干细胞分离纯化方法

科学知识 2023年07月27日 16:12 43 im

1.引入

　　干细胞是一种能够自我更新和分化成多种细胞类型的细胞，被认为在医学领域有着广泛的应用前景。然而，目前尚无法充分了解和利用干细胞的特性，主要原因是干细胞的分离和纯化技术尚处于发展阶段。

　　目前，干细胞分离的方法主要有两种：生理和化学方法。

　　生理方法通过对细胞形态、大小、生长速度、生长空间及生理功能等指标的差异进行筛选，从而实现对干细胞的分离。

　　生理方法分为以下几种：

密度梯度离心法（DG）：此方法利用细胞质密度的差异将干细胞与其他细胞分开。通过梯度离心可以使含有不同密度细胞的混合溶液均匀分布于密度梯度离心管中，离心后，细胞根据质量排列在不同浓度的密度梯度区间内。用手动注射器吸取干细胞，再归纳到第二个离心管中。
微流控技术（MF）：此方法通过调控腔道宽度、形态及微环境，利用细胞输运微流标准定量培养细胞，在流控芯片中对称加速和减速，治疗后，比对其与传统国际接口培养的干细胞数量，可以发现MW培养下提高了细胞质量、增强了细胞特性表达。
低附着培养法（LA）：此方法原理为：在基得体上选择较大间距的细胞即为干细胞。将细胞溶液加入无DNA切割酶的干净小盘里，利用这种表面较少细胞附着的基得组织特性，可以使由于细胞附着增长的细胞严格有选择地保留下来。

　　化学法包括表面标记法、形态分类法、磁珠分离法、免疫磁珠分离法等。

　　化学方法分为以下几种：

表面标记法（FA）：此方法利用针对细胞表面上部分高表达的蛋白标记的途径，使标记化细胞通过这种标记特异性结合而精确分类。经过这种化学改变的细胞可以被得到，只要将表面对应受体锁定在某种固定平台上，再将上述标记化细胞或无序细胞注入后，可以用非常敏感的检测器进行检测，从而识别出标记细胞。
形态分类法（CA）：此方法是通过对干细胞所呈现出来的形态特征进行区分的方法。目前形态分类领域中最佳模型是基于核大小形态特征数据的模型 with 衰减回归。可以自动地从图像中检测和管理细胞。
免疫磁珠分离法（IMS）：此方法利用具有特定标志的抗体为介质将相应蛋白质标记的细胞卡住。对于干细胞，我们通常可以通过表面标记的抗体来识别和纯化。
磁珠分离法（MS）：此方法利用高强度磁场有效地将细胞分为两个部分：靶细胞集中在磁力珠上，而其他非细胞部分则留在溶液中。可以使用自动分离器或手持式沙格磁珠分离器选择合适的磁性珠囊袋，并且将至少10 ml的细胞溶液从磁场处直接放入珠囊袋操作所需时间为2-5分钟。