外泌体尾静脉注射（外泌体尾静脉注射部位）

在这篇文章中，我们将重点讨论概念外泌体尾静脉注射和外泌体尾静脉注射部位，以帮助你在学习中更好地理解这些信息。

请教小鼠尾静脉注射问题

将小鼠放在50ml塑料离心管中固定，盖子中间钻个洞，尾巴从盖子中间拉出来。这样固定好，然后用酒精棉擦拭进针部位，可以使血管明显。有三根血管，中间的粗一点的是动脉，在动脉两旁的就是静脉了。进针时注意针和血管尽量平。这些只是一些技巧和个人经验，还是要靠实践多练习啊，祝早日练就静注绝招。

microRNA与血管通透性转移研究套路

Cancer-secreted miR-105 destroys vascular endothelial barriers to promote metastasis，if=27.407  Cancer Cell.  2014 Apr 14;25(4):501-15. doi: 10.1016/j.ccr.2014.03.00

microRNA可以被肿瘤细胞以外泌体的形式分泌出来，可以与周边的细胞进行crosstalk，进而起到远程调控的作用。可进行crosstalk的周边细胞种类包括：肿瘤微环境中纤维细胞、血管内皮细胞、同类肿瘤细胞等等。本文题目来看，是肿瘤分泌mir-105，作用于远处血管内皮细胞，调节血管内皮细胞屏障功能，而血管内皮屏障作用是肿瘤转移的一个步骤。两个基本内容mir105调节靶基因和肿瘤转移都是很基础的概念，为何能发表于cancer cell这种27分的杂志上呢？

首先利用研究exosome的方法，证实肿瘤细胞可以分泌exosome，利用检测方法检测exosome内mir-105表达量增高。exosome的研究方法包括：提取分离的方法、电镜观察法、exosome表面特定标志物western检测；microRNA的pcr检测方法。然后验证外泌体内miR-105的生物学功能，需要将肿瘤细胞与血管内皮细胞共培养，观察血管内皮细胞的连接方式变化；制作乳腺癌动物模型，观察肿瘤转移数目和取血管内皮细胞观察连接方式改变；检测乳腺癌患者血清内miR-105表达水平，观察转移评价指标（DFS）。最后对miR-105调节的靶基因进行验证，靶基因通过网站筛选、双荧光素酶实验验证，验证的靶基因具有调节血管内皮细胞连接方式的生物学功能；可以行靶基因的rescue实验，证实miR-105调节的充要条件。

首先观察转移性肿瘤细胞和非转移性肿瘤细胞分泌的exosome功能学差异。转移性乳腺癌细胞 MDA-MB-231、乳腺上皮细胞MCF-10A。超速离心法分离exosome，电镜下观察。因为主要证明其与血管内皮细胞的关系，所以通过荧光染色验证人类微血管内皮细胞（HMVECs）可以摄取肿瘤细胞分泌的exosome。荧光电镜和流式细胞仪两种方法检测证实。transwell检测接受exosome后的HMVECs迁移功能的变化。结果显示：转移性乳腺癌细胞MDA-MB-231分泌的exosome，可以被HMVECs摄取，进而影响内皮细胞的迁移功能。那么exosome中哪种成分才是调节迁移的主要分子呢？

通过Solexa深度测序的方法检测转移性exosome和非转移性exosome中microRNA的表达差异，发现基本相同，也列表显示出差异microRNA表。但是最终还是选择了mir-105，而且据说还靶向TJP1：tight junction protein 1紧密连接蛋白（OZ1）。没有交代选择miR-105的标准，一般选差异最明显，作者只是说：we further focused on mir-105。之后选取数十种乳腺癌细胞系，有的是原发肿瘤细胞系，有的是乳腺癌胸腔积液分离出来的转移性细胞系。分别检测的原发瘤细胞和转移细胞系细胞内和exosome中miR-105的表达水平，发现不论是细胞内还是exosome中，在转移性细胞系中miR-105都高表达，提示miR-105是乳腺癌转移特异相关。

进一步验证转移性乳腺癌细胞MDA-MB-231分泌的exosome可以将miR-105转入内皮细胞。分别将MDA-MB-231和MCF-10A分泌的exosome与HMVECs共培养，分别利用PKH67和Cy3标记exosome和miR-105，荧光显微镜下观察不同染色的定位情况。最终证实MDA-MB-231分泌的exosome中miR-105可以转移至HMVECs中，而不是exosome刺激HMVECs产生大量miR-105.

前期的exosome分泌、转移内容证实之后，下面就对miR-105影响内皮细胞的功能进行深入研究，或者说miR-105调节的靶基因和生物学功能深入研究。我会先做一些生物学功能实验：干扰内皮细胞miR-105表达水平，观察迁移侵袭的变化；如果HMVECs培养能形成微血管，甚至可以观察微血管内皮细胞间距的变化。然后荧光素酶验证靶基因。

首先双荧光素酶实验，验证miR-105可以靶向抑制TJP1基因，之后再在内皮细胞水平，转染miR-105之后，观察内皮细胞OZ-1 mRNA和蛋白的表达抑制。该实验干预内皮细胞内mir -105表达方法，不是使用siRNA或者miR-up等合成化合物，而是直接使用MDA-MB-231分泌的exosome，以及其他各种对照（MCF-10A），还涉及了rescue实验。总之证实了miR-105可以靶向抑制内皮细胞ZO-1蛋白的表达。以下内容为更专业的研究内皮细胞连接的方法。

1、培养基中内皮细胞连接成片，细胞间有细胞连接体。通过免疫染色ZO-1、OOccludin和E-caderin等细胞连接体，后免疫荧光电镜观察这些连接体的表达变化情况。

2、HMVECs细胞间通透性检测，permeablity assay：了解内皮屏障变化的直接效果，利用transwell小室，内皮细胞培养形成平铺一层内皮细胞膜，上层加罗丹明染料颗粒，后可以利用exosome调节内皮细胞的连接松紧程度，观察转入下层的罗丹明颗粒数量。甚至可以测量内皮细胞通透性阻抗electrical Resistance。除了观察罗丹明，还可以GFP标记MDA-MB-231癌细胞，观察癌细胞迁移数目的变化。

3、3D vascular sprout assay，3D培养内皮细胞，形成微血管树，然后给予exosome后，观察测量微血管树的变化，评估exosome对微血管的影响。

除了阐述miR-105的上述生物学功能，更重要的是证实ZO-1是介导miR-105生物学功能的充要条件，需要设计rescue实验，证明恢复ZO-1后，可以逆转miR-105的生物学功能改变。这部分内容不需要单独列出，在阐述mi-105的功能学变化过程中，多加入一组rescue组别即可，因为最终检测的biomarker都是一样的。

以下内容为动物模型水平，验证miR-105的生物学功能。

动物选取NOD/SCID/IL2Rγ null mice，用miR-105含量不同的exosome注射尾静脉处理干预，（exosome from MCF10A/vec (low-miR-105), MCF-10A/miR-105 (high-miR-105), or MDA-MB-231 cells (high-miR-105), or PBS as control）。 动物模型如何评估血管通透性和肿瘤转移性。

动物模型静脉注射染料罗丹明，观察肿瘤常见转移器官肺和脑组织中罗丹明渗透情况，如果肺或脑组织中罗丹明染料增多，提示血管通透性增加。

动物模型，评估肿瘤转移性，最常见的指标是转移瘤数目或大小。而本文则将移植瘤细胞首先利用荧光标记，然后在心内注射形成移植瘤，3周之后，提取肺和脑组织中荧光基因的表达量，表达量越高提示转移瘤负荷越大。

当然，肝肺组织病理切片，含量不同miR-105处理干预之后，免疫荧光染色观察OZ-1及occludin等细胞连接蛋白表达情况也可间接说明问题。（CD31染色提示血管结构，观察血管结构内OZ-1连接蛋白表达降低）。

之前都是利用mir-105含量不同的exosome做干预，观察血管通透性和转移瘤负荷。那么原发瘤中miR-105高表达后，是否能起到同样的作用呢？首先制作高表达miR-105的移植瘤模型，选取 an MCF-10A-derived tumorigenic line, MCFDCIS, which forms lesions similar to comedo ductal carcinoma in situ that spontaneously progress to invasive tumors为细胞模型，检测细胞miR-105表达含量、细胞内ZO-1表达水平，以及细胞的迁移和转移属性，证实模型成功。之后同上一部分，检测罗丹明染料评估血管通透性、检测荧光基因评估转移瘤负荷，以及病理切片ZO-1染色。结果证实原发瘤高表达miR-105，同样可以抑制肺脑组织ZO-1表达、增加血管内皮通透性、促进肿瘤转移。

为了证实，miR-105抑制剂能否逆转上述生物学功能变化，具有治疗意义。动物模型制备同上一部分，干预处理措施为：尾静脉注射anti-mir-105，检测指标同上。结果显示anti--miR-105具有治疗意义。

检测瘤组织和血清mir-105表达水平，是否具有一致性，以及miR-105与ZO-1具有负相关，回顾性分析转移瘤和未转移瘤患者血清miR-105表达水平，高表达者发生转移率更高。或者生存分析预后。

microRNA研究套路：细胞生物学功能、靶基因验证及介导功能的必要性、动物模型试验，最后在临床病例寻找证据，支持机制研究结论。这是基础研究的逻辑方式，首先在分子机制研究透彻了，然后找临床数据支持。而临床研究逻辑则相反：首先发现有临床现象和临床数据支持，然后在深入探讨细胞和动物水平有没有该现象，如果有的话，最后深入探讨分子基因互作机制。另外研究血管通透性相关转移，可以参考该文的实验方法。•

参考资料：

NOD/SCID/IL2γ null mouse：

 NOD（non-obese diabetes）遗传背景：自发I型糖尿病；其巨噬细胞对人源细胞吞噬作用弱；先天免疫系统，如补体系统和树突状细胞功能降低。

• Prkdcscid ：Prkdc（protein kinase DNA-activated catalytic）基因突变，小鼠的功能性T和B细胞缺失 ，淋巴细胞减少，表现为细胞免疫和体液免疫的重度联合免疫缺陷（severe combined immune deficiency, scid）。

• Il2rgnull： Interleukin-2受体的gamma链（IL-2R γc，又称CD132）位于小鼠X染色体上，是具有重要免疫功能的细胞因子Il2、Il-4、Il-7、Il-9、Il-15和I-21的共同受体亚基，该基因敲除后的小鼠机体免疫功能严重降低，尤其是NK细胞的活性几乎丧失。

B- NSG 小鼠 ：综合了NOD-SCID-IL2rg背景特征，具有重度免疫缺陷表型，无成熟T细胞、B细胞和功能性NK细胞，细胞因子信号传递能力缺失等。非常适合人造血干细胞及外周血单核细胞的移植和生长。

优点

• 迄今世界上免疫缺陷程度最高的工具小鼠；

• 与NOD-scid小鼠相比寿命更长，平均长达1.5年；

• 对人源细胞和组织几乎没有排斥反应；

• 少量细胞即可成瘤，依赖于细胞系或细胞类型；

雌激素低卵巢早衰怎么办？保护卵巢吃什么保健品？

卵巢是女性很重要的器官，卵巢功能正常，及时分泌雌激素，女性就会定期的来月经。如果卵巢早衰，导致雌激素分泌不足，女性的月经就会受到影响，出现月经不调，甚至是闭经等现象，这样的症状出现对女性的健康是很不利的。卵巢早衰了，就意味着衰老即将来临，要绝经了，这对于爱美的女人一说，是一件难以接受的事，因此女人一旦过了35岁以后，就要提前避免卵巢早衰现象发生，避免雌激素分泌不足。雌激素低卵巢早衰怎么办？保护卵巢吃什么保健品？

ENlivEN 21（解码二十一）21中人体稀缺营养对卵巢的修复来说非常重要！

雌激素低卵巢早衰怎么办？

首先女性朋友们一定要了解，雌激素主要是由于卵巢分泌的，如果卵巢功能失调，那么没有排卵，就可能形成女性雌激素分泌不足，这种情况下可能直接影响到女性的生育。但值得注意的是，并不是由于雌激素降低，引起的卵巢早衰。另外如果女性年龄偏大，或者长时间出现月经不调，也可能导致卵巢早衰的问题，引发雌激素偏低。正是这种情况，会造成女性生育困难。如果雌激素水平低，也可以从侧面表示女性的卵巢功能不好。

卵巢早衰不孕是女性不孕中较为常见的，在实验室和临床中，有更进一步的研究表明细胞在ENlivEN21细胞生长因子能激活卵巢等机体整体上处于休眠状态下的各种细胞群，以替代更新原有的因衰老或病理性等因素所造成组织细胞的衰退和老化，达到卵巢等组织器官功能的恢复，E NlivEN21增强卵巢组织器官的活性和原有的抗耐受力，使卵巢孕育的卵子成长健康、充盈，预防卵巢早衰引起的女性不孕不育，避免因身体营养匮乏导致的卵子粘连，引发的更年期的到来，（解码二十一）中类人胶原三肽，活体玻尿酸、类人弹性蛋白、雨生红球藻、等等修复因子在改善卵巢环境，促使卵子饱满，活力的同时，还可以增加心血管弹性、皮肤的张力、保护骨骼、保护神经系统、消除体内炎症等功效。

为什么很多女性卵巢早衰?

现代的女性很容易出现卵巢早衰的现象，因为过度的减肥，以及精神压力太大，就会损伤到我们的卵巢功能，出现早衰现象。女性出现卵巢早衰影响到雌激素的分泌，出现分泌量减少的现象，经血就会随着减少，还会提前衰老。为了避免出现这样的现象，要及时保养卵巢。

女性能焕发青春活力，卵巢的作用功不可没。由于卵巢功能老化会影响雌性激素分泌及性功能、肤质、肤色和女性三围体态，使脸部发黄，身体臃肿，阴道发干，提早进入黄脸婆时期，即衰老来临！

美 国科学家经过多年的研究，已成功地提取出胚源细胞分化因子 ，神经细胞生长因子、胚胎活体细胞表皮生长因子、分子氧细胞及免疫因子诱导生成剂等ENlivEN 21活性成份，用于逆转卵巢、人体衰老、提高免疫力、调节体内微循环、加快新陈代谢、激活人体休眠细胞和提高人体各种机能，使卵巢处于年轻的状态，是青春长驻的一剂营养素。

体内缺少雌激素，身体会有哪些提示?

夜间睡觉出汗，如果女性在35岁以后，老是出现夜间睡觉盗汗的现象，这不是正常的现象。卵巢早衰，女性会出现燥热和出汗现象，有部分人还会出现失眠现象;月经也会受到影响，出现月经量减少的现象，还会出现月经紊乱现象;有些患者还会出现肠胃不适，腹胀、饮食减少等，这些都是体内缺少雌激素会的表现，及时发现，调整好了，症状也会随着缓解不少。在日常的饮食中，我们要注意多吃一些有助于雌激素分泌的食物，保养卵巢。

雌激素低卵巢早衰怎么办？保护卵巢吃什么保健品？

卵巢保养误区要知晓

误区一

卵巢保养并不是在腹部涂抹保养卵巢的产品，进行腹部按摩。无论是从医学角度、从解剖学角度、从皮肤吸收学的角度都是行不通的，专家学者表示不会有任何效果。首先卵巢保养30岁就可以开始，最晚不过40岁，(WHI)实验的第一批数据公布,绝经后面临的一个重大的转折-激素治疗，事实上(WHI)，不支持绝经后再使用激素。口服植物来源的如异黄酮，月见草，黑升麻类药草和人参来缓解不适。ENlivEN21治疗皮肤衰老、乳房和生殖萎缩、血管舒缩症状，RSHWHO解决睡眠障碍、坏情绪很受欢迎的治疗， BCRWHO针对骨质酥松最终经得起检验，替代雌性激素的药物选择的是5-羟色胺抑制剂（SSRI），附件生殖炎症需要定期使用FOBOC。

HICIBI针对更年期发胖问题。

误区二

不要为了卵巢保养，而只关注于卵巢会如何，我们要思考保养卵巢是为了解决什么问题？延迟绝经？平衡激素？美容抗衰？生殖保养？睡眠情绪？心脏血管？骨胳质量？所以我们真正解决的是通过什么手段来，避免绝经后带给我们身体的种种不适，一定在正确面对：卵巢迟早会失去工作能力，绝经迟早都会到来，所以对症下药就可以轻松达到目的。

误区三

卵巢保养什么时开始？什么时候结束？

很多人在绝经快到来时后，救护卵巢，绝经后不再问津。这样真的是大错特错。

40岁前开始使用激素和ENlivEN21持续补充，获益的女性大于绝经到来才行动的女性， (WHI)并不支持绝经后才开始使用激素。由于卵巢早衰多发，所以30岁后就可以开始，最晚不要超过40岁。

女性体内雌激素减少，并不是只从饮食入手，还要注意自己的情绪和压力，以及睡眠健康等，这些事情都做好了，卵巢健康，雌激素分泌正常，预防衰老。雌激素低卵巢早衰怎么办？保护卵巢吃什么保健品？

大鼠动物实验——尾部静脉注射

一、大鼠固定

将大鼠固定好，将尾巴拉直，绷紧。在进行尾静脉注射时，可使用特殊的固定装置进行固定，如尾静脉注射架或粗的矿泉水瓶。

二、酒精棉球擦拭尾巴，使血管扩张

三、用左手的中指和无名指将大鼠尾巴固定

注射时左手扯尾，使尾巴紧贴中指，中指垫高处为进针部位，一般选择距尾尖1/4或1/3处进针，此处皮肤较薄，血管清晰，进针容易。进针时针头与桌面平行，针尖稍稍朝下一旦进入，须将针头稍稍上挑进入，针头沿血管进入，肉眼可关察到针头前进。如果针头在血管中前进，可明显地感觉到针行通畅，毫无阻力。若针头不在血管中，手感针行有阻力，有一种堵的感觉。进针时不要太深，针头入皮肤后马上把针头略往上，平行进针，针扎入时有落空感，推液时无阻力则说明成功了！如针头处出现皮丘则说明在皮下，推出重来。进针处最好在尾巴的1/3-1/2处，甚至可以更下一点。这样一次失败了还可以往上再来，不要马上在最高处打。

四、通过看有无回血来测试针是否在静脉内

五、缓慢推针注射

六、结束注射时，用酒精棉球挤压伤口十秒钟，以便其伤口愈合

七、注意

1. 建议先用蓝墨水练手，因为新手往往看不出打入的是皮下还是静脉。

2. 动物越小越好操作，小鼠比大鼠容易，幼年大鼠比成年大鼠容易；对于小鼠最好还是尾静脉注射，这样损伤最小；成年大鼠实在不行可以选股静脉注射，相对要容易一些。

3. 针进入后，切记手不可发抖，因为血管壁非常薄，容易扎穿。推药时，要缓推。若进针成功，推药顺畅，无阻力；若推药时感觉有阻力，说明针头不在血管中，须及时拔出，重新进针。一般选用4号或4号半针头。最好用打疫苗的2毫升一次性注射器。

关于外泌体尾静脉注射和外泌体尾静脉注射部位的介绍到此就结束了，不知道你从中找到你需要的信息了吗 ？如果你还想了解更多这方面的信息，记得收藏关注本站。