小鼠胚胎成纤维细胞（小鼠胚胎成纤维细胞的作用）

我们将涵盖小鼠胚胎成纤维细胞和小鼠胚胎成纤维细胞的作用的所有方面，并试图探索两者之间的关系和区别。

小鼠成纤维细胞与胚胎成纤维细胞的区别

有区别。前一种是从成年小鼠身上提取，后一种是从小鼠胚胎中提取。后一种活性和繁殖能力应该更好。

小鼠胚胎成纤维细胞的培养

小鼠胚胎成纤维细胞(MEF) 作为原代培养细胞，其刺激增殖的能力强且可靠、易培养、来源丰富，常被用作干细胞培养的饲养层。一方面提供刺激干细胞增殖的各种因子，另一方面保持干细胞的未分化状态。虽然MEF传代次数有限，但可早期冻存一些，不断复苏，保持长期使用。MEF 的缺点是无法耐受G418 的筛选。替代方法是从持续表达neo抗性的小鼠品系或转基因品系来分离培养MEF 。利用各种转基因鼠培养的MEF 细胞还是各种基因功能研究的良好工具。

（一）材料

12.5~14.5d 的小鼠胚胎(3~6 只小鼠／次），培养皿（ 直径10cm), DMEM+10%新生牛血清， 15cm 或50cm 离心管（圆底）， PBS 配制的0.05％胰蛋白酶/EDTA0.02%消化液，手术刀、镊子、剪子等器械。

（二）操作步骤

1. 一般操作

(1) 在培养皿中，解剖出鼠胚，以Hanks 溶液消洗。

(2) 除掉四肢、大脑及内脏（肝脏） 。

(3) 用无菌Hanks 溶液＋PBS 漂洗3 次。

(4) 置培养皿中，用手术剪切碎。

(5) 将剪碎组织移入50ml 离心管中，加入约10ml 消化液。

(6) 37°C摇育10min （置水浴或孵育箱中）。

(7) 吸5ml 上清液放入另一50ml 离心管中，加等体积含10％新生牛血清的DMEM 培养液中和胰蛋白酶。

(8) 再加入4ml 消化液至原离心管（内含组织），颠倒摇动，10min 后再吸出5ml 上清液到另一离心管中，加入5ml 含10% 新生牛血清的DMEM 培养液。

(9) 重复上一步骤5 次左右，此时离心管中仅剩无法消化的软骨等。

(10) 离心50ml 离心管，加50ml 含10％新生牛血清的DMEM 培养液。

(11) 取适量移到培养皿或培养瓶中培养。

(12) 第二天换液，直到细胞长满（汇合），1 : 10 传代，再生长至合适密度时可进行冻存。

(13) 根据实验需要复苏细胞，由于MEF细胞传代数有限，实验时应尽可能保留相同代数的细胞进行平行实验。

2. 丝裂霉素处理或γ-射线处理 用作饲养层的MEF 细胞还须进行丝裂霉素处理或干射线处理，步骤如下。

（1） 丝裂霉素处理

复苏冻存的MEF 细胞(5×104个/cm2，保证用时满满一层，不留空间。

汇合状态下的MEF 加入新配制的含10％新生牛血清、10μg/ml 丝裂霉紊的DMEM 培养液， 37 °C 、5% CO2培养箱中培养2~3h 。

以PBS 彻底漂洗数次，胰蛋白酶消化，以每分钟1000 转的速率离心5min,收集沉淀，用新培养液悬浮，调整浓度为3×105g 个/ml。

将细胞接种于经明胶预处理的培养皿中。（明胶预处理： 0.1％明胶溶液浸泡2h, 移走多余的明胶，待自然干燥。）

(2)γ-射线处理

汇合状态的MEF 细胞，以30~ 100Gy 的γ－射线处理。

胰蛋白酶消化，收集细胞，离心（每分钟1000 转， 10min )、计数，接种到明胶预处理的培养皿中。Y-射线处理过的细胞也可以5×106个／ml 的浓度冻存起来。复苏后， 1 支冻存管可接种到4~5 块直径6cm 的培养皿中。

293T细胞为什么经常用于转染、蛋白质表达？

许多真核表达载体如pcDNA3.1中含有SV40病毒的复制起始位点，可以在表达SV40病毒T抗原的细胞系中复制，从而提高外源基因的表达水平。293T细胞就是一种表达SV40病毒T抗原的细胞系，它来源于人胚胎肾细胞293HEK。

经改造后在其中插入了T抗原，因此用293T细胞做转染可以获得较高的表达水平。 293T细胞也可以作为普通的哺乳细胞用于筛选稳定表达的细胞系，不过它贴壁性差，容易脱落，不利于筛选。 3T3细胞是小鼠胚胎成纤维细胞系，它具有明显的接触抑制作用，所以易于识别已发生转化的细胞。

293细胞是人肾上皮细胞系，有多种衍生株，比如HEK293，293T/17等，来源都是人胚胎肾细胞，其极少表达细胞外配体所需的内生受体，且比较容易转染，是一个很常用的表达研究外源基因的细胞株。

293T细胞由293细胞通过基因技术派生出的细胞系，是经过腺病毒E1A基因的转染，能表达SV40大T抗原，含有SV40复制起始点与启动子区。

扩展资料：

293T细胞的转染技术：

常规转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染（永久转染）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析。

一般来说，超螺旋质粒DNA转染效率较高，在转染后24-72小时内（依赖于各种不同的构建）分析结果，常常用到一些报告系统如荧光蛋白，β半乳糖苷酶等来帮助检测。后者也称稳定转染，外源DNA既可以整合到宿主染色体中，也可能作为一种游离体（episome）存在。

尽管线性DNA比超螺旋DNA转入量低但整合率高。外源DNA整合到染色体中概率很小，大约1/104转染细胞能整合，通常需要通过一些选择性标记，如来氨丙基转移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素B磷酸转移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反复筛选，得到稳定转染的同源细胞系。

参考资料来源：百度百科-T淋巴细胞

参考资料来源：百度百科-239细胞

参考资料来源：百度百科-转染

3T3-L1脂肪细胞是什么细胞

3t3-l1

小鼠胚胎成纤维细胞（前脂肪），这个细胞是小鼠的正常细胞，主要是进行肿瘤细胞研究的。

关于小鼠胚胎成纤维细胞和小鼠胚胎成纤维细胞的作用的介绍到此就结束了，不知道你从中找到你需要的信息了吗 ？如果你还想了解更多这方面的信息，记得收藏关注本站。