间充质干细胞三系分化96孔板（间充质干细胞p3代）

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间充质干细胞怎么培养成皮肤细胞

培养的细胞消化后计数，以低密度种96孔板，基本达到平均每孔不到1个细胞的密度。贴壁后（MSC是12h即可），在显微镜下观察，选择只有一个贴壁细胞的孔标记，为单克隆。待细胞达到一定数目后消化收集，可以做后续试验，基本上是保证细胞的纯度的方法，我们在体外诱导时用过。96孔板，平底，用于培养感觉比瓶子还要好，细胞形态可以保持的很好。

附图，孔内的单个细胞 h-MSC

什么是间质干细胞?什么是脐带血干细胞?与胚胎干细胞有什么不同?

间质干细胞解释如下：

间充质干细胞是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层和外胚层，属于多能干细胞，间充质干细胞最初在骨髓中发现，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。

脐带血干细胞解释如下：

脐带血的采集是在新生儿出生以后，取婴儿端3-8cm脐带储两把止血钳结扎、断脐，婴儿被抱走处理，贴近母端止血钳处消毒并将针头插入脐静脉，采集脐血。脐带血里头含有大量的干细胞，称为脐带干细胞；而干细胞其实是人体的主要细胞，人的身体可以说是由干细胞所组成。

脐带血干细胞与胚胎干细胞的区别如下：

1.

胚胎干细胞是早期胚胎或原始性腺中分离出来的一类细胞，脐带干细胞是脐带血里头含有的干细胞。

2.

进行胚胎干细胞研究就必须破坏胚胎，而胚胎是人尚未成形时在子宫的生命形式，而脐血采集是在胎盘、脐带与母体和胎儿完全分离以后进行的，因此对母亲和孩子没有任何不良影响。

96孔板一般接种多少间充质干细胞

总结下各种孔板细胞接种量 仅供参考

细胞培养瓶（板）生长面积容量与细胞数（大约）

96孔板       4~5X10 4          35mm培养皿           1X10 6

48 孔板      1.3X10 5          60mm培养皿           2.6X10 6

24孔板       2.5X10 5          100mm培养皿          7X10 6

12孔板       5X10   5          150mm培养皿          1.8X10 7

6孔板        1.2X10 6

细胞瓶面积        容量          工作体积         细胞数目

612.5cm2          25ml          2ml              5X10    5

25cm2             50ml          5ml              1X10    68

35cm2             75ml          10ml             2X10    6

75 cm2            250ml         15ml             X10     6

150cm2            700ml         40ml             1.1X10  7

补充：不同孔板所加培养液的液面都不宜太深，一般在2~3mm范围，结合不同孔的底面积就可算出各培养孔的适宜加液量（参考下表）。若加液量过多会影响气体（氧气）交换，而且在搬动过程中易溢出造成污染。具体所加细胞密度依实验的目的不同灵活掌握。

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