脂肪干细胞储存:操作流程图
脂肪干细胞储存:操作流程图
前言
脂肪干细胞(ADSCs)因其获取容易、体外增殖能力强和多向分化潜能而备受关注。随着再生医学的快速发展,脂肪干细胞的储存和应用前景广阔。本文旨在通过流程图的形式,详细介绍脂肪干细胞储存的各个步骤,为相关专业人士提供参考。
1. 抽取脂肪组织
使用钝头抽脂针,在局部麻醉下从腹部或臀部等部位抽取脂肪组织。
抽取量根据干细胞储存目的和个人情况而定,通常为 50-150 毫升。
脂肪组织应尽可能新鲜,避免长时间暴露在空气中。
2. 脂肪组织处理
将抽取的脂肪组织用生理盐水冲洗干净,去除血液和其他杂质。
将脂肪组织机械或酶解断碎,释放出干细胞。
离心分离出含有脂肪干细胞的细胞悬液。
3. 细胞计数和活率检测
使用细胞计数板或流式细胞仪计数细胞数量。
进行细胞活率检测,如 MTT 或流式细胞术,以确定干细胞的活力。
4. 细胞培养
将细胞悬液接种到含有生长因子的培养基中。
保持适当的培养条件,如温度(37°C)、CO2(5%)和湿度。
定期换液和传代培养,以维持细胞生长。
5. 干细胞扩增
在培养条件下,干细胞将增殖扩大。
根据需要,可通过传代培养进一步扩增干细胞数量。
6. 制备储存液
对扩增的干细胞进行低温保存操作前的制备。
加入保护剂,如二甲基亚砜(DMSO)和人血清白蛋白(HSA),以保护细胞免受冷冻损伤。
7. 冷冻保存
将制备好的储存液分装到冷冻管中。
使用程序化的冷冻装置,逐步降低温度至 -196°C。
8. 质量检测
冷冻保存后,对干细胞进行质量检测,包括:
细胞活力检测
细胞数量和分化潜能检测
污染物检测(细菌、真菌)
9. 长期储存
合格的干细胞储存液在液氮罐中长期储存。
储存温度维持在 -196°C。
10. 解冻和回输
需要时,通过快速解冻装置解冻干细胞储存液。
进行细胞洗涤,去除保护剂。
回输干细胞至患者体内,用于治疗或研究目的。
结语
通过遵循上述操作流程图,可以安全有效地储存脂肪干细胞。这些储存的干细胞可作为宝贵的生物资源,用于再生医学、组织工程和药物发现等领域,为疾病治疗和健康管理提供新的可能性。
标签: 细胞储存的种类
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