制备单克隆抗体反复注射抗原的原因（制备单克隆抗体用什么细胞）

我们将包括所有关于制备单克隆抗体反复注射抗原的原因和制备单克隆抗体用什么细胞的知识，以帮助你更好地理解两者之间的差异和联系。

备制单克隆抗体的原理是？

抗体主要由机体的B淋巴细胞合成，每个B淋巴细胞有合成一种抗体的遗传基因。当机体受抗原刺激时，抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞。被激活的B细胞分裂增殖形成该细胞的子孙，即克隆。

选出一个合成一种抗体的细胞进行培养，就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群，即单克隆。单克隆细胞所合成的抗体即为单克隆抗体。

单克隆抗体制备的基本原理与过程？有什么意义

单克隆抗体制备的原理：

B淋巴细胞在抗原的刺激下,能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力、B细胞的这种能力和量是有限的,不可能持续分化增殖下去，因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的、将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化，这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力，又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力，将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体.这种技术即称为单克隆抗体技术。

单克隆抗体制备的过程：

免疫动物

免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。

细胞融合

采用二氧化碳气体处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。

选择性培养

选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中，未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，不能利用补救途径合成DNA而死亡。 未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。 只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性，因此能在HAT培养基中存活和增殖。

杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化

在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻存。

单克隆抗体的大量制备

单克隆抗体的大量制备主要采用动物体内诱生法和体外培养法。

(1)体内诱生法 取BALB/c小鼠，首先腹腔注射0.5ml液体石蜡或降植烷进行预处理。1-2周后，腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖，并产生和分泌单克隆抗体。约1-2周，可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可获得大量单克隆抗体。

(2)体外培养法 将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过程中，杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体，收集培养上清液，离心去除细胞及其碎片，即可获得所需要的单克隆抗体。但这种方法产生的抗体量有限。各种新型培养技术和装置不断出现，大大提高了抗体的生产量。

单克隆抗体制备的意义：

用于以下各种生命科学实验并具有医用价值

（1）沉淀反应：Precipitation reaction

（2）凝集实验：haemaglutination

（3）放射免疫学方法检测免疫复合物

（4） 流式细胞仪：用于细胞的分型和细胞分离.

（5）ELISA 等免疫学检测

（6）BIAcore biosensor:检测Ab-Ag或与蛋白的亲和力 .

（7）免疫印记（western blotting)

（8） 免疫沉淀：

（9） 亲和层析：分离蛋白质

（10） 磁珠分离细胞

（11）临床疾病的诊断和治疗；

在制备单克隆抗体时对小鼠多次注射特定抗原的目的是什么

（1）细胞培养技术和细胞融合技术是单克隆抗体技术的基础．给小鼠注射特定抗原的目的是诱导产生能产生抗体的浆（B）细胞．

（2）单克隆抗体与常规的血清抗体相比，其最大的优越性是特异性强，灵敏度高，可以体外大量制备．

（3）图中培养基属于选择培养基，用来筛选杂交瘤细胞．

（4）杂交瘤细胞常用的培养方法是体外用培养液培养或注入小鼠腹腔中进行体内培养．

（5）检测鉴定是否产生了所需抗体，可采用抗原抗体分子杂交技术．

故答案为：

（1）动物细胞培养和融合 诱导产生能产生抗体的浆（B）细胞

（2）特异性强，灵敏度高

（3）选择 杂交瘤

（4）注入小鼠腹腔内培养

（5）抗原--抗体杂交（反应）

检验技师考点：单克隆抗体的制备原理

检验技师考点：单克隆抗体的制备原理

单克隆抗体(MAb)与抗血清(又称多克隆抗体，PAb)最主要的区别是MAb为单一种B细胞克隆所产生的一种均一的免疫球蛋白分子。所以MAb是B细胞克隆的标志，是一种独特型的抗体，它的特异性是针对一个抗原决定簇的。制备单克隆抗体不能用化学分离的方法从多克隆抗体中去分离纯化得到它，而是用分离产生抗体的B细胞克隆的方法得到它。为了使B细胞克隆能在体外人工培养下长期存活并产生完全均一的MAb，G.KÖ;hler合Milstein于1975年创立了杂交瘤方法。所以制备单克隆抗体的技术又称杂交瘤技术(hybredoma technique)。

基本原理

其原理是：B淋巴细胞能够产生抗体， 但在体外不能进行无限分裂; 而瘤细胞虽然可以在体外进行无限传代， 但不能产生抗体。将这两种细胞融合后得到的.杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的特性。

步骤：

一.提取合成专一性抗体的单个B淋巴细胞，但这种B淋巴细胞不能在体外生长。

二.应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合，得到杂交瘤细胞。这种细胞既具有B淋巴细胞合成专一抗体的特性，也有骨髓瘤细胞能在体外培养增殖永存的特性

三.对杂交瘤细胞进行细胞培养，选出所需要的细胞群，体外或体内培养，从培养液或动物腹水中提取单克隆抗体

单克隆抗体的提纯

一般常用金黄色葡萄球菌蛋白A-琼脂糖4B亲和层析法。

单克隆抗体的保存 由腹水中获得的抗体,经离心去除细胞成分，再经冷冻超速离心,取上清液加0.1%NaN3，少量分装，冷冻于-70℃可保存几年。 但应避免反复冻融,否则抗体失活，特别是IgM抗体。提纯的单克隆抗体,冷冻干燥保存于2～8℃，取出时溶解后，保存于2～8℃，至少一个月内可保持稳定。腹水抗体也可冷冻干燥低温(4℃)保存两年，融化后放置4℃下保存一个月。短期使用的腹水抗体，4℃3～4 个月仍保持稳定, 培养上清加0.1%NaN3，贮于-20℃，两年不失活性。

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传统制备抗体的方法是向动物体内反复注射某种抗原

（1）传统制备抗体的方法是向动物体内反复注射某种抗原，使B细胞和记忆细胞增殖、分化为浆细胞，浆细胞产生抗体，然后从动物中分离所需抗体．

（2）诱导动物细胞融合，特有的方法是用灭活的病毒做诱导剂，杂交瘤细胞的特点是即可大量增殖，又能产生特异性抗体．

（3）将得到的能分泌专一抗体的杂交瘤细胞注入到小鼠腹腔中，一段时间后可以从小鼠腹水中提取大量的鼠源性单克隆抗体．

（4）某病人连续隔周注射某种鼠源性单抗治疗一种病毒感染性疾病，开始病毒量明显减少，一段时间后，这种病毒量又开始上升，上升原因可能是病毒发生变异，也可能是人体产生抗鼠源抗体的抗体，中和了鼠源抗体，使鼠源抗体不能发挥抗病毒的作用．

（5）改造鼠源性抗体分子的结构需要用蛋白质工程技术，改造后的鼠源性抗体分子可以降低鼠源性抗体的人体反应．

故答案为：

（1）B细胞和记忆细胞 血清

（2）灭活病毒 即可大量增殖，又能产生特异性抗体

（3）腹水

（4）变异 抗体

（5）蛋白质工程

用抗原免疫动物制备抗血清时，为什么要对动物多次免疫接种

用抗原免疫动物制备抗血清时，为什么要对动物多次免疫接种

用抗原免疫动物制备抗血清时，为什么要对动物多次免疫接种

抗原注射进入动物体内后，因为不是一个单独的分子，会随血液回圈输送到各处，也就会接触不同的免疫细胞。有些还会被抗原提呈细胞再加工。所以最后的结果是很多个免疫细胞都会接触到。一个抗原分子也有很多抗原表位。每个表位理论上都有能力启用一个B细胞转化为浆细胞。所以体内最后针对该抗原的必定是多克隆

由于动物个体差异的存在,同一抗原免疫同一种系不同个体的动物,产生的抗体的效价有很大的差异.与动物的年龄和营养状况密切相关.免疫用的动物最好选择适龄的健康雄性动物,雌性动物特别是妊娠动物用于制备免疫抗体则非常不合适,有时甚至不产生抗体.

先饲养观察7天其实就是等于隔离检疫,观察一下兔子的身体状况和是否带有其他传染病,淘汰体质多病的个体,防止在免疫过程中死亡或免疫应答不灵敏而不产生抗体.

抗原免疫动物制备血清，常用动物有哪些

以抗原免疫动物获得抗血清是制备抗体的经典方法。为了提高免疫效果，在免疫的时候，常辅以佐剂以改变抗原的物理状态而延长其在体内的滞留时间，使抗原缓慢释放，同时非特异性的促进区域性吞噬细胞反应来增强动物的免疫效果。佐剂的型别较多，目前常用的还是福氏佐剂(Freund’sAdjuvant，FA)。它是一种对大多数抗原都有效的佐剂，但由于它的一些副作用限制了它在实验动物上的使用。因此，福氏佐剂只能在确实需要的情况下(如使用的抗原为小分子可溶性抗原或半抗原)和强佐剂活性时使用。FA是用矿物油(石蜡油)、乳化剂(羊毛脂)和灭活的分枝杆菌(结核分枝杆菌或卡介苗)组成的油包水乳化佐剂。这三种成分俱全的佐剂称为福氏完全佐剂(Freund’sComD】eleAdjuvant，FCA)，不含分枝杆菌的佐剂为福氏不完全佐剂(Freund’sInconrpleteAdjuvant，FIA)。石蜡油因不能代谢而存留在注射的部位，这就阻碍了抗原降解或快速反应，起到抗原储存作用，使抗原缓慢持续的释放，不断 *** 机体的免疫系统而产生免疫反应。乳化剂对于水溶性抗原与油稳定地乳化是必要的。分枝杆菌具有很强的免疫 *** 作用，可以非特异性的启用免疫系统。FCA用于基础注射，而FIA用于辅助注射以避免分枝杆菌蛋白引起的过敏反应。FA皮下注射或肌内注射可导致多种副作用，例如肉芽肿和无菌性脓肿的形成。腹腔注射引起腹膜炎。由于这些严重的副作用，FA不允许用于人或动物的疫苗接种免疫。传统的免疫方案，包括使用福氏佐剂和某些免疫程式，已不再被一些国家的权威机构所接受。据调查，在荷兰有64％的研究人员使用FCA，而且，用于多克隆抗体的生产方案差异很大。因此，在1993年，荷兰释出了利用动物免疫技术制备多克隆抗体的生产指南。主要规定了加强免疫注射的次数、免疫途径、注射量和佐剂的使用，并且支援使用替代佐剂来替换FCA。由于FCA给实验动物带来的严重的副反应，对它的使用提出了特别的限制，规定了(小鼠和大鼠sc：0．1nd；i．d：家兔0．o5rI1l；i．P：小鼠0．2nd)推荐使用量和注射途径。

制备免疫血清时为什么要多次免疫

单次免疫产生抗体浓度低，多次免疫抗体浓度高且持续时间长，同时产生的抗体亲和力高

为什么用抗原免疫动物制备的免疫血清一定要含有多克隆抗体

抗原注射进入动物体内后，因为不是一个单独的分子，会随血液回圈输送到各处，也就会接触不同的免疫细胞。有些还会被抗原提呈细胞再加工。所以最后的结果是很多个免疫细胞都会接触到。一个抗原分子也有很多抗原表位。每个表位理论上都有能力启用一个B细胞转化为浆细胞。所以体内最后针对该抗原的必定是多克隆

制备抗血清时,为何要多次接种?

免疫强化，增强免疫效果。单次免疫效果往往较差。通过多次免疫，从而保持抗原能在较长时间对免疫系统的 *** 。

免疫动物前为什么要乳化抗原在将抗原注射到动物体内

直接注射蛋白质抗原的免疫效果差。佐剂可以“唤醒”免疫系统，这样免疫系统对抗原的反应就会比较强烈。

制备抗血清是常用的免疫原有哪些

不是，我们平常接种的乙肝疫苗等，都是活疫苗，这叫作人工主动免疫。它本质是向人体注射无感染力的乙肝病毒使人产生相应的抗体。但如果注射抗体、血清、淋巴因子等，都是人工被动免疫，比如接狂犬疫苗是注射抗体的。总体上一般以接活疫苗为主，因为它能达到预防作用（物件是广大群众）。而接抗体是在抗原已进了人体之后才注射的，这样就立刻杀死抗原了（物件是被狗咬的人，等…）。而注射淋巴因子其物件只是细胞免疫缺陷的人。所以并不是以抗体血清为主要疫苗源，而是以活疫苗。

为什么要对实验小鼠进行抗原免疫处理

不用抗原处理，如何产生能够产生抗体的细胞？

为什么免疫组化要使用二抗动物来源作免疫血清

在免疫组化中用二抗同源的非免疫动物血清进行封闭的目的是为了减少非特异性结合.你所检测的标本是鼠的，如果你再用鼠的血清进行封闭的话,那么这个血清中就可能含有你所检测的目的蛋白,然后一抗就与之结合,干扰实验结果.而如果你用羊的血清进行封闭的话,那就起不到封闭的目的了,就是说就算这个封闭血清与一些非特异位点结合了，但是因为它是羊的，所以二抗同样会和它结合,进而出现假阳性的结果!所以最好用二抗同源的正常动物血清封闭

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