脐带间充质干细胞的分离培养酶消化（脐带间充质干细胞的提取）

在这篇文章中，我们将告诉你如何更好地理解脐带间充质干细胞的分离培养酶消化和脐带间充质干细胞的提取，并获得更多帮助。

孩子的脐带没有用？这些你需要了解

四川新闻网成都3月1日讯 春节期间，CCTV6引进了日本人气动画《工作细胞》。在这部动画里，一群细胞变身为性格迥异的人物：迷糊又元气的红血球、奶声奶气的血小板、人狠话不多的白血球、肌肉猛男杀手T细胞、战斗力爆表的大姐姐巨噬细胞......看完这部动画后，也许你会更加善待你的身体：毕竟身体每次亮红灯，身体内都有千万个细胞为你奔走操劳呢。

脐带间充质干细胞

其实，还有一种细胞，也在用一种特殊的形式保护我们，就是“脐带间充质干细胞”。在宝宝出生后，一部分的脐带被丢弃，一部分脐带有幸被保存了下来。

保存脐带，并不像存钱那么简单。在经过15天左右严格的培养、制备时间后，“脐带”才能从一条“带”，变成数以万计的干细胞。随后，盖章合格的脐带干细胞就会被工作人员放入-196 的液氮中保存起来。

从此，在天寒地冻的冻存罐中进入长久的待机模式。

从“废物”到“小宝贝”

为什么家长们要把脐带储存起来呢？这还得从上个世纪90年代说起。1991年，北爱尔兰科学家们发现：在初生婴儿的脐带中，含有丰富的脐带间充质干细胞。这种干细胞具有促进造血、免疫调节和组织修复等作用，在医学具有广泛的应用前景。这才扭转了人们对脐带从“废物”到“宝贝”的印象。对于普通家庭来说，留下脐带主要具有以下几大优点：

脐带在新生儿断脐后进行采集，对产妇和胎儿无任何影响；脐带间充质干细胞使用无需配型，全家人都能用。对于移植来说，脐带间充质干细胞和脐带血造血干细胞共同移植可以达到1+1 2的效果。一次储存，多次使用，在未来的治疗中更具优势。

未来医学的新支柱

中国的干细胞治疗研究虽然起步晚，但咱进步快，迅速攀升至世界前沿水平。截止2020年底，根据国家卫生 健康 委员会医学研究登记备案信息系统统计，目前我国干细胞临床研究备案机构增长到111家，备案项目达100个。而在这100个项目中，使用脐带间充质干细胞的居然就达到了32个。

比如：

上海市东方医院在用脐带治疗心衰

中南大学湘雅医院在用脐带治疗骨关节炎

十堰太和医院在用脐带治疗小儿脑瘫

中山大学附属第三医院在用脐带治疗脊髓损伤

南京大学附属鼓楼医院在用脐带治疗卵巢功能不全

武汉大学中南医院在用脐带治疗肺炎

......

大量的干细胞治疗案例，为医生提供了大量的临床依据，也证明了干细胞治疗未来将会成为医学的新支柱。

不开刀不吃药的治疗

那么很多人又会好奇了：这脐带干细胞到底如何进入我们的身体的呢？答案就是：静脉输注或者靶向注射。不开刀，不吃药！干细胞输注普遍以生理盐水为载体注入体内，这种新型治疗方式，简直是怕疼怕苦的人的福音。

另一方面，谈及储存，很多人都会下意识以为是天价。其实不然，以四川省干细胞库为例：储存脐带每年费用为800元，一天只需2块1，一次储存可供所有家庭成员多次使用。所以，专家们会建议大家：在条件允许的情况下，家长们应该尽力储存宝宝的脐带，作为全家人的干细胞资源储备。

如何选择储存机构？

你不理干细胞，干细胞也不理你。只有提前把干细胞储存下来，在需要的时候才能迅速派上用场。如何选择储存机构，这又是一门学问！

同样以四川省干细胞库为例：

由四川省发展和改革委员会备案批准成立，国际、国内认证：全球先进输血和细胞治疗联盟（AABB）、国际细胞治疗协会（ISCT）、国际三大管理体系认证（ISO9001、ISO14001和ISO45001）。精英团队：研发团队由中国科学院院士、四川省“百人计划”专家领衔。

简单来说，就是看资质，看规模，看专家水平。

随着越来越多的报道和成功案例出现，干细胞治疗未来将会为越来越的人重新带来 健康 和幸福。对于脐带干细胞来说，既希望能早日派上用场，又希望永远没有和宝宝及家人见面的一天。

但想让你知道，需要的时候，脐带随时都在。（四川省干细胞库 林家欢）

求助人脐带间充质干细胞提取方法

方法:

无菌条件下截取流产胎儿双侧四肢骨,PBS冲洗髓腔,离心去脂肪及上清液,L-DMEM重悬细胞,沿管壁缓慢滴加至底部有等量1.073 g/mL Percoll分离液的离心管中,离心后吸取中间界面白膜层,加入含体积分数为10%的胎牛血清、青霉素钠、链霉素的L-DMEM完全培养基,接种后置于37℃、体积分数为5%的CO2饱和湿度孵箱内培养.48 h后换液,去除未贴壁细胞,以后每2d换液一次.待细胞达到80%～90%融合时,胰酶-EDTA消化传代.

主要观察指标:

倒置显微镜及Giemsa染色观察细胞形态;透射电镜观察细胞超微结构;流式细胞技术检测其表面标记物;碱性磷酸酶染色检测成骨分化能力;Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色检测成软骨分化能力.结果:原代及传代培养的胎儿骨髓间充质干细胞呈梭形外观,具有较强的增殖能力.胞体较小,细胞核/浆比例大,胞核呈圆形或椭圆形,胞浆少,染色质较疏松,表现出早期细胞的特点,传至第20代细胞超微结构仍无明显改变.细胞表面抗原CD29,CD44,CD105呈阳性表达,CD34,CD45呈阴性表达.骨髓间充质干细胞诱导分化后,碱性磷酸酶染色及Ⅱ型胶原均呈阳性.

结论:

利用密度梯度离心+贴壁筛选法可成功分离培养胎儿骨髓间充质干细胞,所获细胞能够向成骨细胞及软骨细胞分化,该方法为体外培养扩增胎儿骨髓间充质干细胞的简单、稳定、高效的手段.

华西医生是怎么用“脐带”治病的？孕妈最好提前了解

每当提到干细胞，普通人总是忍不住发出灵魂三问：

干细胞是啥？

从哪儿来？

真的有医院用吗？

特别是已经怀孕的妈妈，更是天天纠结：“一辈子只有一次机会，我们家到底存不存啊？”

利用干细胞研究治疗，是全世界科学家努力的方向。截至2021年，目前在我国通过国家备案的医疗机构已经达到了123家。

全国闻名的 四川大学华西医院 ，就是其中之一。

网上纷杂的信息难以辨别，华西医生说的，总该相信几分了吧？

干细胞治疗脊髓损伤

8月12日，四川日报发布了一篇《一名全身瘫痪患者在华西医院接受“脐带间充质干细胞”治疗 》报道。

就在今年6月，一名中年男士因玩滑翔伞高空坠落，脊髓受伤导致全身瘫痪。

在我们身体里，有一段长约42 45厘米左右的脊髓。一旦脊髓受损，可能就会导致损伤节段以下的 肢体瘫痪 、 大小便失禁 及 性功能障碍 。

但不幸中的万幸，他恰好遇上了华西医院的干细胞治疗。

此次研究治疗，使用的是“ 脐带间充质干细胞 ”。

按照计划，脊柱外科主任刘浩会给患者注射4次干细胞，隔一个月注射两次。

在此之前，中山大学附属第三医院也治疗过一名长期坐轮椅的截瘫患者。经过3次干细胞注射治疗后，患者奇迹般站起来了！

“这标志着困扰了医学界上百年的脊髓损伤的治疗找到了方向。”

华西医院能否再次创造奇迹，科学家们都充满了期待。

干细胞治疗肝损伤

今年3月，由四川大学华西医院主持的“脐带间充质干细胞治疗急性毒蕈中毒性肝损伤的临床研究”提交国家卫健委药监局申请备案。

毒蕈是啥？换个说法大家肯定知道。

“红伞伞”、“白杆杆”。

看多了“吃蘑菇看小人跳舞”的段子，许多人以为蘑菇中毒没什么大事。

事实上，全世界已知的毒蕈约百余种，在中国已发现约80余种，极毒蘑菇10余种。中毒性肝炎型毒蕈中毒死亡率可高达50% 90%。

同时，因为“肝是我们人体内 最重要的解毒器官 ，极易遭受各类毒物的损伤”，毒蕈中毒伴有严重肝功能损害，危及患者生命。

四川大学华西医院临床病理研究所研究员、博士生导师石毓君的团队，近十年来，一直致力于研究 脐带间充质干细胞应用于急性肝损伤 治疗。目前取得的阶段性成果，证实间充质干细胞在治疗毒蕈中毒性肝损伤中的安全性和有效性。

不开刀、不吃药

新型治疗方式

想到手术台，我们大多都觉得手脚发软。

干细胞治疗方式就“温柔”了许多。只需要将干细胞通过针管、输液袋注入至患者体内，然后静静等待干细胞发挥作用。

这种新型的治疗方式，也得到了华西医院脊柱外科主任刘浩的肯定：“如果这种方法成熟了，今后可以很好地推广到基层医院，因为对医生的技术要求不会太高。”

都说现在的年轻人人间清醒，什么最重要？ 健康 绝对排第一位。

据统计，我国的干细胞市场规模接近1500亿元。广泛的干细胞研究不断推动着干细胞发展，应用前景更加广泛。

在全球最大的临床试验数据库ClinicalTrial中注册间充质干细胞临床试验研究，共有1295项。涵盖了心脏疾病、骨关节疾病、神经系统疾病、生殖疾病、肺脏疾病、肝脏疾病、皮肤疾病、免疫调节、糖尿病等多方面疾病，拥有治疗100+种疾病潜力。

尤其是来源于宝宝脐带的脐带间充质干细胞，是干细胞界是当之无愧的“明星”。在宝宝断脐后进行采集，安全无害地完成“变废为宝”的转变。

越来越多的父母认识到了干细胞的重要性，在孩子出生时，选择将这份资源储存在四川省干细胞库。

四川省干细胞库由四川省发展和改革委员会备案批准，是集干细胞资源储存、科研开发、产业化应用于一体的综合性干细胞资源库，基本实现干细胞储存、研究、应用领域的全产业链覆盖。技术研发通过了ISO9001、ISO14001和ISO45001三标管理体系认证。

如果你正好是一名准爸爸、准妈妈，想要了解干细胞的神奇之处，欢迎您预约参观。

文 | 新生命

图 | 网络

什么是间质干细胞?什么是脐带血干细胞?与胚胎干细胞有什么不同

间充质干细胞的治疗潜力取决于细胞来源，与成年组织相比，围产期来源的间充质干细胞具有非侵入性和无创伤性，且无道德、伦理问题，在细胞增殖、免疫抑制方面有明显优势。人脐带间充质干细胞的成脂能力最强，人胎盘间充质干细胞的成骨能力最强。脐带间充质干细胞可能在创面修复等方面强于壁蜕膜间充质干细胞，壁蜕膜间充质干细胞可能在修复血管损伤类疾病方面更具有优势。胎盘壁蜕膜离母体最近，因此壁蜕膜间充质干细胞与母体相容性最好，妈妈专属。脐带间充质干细胞更原始，有更强的增殖能力，免疫原性低的独特性质，除了宝宝本人外，全家人均可使用。

什么是间充质干细胞？

近年来， 间充质干细胞 越来越广泛地应用于疾病治疗当中，成为医疗界中的 一颗新星 ，给大量被疾病困扰的人们减轻了痛苦。2021年，间充质干细胞的临床研究取得了许多新的突破，相继发表的 临床研究成果 给生命带来了新的曙光！

2021间充质干细胞临床成果回顾

（1）间充质干细胞治疗更好地 改善 骨坏死

（2）间充质干细胞治疗 骨关节炎

（3）间充质干细胞帮助10名 脊髓损伤 患者改善病症

（4）围产组织间充质干细胞能改善 脑瘫儿童 的症状

（5）间充质干细胞治疗 缺血性脑卒中 安全有效

（6）间充质干细胞治疗 重症肝病 多中心临床研究已启动

（7）脐带间充质干细胞治疗 二型糖尿病 取得重要进展

（8）日本批准间充质干细胞疗法用于治疗 克罗恩病 患者的复杂肛瘘

（9）FDA批准围产组织间充质干细胞治疗 新冠肺炎III期临床

（10）我国间充质干细胞治疗脑瘫，得到满意结果

（11）日本即将启动间充质干细胞治疗脑卒中的临床试验

（12）20名 自闭症患儿 接受间充质干细胞治疗，病情得到改善

（13）间充质干细胞帮助患者重新回到工作岗位

（14）间充质干细胞对 慢性膝关节疼痛 有显著疗效

（15）脐带间充质干细胞帮助 艾滋病 患者重建免疫力

（16）逆转 肝硬化 ！间充质干细胞联合造血干细胞治疗取得显著成效

（17）基因修饰间充质干细胞联合3D微载体，治疗2型糖尿病

（18）间充质干细胞使新冠肺炎患者存活率提高4.5倍

（19）间充质干细胞治疗肝硬化长期有效，改善肝功能和提高生存率

（20）我国首个《间充质干细胞治疗新型冠状病毒肺炎专家共识》

潜力巨大，优势明显

间充质干细胞是干细胞家族的一个重要成员，源于发育早期的中胚层和外胚层。间充质干细胞是一种具有 自我复制能力和多向分化潜能 的成体干细胞，属于非终末分化细胞，它既有间质细胞特性，又有内皮细胞及上皮细胞的特征。

间充质干细胞在体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、软骨、骨、肌肉、肌腱、神经、肝、心肌、胰岛β细胞和内皮等多种组织细胞，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能。不论是自体还是同种异体的间充质干细胞，一般都不会引起宿主的免疫反应。具有 巨大的临床应用潜力 ，可用于多种急性和退行性疾病的治疗。

（1）强大的增殖能力和多向分化潜能： 在适宜的体内或体外环境下能快速自我更新和复制，并能被诱导分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌细胞、神经细胞、肝细胞、内皮细胞、基质细胞等多种细胞。

（2）免疫调节功能： 通过细胞间的相互作用及产生细胞因子干扰树突状细胞功能并抑制T细胞的增殖及其免疫反应，从而发挥免疫重建的功能。

（3）来源多样、取材方便，易于分离、培养、扩增和纯化， 多次传代扩增后仍具有干细胞特性。

治疗产品全球概况

目前，间充质干细胞临床试验已经 超过1300项 ，用于治疗各种疾病。最常见的是，间充质干细胞作为一种细胞治疗制剂，正在进行如火如荼的临床试验。通常，间充质干细胞移植后会很快消失，可能是通过旁分泌发挥功能。

目前来看，间充质干细胞已成为全球开展临床研究项目数最多的细胞， 全球也有近十款间充质干细胞药物上市 ，诸如用于治疗急性移植物抗宿主病的Temcell 产品，用于治疗克罗恩病的 Alofisel 产品等。

加拿大和新西兰的监管机构已批准Prochymal异基因骨髓来源的间充质干细胞，用于治疗儿童急性GVHD。

韩国已经批准了两种MSCs产品：一种是一种以脐带血来源的间充质干细胞为基础的治疗退行性关节炎的产品，另一种是自体脂肪组织衍生的间充质干细胞产品，用于治疗克罗恩病患者的肛瘘。

AloFisel（TiGenix和Takeda，欧盟批准）、Temcell（JCR药品，日本批准）和Cellgram-AMI（FCB-pharmicell，韩国批准）是其他几个获批的间充质干细胞产品。

印度批准了用于商业用途的同种异体细胞治疗产品Stempeucel®，也是全球第一个被批准用于治疗严重肢体缺血的间充质干细胞产品。 

间充质干细胞 来源广泛，获得容易，伦理风险较低，可以实现体外规模化扩增 ，未来可应用到广泛的商业化临床治疗。在药物递送技术或基因编辑技术的加持下，间充质干细胞应用范围得到进一步拓宽。

科学家们通过基因工程技术进行了改造，大大拓宽了间充质干细胞的临床用途。

在组织修复中 ，经过改造的干细胞可通过表达神经营养因子、抗炎性细胞因子或血管生成因子，从而促进组织的愈合和恢复。

在遗传性病治疗中 ，通常是将改造过的干细胞用于作为长期的酶替代物，以纠正或消除致病突变的影响。

科学家们通过细胞工程技术进行了改造，还大大扩宽了干细胞的另一种治疗用途——药物递送，便是间充质干细胞技术未来发展的一个重要方向。

最有前景的方法，当属通过干细胞装载前药转化酶、凋亡诱导剂或溶瘤病毒来治疗肿瘤。间充质干细胞已被应用于递送抗肿瘤药物。 第一，免疫原性低，第二，具有肿瘤趋向性 ，这些间充质干细胞会根据肿瘤分泌的化学引诱剂、血管生成因子或炎症信号向肿瘤迁移。

临床应用举例

目前，间充质干细胞已经被广泛应用到临床研究的多种场景当中，比如组织器官的修复、基因治疗的载体等，例如：

对于骨软骨修复 ，目前正在研究间充质干细胞用于治疗多种骨骼疾病。间充质干细胞的成骨分化能力已被用于治疗有缺陷的骨折愈合，无论是单独使用还是与支架结合来修复大的骨缺损，都具有一定的效果。此外，间充质干细胞也被用于软骨修复。在一项研究中，自体间充质干细胞经体外扩增后嵌入胶原凝胶中，然后重新植入骨关节炎患者的关节软骨缺损区域。结果显示，与对照组相比，实验组的透明软骨样组织的形成得到了改善。

对于胰腺的修复 ，目前已证明间充质干细胞具有分化为 β-胰岛细胞的潜力，在体外大鼠骨髓间充质干细胞可分化为功能性胰岛样细胞[4]。这一发现代表了间充质干细胞治疗一系列胰腺相关疾病的潜在用途，包括：糖尿病；胰腺癌；囊性纤维化引起的胰腺损伤；以及先天性胰腺畸形等。

给医学带来更多选择

近年来，间充质干细胞越来越多地被视为一种新的治疗方法和再生医学中是强力候选者。间充质干细胞已被证明具有 诱导血运重建 、 保护组织免受应激诱导 的细胞凋亡，并有 对炎症反应产生积极影响 的能力。此外，间充质干细胞衍生的外泌体也是一种很有前景的无细胞方法，可以发挥与间充质干细胞相当的治疗效果。

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