细胞级 DMSO 储存条件:确保细胞活力和完整性的关键
细胞级 DMSO 储存条件:确保细胞活力和完整性的关键
低温储存对于维持细胞系和生物样本的活力和完整性至关重要。在低温储存过程中,二甲基亚砜 (DMSO) 是一种广泛使用的冷冻保护剂,它通过降低冰晶形成、改变细胞膜通透性和抑制代谢活动来保护细胞。以下是对细胞级 DMSO 储存条件的详细指导:
1. DMSO 浓度
DMSO 的最佳浓度因细胞类型和储存时间而异。一般来说,对于短期储存 (小于 1 个月),10-20% 的 DMSO 浓度就足够了。对于长期储存 (超过 1 个月),建议使用更高的 DMSO 浓度,例如 30-40%。
2. 储存温度
细胞级 DMSO 储存的理想温度为 -80℃。在此温度下,DMSO 能够发挥其冷冻保护作用,同时减少细胞损伤。避免频繁的温度波动,因为这会破坏细胞膜的完整性。
3. 储存容器
用于 DMSO 储存的容器应无菌、防漏且能承受低温。玻璃或聚乙烯管是常用的选择。确保容器的容量足以容纳细胞悬浮液和 DMSO,并留出一定的膨胀空间。
4. 冷冻速率
缓慢的冷冻速率至关重要,以防止冰晶形成损坏细胞。建议使用受控速率冷冻 (CRF) 设备,以以每分钟 1-2℃ 的速率逐渐降低温度。
5. 冷冻后的储存
冷冻后的细胞应立即转移到 -80℃ 的低温储存环境中。避免将细胞放置在冰箱或其他温度不稳定的区域,因为这会影响细胞的存活率。
6. 复苏后的储存
复苏后的细胞应立即使用或转移到新鲜培养基中。在复苏后储存细胞时,应遵守以下准则:
培养细胞:如果复苏后的细胞要立即用于培养,建议将其重新悬浮在新鲜培养基中,并将其置于 37℃、5% CO2 的培养箱中。
短期储存:如果复苏后的细胞要在短期内 (小于 1 周) 储存,可以将其悬浮在 10-20% DMSO 溶液中,并将其置于 -80℃。
长期储存:如果复苏后的细胞要长期储存 (超过 1 周),建议将其重新悬浮在 30-40% DMSO 溶液中,并将其置于 -80℃。
结论
细胞级 DMSO 储存条件对维持细胞活力和完整性至关重要。遵循这些指导方针,可以确保细胞在低温储存过程中得到适当的保护,并最大限度地减少冷冻损伤的风险。通过仔细选择 DMSO 浓度、存储温度、储存容器、冷冻速率和复苏后的储存条件,可以成功保存细胞系和生物样本用于研究、治疗和诊断目的。
标签: 细胞储存的重要性
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