干细胞冻存液配置步骤
成人细胞储存的流程
2023年07月17日 21:09 108
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干细胞冻存液配置步骤
在生物医学领域中，干细胞的研究应用领域越来越广泛。干细胞的冻存是保证其长期保存和使用的关键步骤之一，其冻存液的制备过程也是必不可少的。下面将详细介绍干细胞冻存液的配置步骤。
1. 准备所需材料
首先确定需要冻存的干细胞品种和数量，然后准备所需材料：
- 使用双倍浓度的增殖培养基（DMEM/F12）
- 使用10% 上清FBS
- 使用10% DMSO（二甲基亚砜）
2. 配置冻存液
将DMEM/F12培养基室温下或37℃下进行预热。并将100ml DMEM/F12加入一个250ml Erlenmeyer锥形瓶中，并将上清FBS、DMSO依次加入到DMEM/F12中，平均混合。制成的冻存液缓慢滴入分装到小容器中。
3. 收获和离心干细胞
生长良好的干细胞收获后，利用离心机将其离心至沉淀形态，弃掉上清部分，并多次用PBS缓冲液将细胞洗涤，一遍后加入去离子紫外线照射水再次洗涤。重复以上步骤直至没有杂质。
4. 冻存过程
- 第一步：按比例混合整个细胞的冻存液，将其连接到细胞容器中。
- 第二步：将细胞悬液慢慢地冷至4℃以下。
- 第三步：使用从4℃置于-80℃的温度梯度中冰王冻引。不要打落干冰。
- 第四步：将细胞置于液氮中进行长时间存储。
5. 汇总
在保证干细胞品质的前提下，按照以上步骤正确合理地配置冻存液，可以极大地促进干细胞的冻存和使用，同时也保证了干细胞的品质和数量。因此，对于干细胞研究人员而言，对以上步骤的掌握和实践都至关重要。
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