人血单核细胞提取储存方法指南
人血单核细胞提取储存方法指南
人血单核细胞 (PBMC) 是免疫系统的重要组成部分，在细胞治疗和研究中具有广泛的应用。提取和储存 PBMC 至关重要，以保持其活力和功能性。以下指南将详细介绍人血单核细胞提取和储存的最佳实践。
1. 样品采集
从健康捐献者采集外周血。
使用真空采血器，将血液收集至含抗凝剂的收集管中。
常见抗凝剂包括肝素钠或 EDTA。
2. PBMC 分离
使用密度梯度离心法分离 PBMC。
将血液样本置于离心管中，并小心地分层到密度梯度介质上。
离心后，PBMC 将聚集在梯度界面处。
3. PBMC 洗涤
小心吸取界面处的 PBMC，并用洗涤缓冲液洗涤数次。
离心 PBMC 以去除洗涤缓冲液。
4. PBMC 计数和活力评估
使用血细胞计数仪计数 PBMC。
使用台盼蓝或其他方法评估 PBMC 的活力。
理想的 PBMC 活力通常在 85% 以上。
5. PBMC 冷冻
将 PBMC 重悬于含血清和二甲基亚砜 (DMSO) 的冷冻液中。
DMSO 是一种冷冻保护剂，有助于防止细胞冷冻损伤。
以 1-2 mL/冻存管的方式将 PBMC 分装至冷冻管中。
6. 冷冻方法
使用受控速率冷冻机将 PBMC 冻存管逐步降至 -80°C。
冷冻速率通常设置为 -1°C/min。
达到 -80°C 后，将冷冻管转移至液氮罐或超低温冰箱中长期储存。
7. PBMC 复苏
从储存中取出 PBMC 冷冻管并快速解冻。
缓慢添加培养基，一边解冻一边轻轻混合。
离心 PBMC 以去除 DMSO。
将 PBMC 重悬于培养基中，并置于 37°C、5% CO2 的培养箱中。
注意事项
保持无菌技术至关重要，以防止 PBMC 污染。
使用经过认证的试剂和耗材。
遵循标准操作规程 (SOP) 以确保结果的一致性。
储存条件应定期监测，以确保 PBMC 的完整性。
结论
遵循这些最佳实践可以确保人血单核细胞的成功提取和储存。妥善保存的 PBMC 可用于各种研究和临床应用，包括免疫细胞治疗、癌症研究和传染病诊断。
标签： 细胞储存的注意事项
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