293T细胞储存的最佳实践
293T细胞储存的最佳实践
1. 储存温度
最佳储存温度范围：-70°C 至 -80°C
避免在冰箱或液氮罐中储存，因为这些方法可能会导致细胞活力下降或污染。
2. 细胞培养基
使用含有10%胎牛血清和1%抗生素-抗真菌剂的完整培养基。
避免使用含DMSO或其他冷冻保护剂的培养基，因为这些物质可能会影响细胞的增殖和分化能力。
3. 冷冻方法
在冷冻前，将细胞悬浮在新鲜的培养基中，浓度为100-500万个细胞/毫升。
使用预冷至-80°C 的冷冻管。
缓慢冷冻细胞，以防止细胞膜损伤。可以使用程序化的冷冻箱或手动冷冻方法（0.5-1°C/min）。
4. 冷冻保护剂
通常不需要冷冻保护剂，但对于长期储存（>6个月），可以使用10% DMSO或牛血清白蛋白。
冷冻保护剂必须在冷冻前添加到细胞悬浮液中。
5. 解冻方法
将冷冻管从-70°C 或 -80°C 取出，在37°C 水浴中快速解冻（1-2 分钟）。
解冻后，立即用预热的培养基稀释细胞。
轻柔离心（1200 rpm，5 分钟）以去除任何残留的冷冻保护剂。
将细胞重新悬浮在新鲜的培养基中。
6. 培养条件
细胞应在37°C、5% CO2的潮湿培养箱中培养。
使用合适的培养基，根据细胞类型的不同而有所不同。
定期监测细胞生长并更换培养基。
7. 细胞复苏
解冻后，细胞需要一个复苏期才能恢复其活力和增殖能力。
在培养箱中静置细胞24-48小时。
避免在此期间培养细胞或更换培养基。
8. 储存期限
在适当的储存条件下，293T细胞可以储存长达一年。
长期储存（>1年）需要使用冷冻保护剂和液氮保存。
9. 污染监测
定期监测细胞培养物是否有污染迹象，如颜色变化、形态改变或生长缓慢。
污染的细胞应丢弃并更换为新的细胞库。
10. 安全注意事项
处理冷冻细胞时应佩戴适当的个人防护装备（PPE）。
解冻和培养293T细胞时应遵守生物安全措施。
废弃的培养物应按照机构的废物处理指南进行处理。
标签： 细胞储存的技术
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