顶体反应：精子释放顶体酶溶解卵丘细胞之间的物质，穿越放射冠。

b透明带反应：顶体酶可将透明带溶出孔道，精子穿入，在精子触及卵黄膜的瞬间阻止后来精子进入透明带的生理反应[它是防止多精子入卵受精的第一道屏障]；c卵黄膜的封闭作用：精子外膜和卵黄膜融合，精子入卵后，卵黄膜会拒绝其他精子再进入卵内的过程[它是防止多精子入卵受精的第二道屏障]；精子尾部脱落，原有核膜破裂形成雄原核，同时卵子完成减二分裂，形成雌原核[注意：受精标志是第二极体的形成；受精完成标志是雌雄原核融合成合子]。

（4）胚胎发育：a卵裂期：细胞进行有丝分裂，数量增加，胚胎总体积不增加；b桑椹胚：32个细胞左右的胚胎[之前所有细胞都能发育成完整胚胎的潜能属全能细胞]；c囊胚：细胞开始分化，其中个体较大的细胞叫内细胞团将来发育成胎儿的各种组织；而滋养层细胞将来发育成胎膜和胎盘；胚胎内部逐渐出现囊胚腔[注：囊胚的扩大会导致透明带的破裂，胚胎伸展出来，这一过程叫孵化]；d原肠胚：内细胞团表层形成外胚层，下方细胞形成内胚层，由内胚层包围的囊腔叫原肠腔。[细胞分化在胚胎期达到最大限度]

9 胚胎工程的理论基础（识记）

（1）胚胎工程的概念及技术手段：对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术，如胚胎移植、体外受精、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术。

（2）体外受精[属有性生殖过程]：a卵母细胞的采集和培养 对体型小的动物用促性腺激素处理，从输卵管冲取卵子（可直接受精）；对体型大的动物从卵巢中采集卵母细胞（要在体外培养成熟）b精子的采集 假阴道法、手握法和电刺激法；获能 对啮齿动物、兔、猪等的精子用培养法（放入人工配制的获能液中）；对牛、羊等精子用化学法（放在肝素或钙离子载体溶液中）

（3）胚胎的早期培养：a培养液成分：无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸、血清等[注意与动物细胞培养液成分的比较]；b当胚胎发育到适宜的阶段时，可将其取出向受体移植或冷冻保存。

（4）胚胎移植：a概念：将雌性动物的早期胚胎移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物的体内，使之继续发育为新个体的技术。是生产胚胎的供体和孕育胚胎的受体共同繁殖后代的过程，通过转基因、核移植、体外受精获得的胚胎必须移植给受体才能获得后代。

b优势：可以充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力，缩短供体本身的繁殖周期。

c胚胎移植的生理学基础：同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的[对供体和受体进行同期发情处理]；早期胚胎形成后处于游离状态，为胚胎的收集提供可能；受体对移入子宫的外来胚胎基本不发生免疫排斥反应；移入受体的供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不受影响。

d胚胎移植的程序：对供、受体母牛进行选择，用激素进行同期发情处理；对供体母牛用激素做超数排卵处理；选择同种优秀公牛配种[有性生殖过程]；对胚胎进行收集[此时胚胎处于游离状态]；对胚胎进行质量检查[此时胚胎应发育到桑椹胚或囊胚]；胚胎移植[或冷冻保存]；检查受体母牛是否受孕；产下胚胎移植的犊牛。

（5）胚胎分割：a概念：用机械方法将早期胚胎切割成2、4、8等分等，经移植获得同卵双胎或多胎的技术[可看作是动物无性繁殖或克隆]

b基本过程：选择良好的桑椹胚或囊胚移入培养皿中，用分割针或分割刀片将其切开，吸出其中的半个胚胎注入透明带中或直接移植给受体。[注意：内细胞团要均等分割，否则会影响胚胎的恢复和进一步发育]

10 胚胎干细胞的移植（识记）

（1）胚胎干细胞的含义：由早期胚胎[囊胚]或原始性腺[胎儿]中分离出来的一类细胞，又叫ES或EK细胞。

（2）特征：形态上体积小、细胞核大、核仁明显；功能上具有发育的全能性，即可分化为成年动物体内任何一种组织细胞。[体外培养下，ES细胞可以只增殖不分化]

（3）应用：用于治疗人类疾病，如利用ES细胞诱导其分化成新的组织细胞特性，移植ES细胞可使坏死或退化的部位得以修复。

1、胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术，如胚胎移植、体外受精、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术。经过处理后获得的胚胎，还需移植到雌性动物体内生产后代，以满足人类的各种需求。

2、动物胚胎发育的基本过程

（1）受精场所是母体的输卵管。

（2）卵裂期：特点：细胞有丝分裂，细胞数量不断增加，但胚胎的总体体积并不增加，或略有减小。

（3）桑椹胚：特点：胚胎细胞数目达到32个左右时，胚胎形成致密的细胞团，形似桑椹。是全能细胞。

（4）囊 胚：特点：细胞开始出现分化（该时期细胞的全能性仍比较高）。聚集在胚胎一端个体较大的细胞称为内细胞团，将来发育成胎儿的各种组织。中间的空腔称为囊胚腔。

（5）原肠胚：特点：有了三胚层的分化，具有囊胚腔和原肠腔。

（二）胚胎干细胞

1、哺乳动物的胚胎干细胞简称ES或EK细胞，来源于早期胚胎或从原始性腺中分离出来。

2、具有胚胎细胞的特性，在形态上表现为体积小，细胞核大，核仁明显；在功能上，具有发育的全能性，可分化为成年动物体内任何一种组织细胞。另外，在体外培养的条件下，可以增殖而不发生分化，可进行冷冻保存，也可进行遗传改造。

3、胚胎干细胞的主要用途是：①可用于研究哺乳动物个体发生和发育规律；②是在体外条件下研究细胞分化的理想材料，在培养液中加入分化诱导因子，如牛黄酸等化学物质时，就可以诱导ES细胞向不同类型的组织细胞分化，这为揭示细胞分化和细胞凋亡的机理提供了有效的手段；③可以用于治疗人类的某些顽疾，如帕金森综合症、少年糖尿病等；④利用可以被诱导分化形成新的组织细胞的特性，移植ES细胞可使坏死或退化的部位得以修复并恢复正常功能；⑤随着组织工程技术的发展，通过ES细胞体外诱导分化，定向培育出人造组织器官，用于器官移植，解决供体器官不足和器官移植后免疫排斥的问题。

（三）胚胎工程的应用

1.体外受精和胚胎的早期培养

(1)卵母细胞的采集和培养：主要方法：用促性腺激素处理，使其排出更多的卵子，然后，从输卵管中冲取卵子，直接与获能的精子在体外受精。第二种方法：从刚屠宰母畜的卵巢中采集卵母细胞；第三种方法是借助超声波探测仪、腹腔镜等直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞。采集的卵母细胞，都要在体外经人工培养成熟后，才能与获能的精子受精。

(2) 精子的采集和获能：在体外受精前，要对精子进行获能处理。

(3) 受精：获能的精子和培养成熟的卵细胞在获能溶液或专用的受精溶液中完成受精过程。

(4)胚胎的早期培养：精子与卵子在体外受精后，应将受精卵移入发育培养液中继续培养，以检查受精状况和受精卵的发育能力。培养液成分较复杂，除一些无机盐和有机盐外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及血清等物质。当胚胎发育到适宜的阶段时，可将其取出向受体移植或冷冻保存。不同动物胚胎移植的时间不同。(牛、羊一般要培育到桑椹胚或囊胚阶段才能进行移植，小鼠、家兔等实验动物可在更早的阶段移植，人的体外受精胚胎可在4个细胞阶段移植。)

2.胚胎移植

(1)胚胎移植是指将雌性动物的早期胚胎，或者通过体外受精及其它方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其它雌性动物的体内，使之继续发育为新个体的技术。其中提供胚胎的个体称为“供体”，接受胚胎的个体称为“受体”。（供体为优良品种，作为受体的雌性动物应为常见或存量大的品种。）

地位：如转基因、核移植，或体外受精等任何一项胚胎工程技术所生产的胚胎，都必须经过胚胎移植技术才能获得后代，是胚胎工程的最后一道“工序”。

(2) 胚胎移植的意义：大大缩短了供体本身的繁殖周期，充分发挥雌性优良个体的繁殖能力。

(3) 生理学基础：①动物发情排卵后，同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的。这就为供体的胚胎移入受体提供了相同的生理环境。

②早期胚胎在一定时间内处于游离状态。这就为胚胎的收集提供了可能。

③受体对移入子宫的外来胚胎不发生免疫排斥反应。这为胚胎在受体的存活提供了可能。

④供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系，但供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不受影响。

(4) 基本程序主要包括：

①对供、受体的选择和处理。选择遗传特性和生产性能优秀的供体，有健康的体质和正常繁殖能力的受体，供体和受体是同一物种。并用激素进行同期发情处理，用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理。

②配种或人工授精。

③对胚胎的收集、检查、培养或保存。配种或输精后第7天，用特制的冲卵装置，把供体母牛子宫内的胚胎冲洗出来(也叫冲卵)。对胚胎进行质量检查，此时的胚胎应发育到桑椹或胚囊胚阶段。直接向受体移植或放入－196℃的液氮中保存。

④对胚胎进行移植。

⑤移植后的检查。对受体母牛进行是否妊娠的检查。

3.胚胎分割

(1)概念：是指采用机械方法将早期胚胎切割2等份、4等份等，经移植获得同卵双胎或多胎的技术。

(2)意义：来自同一胚胎的后代具有相同的遗传物质，属于无性繁殖。

(3)材料：发育良好，形态正常的桑椹胚或囊胚。（桑椹胚至囊胚的发育过程中，细胞开始分化，但其全能性仍很高，也可用于胚胎分割。）

(4)操作过程：对囊胚阶段的胚胎分割时，要将内细胞团均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。

（四）生物技术的安全性和伦理问题

1.转基因生物的安全性争论 ：

(1)基因生物与食物安全：

反方观点：反对“实质性等同”、出现滞后效应、出现新的过敏原、营养成分改变

正方观点：有安全性评价、科学家负责的态度、无实例无证据

(2)转基因生物与生物安全：对生物多样性的影响

反方观点：扩散到种植区之外变成野生种类、成为入侵外来物种、重组出有害的病原体、成为超级杂草、有可能造成“基因污染”

正方观点：生命力有限、存在生殖隔离、花粉传播距离有限、花粉存活时间有限

(3)转基因生物与环境安全：对生态系统稳定性的影响

反方观点：打破物种界限、二次污染、重组出有害的病原微生物、毒蛋白等可能通过食物链进入人体

正方观点：不改变生物原有的分类地位、减少农药使用、保护农田土壤环境

2.生物技术的伦理问题

(1)克隆人：两种不同观点，多数人持否定态度。

否定的理由：克隆人严重违反了人类伦理道德，是克隆技术的滥用；克隆人冲击了现有的婚姻、家庭和两性关系等传统的伦理道德观念；克隆人是在人为的制造在心理上和社会地位上都不健全的人。

肯定的理由：技术性问题可以通过胚胎分级、基因诊断和染色体检查等方法解决。不成熟的技术也只有通过实践才能使之成熟。

中国政府的态度：禁止生殖性克隆，不反对治疗性克隆。四不原则：不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人的实验。

(2)试管婴儿：两种目的试管婴儿的区别两种。不同观点，多数人持认可态度。

否定的理由：把试管婴儿当作人体零配件工厂，是对生命的不尊重；早期生命也有活下去的权利，抛弃或杀死多余胚胎，无异于“谋杀”。

肯定的理由：解决了不育问题，提供骨髓中造血干细胞救治患者最好、最快捷的方法，提供骨髓造血干细胞并不会对试管婴儿造成损伤。

(3)基因身份证：

否定的理由：个人基因资讯的泄漏造成基因歧视，势必造成遗传学失业大军、造成个人婚姻困难、人际关系疏远等严重后果。

肯定的理由：通过基因检测可以及早采取预防措施，适时进行治疗，达到挽救患者生命的目的。

3.生物武器

(1)种类：致病菌、病毒、生化毒剂，以及经过基因重组的致病菌。

(2)散布方式：吸入、误食、接触带菌物品、被带菌昆虫叮咬等。

(3)特点：致病力强、多数具传染性、传染途径多、污染面广、有潜伏期、不易被发现、危害时间长等。

(4)禁止生物武器公约及中国政府的态度：在任何情况下不发展、不生产、不储存生物武器，并反对生物武器及其技术和设备的扩散。

生态工程的原理（识记）

（1）生态工程建设的目的：遵循自然界物质循环的规律，充分发挥资源的生产潜力，防止环境污染，达到经济效益和生态效益的同步发展。

（2）生态经济：通过实行循环经济的原则，使一个系统产出的污染物能够成为本系统或另一个系统的生产原料，从而实现废弃物的资源化。[实现手段：生态工程]

（3）基本原理：物质循环再生原理[如无废弃物农业]

物种多样性原理[提高生态系统的抵抗力稳定性]

协调与平衡原理[处理生物与环境的协调与平衡，考虑环境容纳量]

胚胎干细胞（ES细胞）介导法（转基因动物培育的途径之一），即将外源基因导入胚胎干细胞，然后将转基因的

（1）动物细胞培养时，需要在无菌，温度、pH适宜，营养充足条件下进行，由于人们对细胞所需营养物质还没有搞清楚，因此在培养动物细胞时还需加入适量的动物血清、血浆等天然成分．

（2）图1中①表示将重组质粒导入受体细胞的过程，当受体细胞是动物细胞时，常采用显微注射法．图中②表示导入囊胚时期的胚胎．④为嵌合体小鼠，与通过体外受精技术培养得到的小鼠“试管鼠”相比，嵌合体小鼠中具有遗传物质组成不同的两种细胞，而试管鼠细胞的遗传物质都相同．

（3）一种限制酶只能识别并切割一种特定的核苷酸序列，BamHⅠ和BglⅡ两种限制酶的识别序列不同，但两者切割后形成的黏性末端相同，用DNA连接酶可将两者切割后产生的黏性末端连接起来．因此用这两种酶和DNA连接酶对一段含有多个BamHⅠ和BglⅡ识别序列的外源基因进行反复的切割和连接操作，若干循环后，明显增多的序列为．

故答案为：

（1）适量的动物血清

（2）显微注射法    囊胚   嵌合体小鼠中具有遗传物质组成不同的两种细胞，而试管鼠细胞的遗传物质都相同

（3）   一种限制酶只能识别并切割一种特定的核苷酸序列