DMSO 稀释与低温储存细胞的详细指南
DMSO 稀释与低温储存细胞的详细指南
细胞储存技术近年来备受关注，为保护和保存珍贵的细胞系提供了宝贵的手段。二甲基亚砜 (DMSO) 是一种广泛用于低温细胞储存的冷冻保护剂，可以帮助保护细胞免受冷冻损伤。以下是使用 DMSO 储存细胞的详细指南，涉及稀释、冻存和复苏步骤。
1. 材料准备
细胞悬液
DMSO（浓度为 100%）
无血清培养基
封管机
低温储存容器（如液氮罐）
2. 计算 DMSO 用量
为了确定添加到细胞悬液中的DMSO数量，需要计算DMSO的最终浓度。根据储存要求，DMSO 的最终浓度通常为 5-10%。
3. 稀释 DMSO
将 100% 的 DMSO 与无血清培养基按适当的比例稀释，以获得所需的最终浓度。例如，对于 5% 的 DMSO，将 5 mL 的 DMSO 与 95 mL 的无血清培养基混合。
4. 细胞悬液处理
将细胞收集并离心收集。小心地除去上清液，并用无血清培养基重悬细胞。
5. 加入 DMSO 稀释液
将稀释的 DMSO 溶液分批加入细胞悬液中，同时缓慢搅拌以确保均匀混合。每加入一批 DMSO，请在室温下孵育 3-5 分钟，以允许细胞适应 DMSO 的渗透作用。
6. 冻存
将含 DMSO 的细胞悬液转移到适当的冷冻管中。使用封管机密封冷冻管，确保没有气泡或泄漏。
7. 冷冻程序
将冷冻管置于 -80°C 的超低温冰箱中，以缓慢降低温度。这有助于防止冰晶形成并损坏细胞。
8. 低温储存
当细胞达到 -80°C 时，将其转移到液氮罐中进行长期储存。液氮的超低温环境 (-196°C) 可以无限期地保存细胞。
9. 复苏
当需要复苏细胞时，请从液氮罐中取出冷冻管。快速解冻冷冻管，然后用含血清的培养基稀释细胞。
10. 离心收集
将细胞悬液离心收集，除去 DMSO 溶液。用含血清的培养基重悬细胞，并转移到适当的培养器中培养。
后续护理
复苏后的细胞应按照正常的培养规程进行培养。仔细监测细胞活力和生长情况，以确保它们从冻存过程中成功复苏。
结论
使用 DMSO 储存细胞是一种可靠且有效的技术，可以保护细胞免受冷冻损伤并保存其功能。遵循本指南中的步骤，您可以确保细胞储存的成功，并为未来研究或应用提供宝贵的细胞资源。
标签： 细胞储存的技术
相关文章
发表评论