人血单核细胞提取储存的最佳实践
人血单核细胞提取储存的最佳实践
1. 采集
使用抗凝剂处理的血液样品（例如肝素????EDTA）。
术前禁食 12 小时可降低脂血症，这可能会干扰单核细胞的分离。
2. 分离单核细胞
密度梯度离心法：使用 Ficoll-Paque PLUS 等密度梯度介质分离单核细胞。
磁珠分选：使用针对 CD14 或 CD33 抗原的磁珠分选单核细胞。
3. 洗涤和离心
分离后，用 PBS 洗涤单核细胞 2-3 次。
每洗一次后，将细胞悬浮液用 300 x g 离心 5 分钟。
4. 细胞计数和活力评估
使用血细胞计数器或台盼蓝染色计数细胞。
使用 7-AAD 或 PI 等荧光染料评估细胞活力。
5. 冷冻保存
将单核细胞悬浮在含 10% DMSO 和 90% FBS 的冷冻介质中。
以 106-107 个细胞/毫升的浓度分装细胞悬浮液。
使用预先冷冻的冷冻管或冷冻瓶。
6. 冷冻过程
将冷冻管/瓶逐渐冷却至 -80°C，以防止细胞冻伤。
冷冻时间通常为 1-2 小时。
在液氮罐或机械冷冻机中将细胞长期储存。
7. 复苏
从液氮罐或机械冷冻机中取出冷冻管/瓶后，立即将细胞置于 37°C 的水浴中。
从水浴中取出后，立即缓慢加入预热的完全培养基，稀释冷冻介质。
将细胞用 300 x g 离心 5 分钟。
用新鲜培养基洗涤细胞并重新悬浮。
8. 储存条件
-80°C 液氮罐：
使用预先冷冻的冷冻管或冷冻瓶。
储存温度应保持在 -80°C 以下。
避免反复冻融循环。
机械冷冻机：
遵循制造商的说明进行设置。
储存温度应保持在 -80°C 以下。
避免反复冻融循环。
9. 监测和维护
定期监测储存条件，确保温度稳定。
定期评估细胞活力，确保细胞在储存期间保持活力。
保留储存记录，包括采集日期、分离方法、冷冻条件和复苏结果。
遵守法规
在处理和储存人血单核细胞时，遵循以下法规和伦理规范至关重要：
获得患者知情同意。
遵守生物安全条例。
定期接受培训和认证。
通过遵循以上最佳实践，可以确保人血单核细胞的有效提取、冷冻保存和复苏，以进行研究和治疗应用。
标签： 细胞储存业务介绍
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