冻存干细胞输入方法
冻存干细胞输入方法
干细胞技术是当前医学领域研究的热点。干细胞具有自我复制的能力以及分化成各种细胞类型的潜力，因此被广泛用于组织工程和再生医学等领域。在实际应用中，干细胞的数量是一个非常重要的问题。冻存干细胞是一种常见的保存方式，本文将介绍冻存干细胞输入的方法。
所需材料
- 润滑剂（例如dimethyl sulfoxide（DMSO）），用于保护细胞膜并减缓冷冻过程中产生的晶体化现象；
- 明胶、牛血清蛋白、冷冻培养基等实验室常见物品；
- 低温离心机、液氮罐等设备。
步骤
冻存干细胞的方法主要包括以下几个步骤：
步骤一：收集细胞
将需要进行冻存的细胞进行培养，并在接近对数生长期时，用PBS将其洗涤几次，以去除培养基和血清等杂质。使用酶消化或振荡器等方法单离出细胞，将细胞充分悬浮于培养基中。
步骤二：添加保护剂
干细胞容易在低温下发生氧化和破损，因此需要添加保护剂。可选用5%的明胶、10%的牛血清蛋白或0.5M的DMSO作为保护剂。串联反应酶体系（TRizol）也是一种常用的保护剂，可以同时保护细胞学上重要的RNA和DNA分子。
步骤三：冻存过程
将细胞在1ml的保护剂中均匀混合后，轻轻离心。将上清液弃去，留下大约100 μl细胞保护剂混合物。将混合物分装到冷冻管中，冷冻管应有耐低温的标记，最好标注细胞类型、鉴定证书号、冻存日期等信息，以便日后使用。在一个附有数字标记的盒子中排列好冷冻管，最后放在低温离心机中冷冻。升级到更低温度时，关闭离心机，并将其放到液氮罐的气相区域内，直到细胞完全冷冻为止。在细胞冻存期间沿着合适周期进行液氮更换。
解冻方法
解冻前应先准备一个36-37°C水浴，并提前准备好解冻培养基。将冷冻管从液氮罐中拿出，迅速放入55°C水浴中，用手持式涡流器轻轻摇晃，直到大部分冰块融化。接着，将冰块部分置于36-37°C的水浴器中，在室温下快速离心（2000-3000rpm，5-10min）。弃去上清，将细胞进行重悬后，在相应温度和CO2、和O2组成下孵育，然后将其移至37°C水域中恢复正常温度。
综上所述，冻存干细胞将是未来临床治疗的发展方向之一，冻存干细胞的输入方法对干细胞的保存和应用起着非常关键的作用，因此正确而规范的冻存操作是十分必要的。
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