小鼠脾脏细胞长期储存的秘诀
小鼠脾脏细胞长期储存的秘诀
脾脏是哺乳动物体内最大的淋巴器官，在免疫反应中发挥着至关重要的作用。小鼠脾脏细胞储存对于基础和转化研究至关重要，需要长期保存细胞活性和功能的可靠方法。本文介绍了小鼠脾脏细胞储存的关键原则和最佳实践。
1. 脾脏细胞制备
1.1. 小鼠安乐死后，切除脾脏并将其放入含无血清培养基和抗生素的无菌培养皿中。
1.2. 使用无菌剪刀和镊子将脾脏磨碎成细悬浮液。
1.3. 通过 70μm 的细胞滤网过滤悬浮液，去除任何碎片。
1.4. 使用离心机以 300 x g 离心 5 分钟去除细胞沉淀。
1.5. 弃去上清液并用含无血清培养基和抗生素的新培养基重悬细胞。
2. 细胞计数和活力评估
2.1. 使用血细胞计数器或其他适当的方法计数细胞。
2.2. 使用台盼蓝排斥试验或其他标准方法评估细胞活力。
2.3. 细胞悬浮液应包含至少 90% 的活细胞。
3. 冻存
3.1. 选择合适的冻存液，例如 10% 二甲基亚砜 (DMSO) 或其他商业冻存液。
3.2. 将细胞悬浮液与冻存液以 1:1 或 1:2 的体积比混合。
3.3. 将细胞-冻存液混合物置于冷冻管中，并在冷冻管上贴上标签。
3.4. 将冷冻管放入装有异丙醇的冷冻盒中。
3.5. 将冷冻盒放入 -80°C 冰箱中。
4. 液氮储存
4.1. 对于长期储存，将冷冻管转移到液氮罐中。
4.2. 确保液氮罐处于安全稳定的状态。
4.3. 在液氮罐中储存的细胞可以保持活性数年。
5. 解冻
5.1. 从液氮罐中取出冷冻管。
5.2. 将冷冻管快速放入 37°C 水浴中。
5.3. 解冻后，用预热的含无血清培养基和抗生素的新培养基稀释细胞悬浮液。
5.4. 以 300 x g 离心 5 分钟去除细胞沉淀。
5.5. 弃去上清液并用含无血清培养基和抗生素的新培养基重悬细胞。
6. 储存时间
6.1. 在适当地保存和解冻的情况下，小鼠脾脏细胞可以在液氮中储存一年以上。
6.2. 储存时间可能会因所使用的储存方法和细胞类型而异。
7. 结论
小鼠脾脏细胞储存需要仔细制备、冻存和解冻程序。通过遵循本文概述的最佳实践，可以在液氮中长期保存小鼠脾脏细胞的活性。这对于免疫学研究和生物技术应用至关重要。
标签： 细胞储存的应用
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