冻存细胞的液氮存储
冻存细胞的液氮存储
液氮存储是长期保存细胞生物样本的可靠方法。通过将细胞暴露于极低温，我们可以有效地暂停它们的代谢活动，使它们能够长时间保持存活能力。本文将分步指导您如何将细胞放入液氮中进行储存。
1. 准备细胞
收集细胞：从培养皿或组织样本中收集细胞。
离心并洗涤：将细胞离心并用无血清培养基洗涤，以去除残留的培养基。
计数和稀释：计数细胞数量并将其稀释至所需的浓度。细胞浓度因细胞类型和储存时间而异。
2. 制备冷冻液
DMSO 制备：二甲基亚砜 (DMSO) 是一种冷冻保护剂，可防止冷冻损伤。通常使用 10% DMSO 溶液，但最佳浓度因细胞类型而异。
FBS 制备：胎牛血清 (FBS) 也是一种冷冻保护剂，可提供营养支持。通常使用 10% FBS 溶液。
3. 混合细胞和冷冻液
缓慢添加冷冻液：将DMSO 溶液逐渐添加到细胞悬液中，不断搅拌以防止细胞损伤。
分级冷冻：将细胞悬液逐渐冷却至 -80°C，然后转移至液氮中进行长期储存。
4. 冷冻细胞
使用冷冻管：冷冻细胞时使用冷冻管，这些管专为极低温条件而设计。
缓慢转移至液氮：将冷冻管缓慢转移至液氮中，以避免形成冰晶。
储存时间：液氮储存的细胞样品可以储存数年甚至几十年，而无需明显的活力丧失。
5. 解冻细胞
当需要使用冻存细胞时，必须小心解冻以确保细胞活力。
快速解冻：将冷冻管快速转移至 37°C 水浴中。
稀释冷冻液：立即用新鲜培养基稀释细胞悬液，以去除冷冻液。
离心并洗涤：离心细胞并用新鲜培养基洗涤以去除残留的冷冻液。
6. 培养细胞
复苏后培养：将解冻的细胞培养在适当的培养基中。
监测细胞活力：追踪细胞活力并根据需要调整培养条件。
长期培养：冻存的细胞可以用于长期培养，以建立细胞系或进行研究。
结论
液氮存储是长期储存细胞生物样本的有效方法。遵循本文概述的步骤，您可以确保细胞的活力和可行性。了解冷冻细胞的最佳实践将使您能够对宝贵的生物材料进行可靠的管理和利用。
标签： 细胞储存的注意事项
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