骨髓间充质干细胞采集（骨髓间充质干细胞原代培养实验报告）

在这篇文章中，我们还将讨论骨髓间充质干细胞采集和骨髓间充质干细胞原代培养实验报告的技术实现，以帮助你解决实际问题。

间充质干细胞移植都有哪些方式

间充质干细胞移植，指的是将间充质干细胞从自身采集，然后进行培养、纯化，再回输进患者体内用以治疗硬皮病、皮肌炎、红斑狼疮、类风湿、运动神经元病等免疫性疾病的一种最前沿的治疗方法。间充质干细胞在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为肾、脂肪、骨、软骨、肌肉、内皮等多种组织细胞，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于病变引起的组织器官损伤修复。

诺莱医学临床提示间充质干细胞的移植分为以下四个部分

第一步：对患者的整体状况进行评估，如果没有禁忌症如：感染、肾危象、心包大量积液等的情况下，进行细胞动员4－5天。

第二步：MSCs的采集（骨髓、脐带、脂肪和羊膜）

第三步：MSCs的分离、培养及扩增,大约20天左右

第四步：MSCs的移植:

1.静脉注射

2013年5月-2014 年4月，朱宁等人在诊治18例系统性红斑狼疮患者时，用分离培养后的间充质干细胞采用干细胞移植技术进行治疗。该干细胞移植治疗就是采用静脉输注的方式，移植方法如下：患者取仰卧位，首先取肘前部较粗血管，利用生理盐水建立静脉通道，然后将已复温好的装有间充质干细胞的干细胞袋接入静脉通道内，覆盖无菌纱布于穿刺部位，并注意控制滴速，一般干细胞悬液 30 ml于 2 小时内滴完，最后滴入生理盐水100 ml 以冲洗管道。为入选患者均完成1个疗程的治疗。结果证明应间充质移植治疗系统性红斑狼疮疗效肯定，且较为安全。

2.动脉注射

干细胞移植治疗糖尿病，是糖尿病治疗新疗法中的热门疗法，隆敏等人曾经用间充质干细胞移植方法治疗一位39岁的Ⅰ型糖尿病女性患者。移植过程为：患者进入手术室，寻找到供应胰腺的胰背动脉后，将间充质干细胞缓慢均匀注射入胰背动脉。结果该患者术后3个月内胰岛素剂量大幅度减少了58.54％，有望完全停用胰岛素。

3.多点混合移植

干细胞移植治疗糖尿病足的疗效被广泛认可，在众多临床案例中，部分研究采用混合移植的方式以求使干细胞在体内发挥的功效更加全面化。虞朝黎等人用间充质干细胞移植治疗17例缺血性糖尿病足患者，移植方法就是采用多点混合注射的方法，具体过程为：抽取间充质干细胞后分离，配成细胞混悬液；在手术室硬膜外麻醉后，无菌条件下，将干细胞悬液按3×75px间距进行肌肉注射，病变严重的按1×25px间距注射；肌肉注射的同时进行股动脉穿刺，放置导管，将部分干细胞悬液注入股动脉。

4.病灶部位注射

2007年至2011年王玉龙等人采用间充质干细胞移植治疗胫骨骨折骨不连患者11例，结果患者经间充质干细胞移植治疗胫骨骨折骨不连，在4-27个月，平均13个月中，X线片显示骨折愈合良好，疗效满意，有临床应用价值。移植方法为：在手术室X 线透视定位下，用14号骨穿针准确刺入胫骨骨不连部位,完全注入间充质干细胞悬浮液。此外，在应用间充质干细胞治疗小儿脑瘫的研究中，很多研究者也会选择患儿脑内移植、腰椎穿刺等与疾病相关的功能组织位点进行移植。

诺莱医学温馨提示：

①MSC在组织中的含量（细胞丰度）：脐带的含量毫无疑问为最高，羊膜和脂肪次之；而脐带血中含量极少，导致检测不到之事常用发生；

②MSC增殖能力：优于MSC具有年龄特性，脐带和羊膜来源的MSC具有明显的优势，脂肪和骨髓次之；

③免疫调节能力：脐带、羊膜和脂肪来源的MSC优于骨髓MSC，而胎盘MSC的免疫调节能力最差；

④分泌细胞因子谱：脐带MSC分泌细胞生长因子的总量明显高于骨髓MSC，但是不同来源的分泌细胞因子谱有明显的特点；

⑤由于具有来源获取方便和高增殖能力等特性，能培养获得大量的MSC细胞数足够满足临床治疗需要，使得脐带、羊膜和脂肪最适合作为MSC细胞治疗的组织来源。但是我们也必须认识到，不同的实验室、不同的分离方法及不同的培养体系，均可导致MSC的实验研究结果出现不一致性，如下图所示；即使是相同的来源，不同个体之间的间充质干细胞也出现功能上的异质性。

因此，我们必须对目前的研究结果和结论保持一定的谨慎态度，不排除将来的某天培养技术的突破，可以抵消组织来源的差异所导致的MSC功能的差异。

骨髓间充质干细胞如何取材

自然来源于骨髓，须充成体骨髓中提取间充质干细胞；一般不提倡从骨髓中提取间充质干细胞。

为什么说间充质干细胞很有存储的价值？在哪儿存比较好？

1、干细胞哪里来？

干细胞来源于人体的很多部位，以间充质干细胞为例，它可以来源于骨髓、脐带、胎盘，也可以来源于脂肪。我们现在最熟悉的储存方式，就是储存新生儿脐带、胎盘中的间充质干细胞。

研究发现，新生儿出生后带来的脐带胎盘中有非常丰富的干细胞。譬如，来自脐带的干细胞占5%到10%，主要是间充质干细胞；而来自胎盘的干细胞占约90%，包含大量的造血干细胞和丰富的间充质干细胞。而且，使用和提取干细胞对新生儿和妈妈都没有任何伤害，并且在用于干预各类难治重病时，有非常好的效果和潜力，因此也被称为人体的备份器！

2、储存干细胞有什么用？

间充质干细胞是目前医学界采用率很高的疾病治疗的 “原材料”，在抗衰老、提高健康水平、免疫调节、组织器官修复、再生医学以及未来应对各类难治疾病方向都有很大应用潜力。

目前，全球已批准了10多个干细胞药物上市，大部分都是与间充质干细胞相关。此外，关于干细胞的临床研究涉及上百种疾病，譬如干细胞干预骨关节病、糖尿病、帕金森症、视网膜病变、心脑血管疾病等。

3、如何选择靠谱的储存机构？

由于胎盘、脐带中干细胞的存储环境关系到宝宝及家人一生的健康，在选择干细胞存储机构的时候，一定要选择有核心细胞技术专利、权威认证的、“产学研”一体化的机构进行存储。并且干细胞对于其赖以生存的环境也有特殊的高要求、高标准。比如，采集的干细胞样本必须存放在无菌、特制的保温容器内，在特定的温度、条件下运输，才能保证种子细胞的活性；制备时对实验室的环境和实验员的技术有严苛的要求。这些细节都关乎着干细胞储存的品质。

间充质干细胞主要来源是？

间充质干细胞是什么：

间充质干细胞（Mesenchymal stem cell，MSC)来源于中胚层的一类多能干细胞，能分化为细胞之间的间质组织而得名，具有自我复制和分化潜能的干细胞共性。

脐带间充质干细胞

间充质干细胞来源：

间充质干细胞来源（脐带、骨髓、脂肪、脐带血、羊膜、胎盘、牙髓、外周血等），其中脐带来源的是临床应用最多的，因其来源广泛， 无需配型，感染率低， 无伦理问题， 分化潜能强，增殖能力强，采集方便等特点。

间充质干细胞来源

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骨髓间充质干细胞分离的方法有几种

骨髓基质细胞是存在于骨髓中的一类多能干细胞，具有分化成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞和其他几种结缔组织细胞（如腱细胞）。亦可转分化成心肌细胞和骨骼肌细胞。骨髓间充质干细胞现已被归为结缔组织成体干细胞。事实上，骨髓基质细胞中的间充质干细胞数量是很少的，约占细胞总数的10万分之一，其定向分化也不均一，现在越来越多的研究揭示骨髓间充质干细胞及其初步分化的祖细胞或称前体细胞(precusor,

progenitor

cells)具有一些特殊的表面蛋白特征；此外，干细胞具有多向分化及自我更新能力，其细胞复制分裂方式是不对称分裂，这明显不同于普通的细胞。通过贴壁法或percoll等细胞分离介质只能获得混合的骨髓基质细胞，只有应用免疫磁珠、流式细胞仪等将其进一步分离纯化后，才能称为骨髓间质干细胞。（河南省干细胞库）

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